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2 종 이상의 서로 다른 표적 DNA에, 상보적으로 결합하는 공여 핵산 분자 및 가이드 RNA(guide RNA, gRNA)를 포함하는 CRISPR-Cas9 (Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats-CRISPR-associated nuclease 9) 시스템 기반 다중 유전자 편집 방법으로서,상기 2 종 이상의 서로 다른 표적 DNA에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 2 종 이상의 서로 다른 가이드 RNA의 5′-말단으로부터 1개 내지 3개의 뉴클레오타이드를 결실시키는 단계를 포함하는, CRISPR-Cas9 시스템 기반 다중 유전자 편집 방법
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제1항에 있어서,상기 가이드 RNA는, 상기 표적 DNA에 상보적인 20 내지 18개의 연속적 뉴클레오타이드로 이루어진 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는, CRISPR-Cas9 시스템 기반 다중 유전자 편집 방법
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제1항에 있어서,상기 가이드 RNA는 표적 DNA와 혼성화하는 crRNA(CRISPR RNA) 및 tracrRNA (transactivating crRNA)를 포함하는 이중 RNA (dual RNA), 또는 상기 crRNA 및 tracrRNA의 부분을 포함하고 표적 DNA와 혼성화하는 단일-사슬 가이드 RNA (sgRNA)인 것을 특징으로 하는, CRISPR-Cas9 시스템 기반 다중 유전자 편집 방법
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제3항에 있어서,상기 표적 DNA는 crRNA 또는 sgRNA와 상보적인 서열의 뉴클레오타이드 및 프로토스페이서-인접 모티프(protospacer-adjacent motif, PAM)를 포함하는 것을 특징으로 하는, CRISPR-Cas9 시스템 기반 다중 유전자 편집 방법
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제1항에 있어서,상기 공여 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태인 것을 특징으로 하는, CRISPR-Cas9 시스템 기반 다중 유전자 편집 방법
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제1항에 있어서,상기 공여 핵산 분자는 표적 DNA 상에 변형을 유발하는 것을 특징으로 하는,CRISPR-Cas9 시스템 기반 다중 유전자 편집 방법
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제5항에 있어서,상기 변형은 하나 이상의 뉴클레오타이드의 치환, 하나 이상의 뉴클레오타이드의 삽입, 하나 이상의 뉴클레오타이드의 결실, 녹아웃(knockout), 녹인(knockin), 내인성 핵산 서열의 상동, 이종상동성(endogenous) 또는 이종 핵산 서열로의 치환, 또는 이의 조합을 포함하는 것을 특징으로 하는,CRISPR-Cas9 시스템 기반 다중 유전자 편집 방법
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2 종 이상의 서로 다른 표적 DNA에, 상보적으로 결합하는 공여 핵산 분자 및 가이드 RNA(guide RNA, gRNA)를 포함하는 CRISPR-Cas9 시스템 기반 다중 유전자 편집용 조성물로서,상기 2 종 이상의 서로 다른 표적 DNA에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 2 종 이상의 서로 다른 가이드 RNA는 이의 5′-말단으로부터 2개의 뉴클레오타이드가 결실된 것을 특징으로 하는,CRISPR-Cas9 시스템 기반 다중 유전자 편집 방법
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2 종 이상의 서로 다른 표적 DNA에, 상보적으로 결합하는 공여 핵산 분자 및 가이드 RNA(guide RNA, gRNA)를 포함하는 CRISPR-Cas9 시스템 기반 다중 유전자 편집 효율 증가 방법으로서,상기 2 종 이상의 서로 다른 표적 DNA에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 2 종 이상의 서로 다른 가이드 RNA의 5′-말단으로부터 2개의 뉴클레오타이드를 결실시키는 단계를 포함하는, CRISPR-Cas9 시스템 기반 다중 유전자 편집 효율 증가 방법
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다음 단계를 포함하는, CRISPR-Cas9 시스템 기반의 다중 유전자가 편집된 대상체의 제조 방법:(a) 2 종 이상의 서로 다른 표적 DNA에 상보적으로 결합하고, 상기 2 종 이상의 서로 다른 표적 DNA 상에 변형을 유발하는 공여 핵산 분자를 제작하는 단계; (b) 상기 2 종 이상의 서로 다른 표적 DNA에 상보적인 뉴클레오타이드 서열을 포함하는, 2 종 이상의 서로 다른 가이드 RNA의 5′-말단으로부터 2개의 뉴클레오타이드가 결실된(truncated) 가이드 RNA를 제작하는 단계; 및 (c) 상기 (a) 단계의 공여 핵산 분자 및 상기 (b) 단계의 가이드 RNA를, 편집시키고자 하는 대상체에 형질전환시켜, 대상체의 표적 DNA를 편집하는 단계
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제10항의 다중 유전자가 편집된 대상체의 제조 방법에 의해 제조된, 다중 유전자가 편집된 대상체
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