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Ｇ-단백질 연관 수용체(ＧＰＣＲ)의 신호전달 억제제 또는촉진제의 검색방법 및 검색키트

  • 기술번호 : KST2015121057
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 G-단백질 연관 수용체(G-protein coupled receptor, 이하 GPCR이라 명명함)의 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색방법 및 검색키트에 관한 것으로, G-단백질과 GPCR 사이의 특이적 결합을 촉진하거나 억제하는 물질을 표면 플라스몬 공명법(SPR, surface plasmon resonance) 또는 면역 검정법으로 선별하는 검색 방법과 그 검색 키트의 발명이다. 본 발명의 구체적 적용예로는 GPCR의 일종인 세로토닌 수용체 6의 세포 내 3번째 루프인 iL3 (intracellular loop 3)을 포함하는 융합단백질, 상기 수용체와 상호작용하는 Gs 단백질의 α소단위체(Gαs)를 포함하는 융합단백질 및 상기 두 단백질 간 상호작용의 측정을 통하여 GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제를 검색하는 방법 및 이를 이용한 검색키트를 들 수 있다. 본 발명의 검색방법과 검색키트는 GPCR에 작용하는 새로운 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색에 유용하게 이용될 수 있으며 특히 세로토닌 수용체를 표적으로 한 항 정신병 치료제나 항 우울증제의 신약 후보물질을 저비용으로 쉽고 빠르게 검색하는데 이용될 수 있다. GPCR, 세로토닌 수용체 6, 검색방법, 검색키트
Int. CL G01N 33/68 (2006.01)
CPC G01N 33/6845(2013.01) G01N 33/6845(2013.01) G01N 33/6845(2013.01) G01N 33/6845(2013.01) G01N 33/6845(2013.01) G01N 33/6845(2013.01) G01N 33/6845(2013.01) G01N 33/6845(2013.01) G01N 33/6845(2013.01) G01N 33/6845(2013.01) G01N 33/6845(2013.01)
출원번호/일자 1020040045832 (2004.06.19)
출원인 한국과학기술연구원
등록번호/일자 10-0560122-0000 (2006.03.06)
공개번호/일자 10-2005-0120471 (2005.12.22) 문서열기
공고번호/일자 (20060313) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2004.06.19)
심사청구항수 17

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술연구원 대한민국 서울특별시 성북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 유연규 대한민국 서울특별시 노원구
2 이원규 대한민국 서울특별시 은평구
3 최윤희 대한민국 전라남도 나주시

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이원희 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술연구원 대한민국 서울특별시 성북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 특허출원서
Patent Application		 2004.06.19 수리 (Accepted) 1-1-2004-0265558-87
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2005.08.12 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2005.09.15 수리 (Accepted) 9-1-2005-0061176-19
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2005.10.11 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2005-0506936-55
5 의견서
Written Opinion		 2005.12.02 수리 (Accepted) 1-1-2005-0706125-33
6 명세서등보정서
Amendment to Description, etc.		 2005.12.02 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2005-0706138-26
7 등록결정서
Decision to grant		 2006.03.03 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2006-0130401-12
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2009.12.15 수리 (Accepted) 4-1-2009-5247056-16
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.02.19 수리 (Accepted) 4-1-2014-5022002-69
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번호 청구항
1 1
G-단백질 연관 수용체(G-protein coupled receptor, GPCR)의 세포내 루프(intracellular loop) 부위를 포함하는 한 융합단백질과 G-단백질(G-protein)의 α 소단위체(subunit) Gα를 포함하는 다른 융합단백질 사이에 이루어지는 특이적 결합 정도를 표면 플라스몬 공명법(SPR, Surface Plasmon Resonance) 또는 면역검정법(immunoassay)으로 측정함으로써 후보 물질을 선별하는 GPCR 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색방법
2 2
제 1항에 있어서, 상기 GPCR의 세포내 루프 부위를 포함하는 융합단백질과 Gα를 포함하는 융합단백질은 각각 세로토닌 수용체 6의 세포내 루프 3 (iL3) 부위를 포함하는 융합단백질과, 촉진성(stimulatory) G-단백질인 Gs의 α 소단위체 (Gαs)를 포함하는 융합단백질인 것을 특징으로 하는 GPCR 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색방법
3 3
제 2항에 있어서, 상기 세로토닌 수용체 6의 iL3 부위를 포함하는 융합단백질은 단백질의 정제를 용이하게 하는 부위와 iL3 부위로 구성되는 것을 특징으로 하는 GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색방법
4 4
제 3항에 있어서, 상기 iL3 부위를 포함하는 융합단백질의 정제를 용이하게 하는 부위는 GST(Glutathione-S-Transferase)인 것을 특징으로 하는 GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색방법
5 5
제 2항에 있어서, 상기 Gαs를 포함하는 융합단백질은 정제를 용이하게 하는 부위 및 Gαs로 구성되는 것을 특징으로 하는 GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색방법
6 6
제 5항에 있어서, 상기 Gαs를 포함하는 융합단백질의 정제를 용이하게 하는 부위가 N-말단의 6 개의 히스티딘 표지(tag)인 것을 특징으로 하는 GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색방법
7 7
ⅰ) Gα를 포함하는 융합단백질을 용기에 흡착시키는 단계;ⅱ) GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제 후보 물질을 처리하는 단계;ⅲ) GPCR의 세포내 루프 부위를 포함하는 융합단백질을 첨가하는 단계;ⅳ) 상기 iii) 단계의 혼합물에 상기 세포내 루프 부위를 포함하는 융합단백질에 대한 표지항체 접합체를 결합시키는 단계;ⅴ) 결합한 표지항체 접합체를 이용하여 발색시키는 단계 및ⅵ) 상기 v)단계의 발색 정도와 후보 물질을 첨가하지 않았을 때 상기 두 융합단백질 사이의 결합에 의한 발색 정도를 비교하여 GPCR 결합의 촉진 또는 억제 정도를 판단하는 단계 (이때 후보 물질을 첨가하지 않은 경우는 상기 i) 내지 v) 단계를 동일한 조건으로 적용하되, 상기 ii) 단계를 제외한다)를 포함하는 GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색방법
8 8
ⅰ) Gα를 포함하는 융합단백질을 SPR 측정용 센서 칩에 흡착시키는 단계; ⅱ) 흡착된 Gα를 포함하는 융합단백질에 GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제 후보물질과 GPCR의 세포내 루프 부위를 포함하는 융합단백질을 첨가하는 단계; iii) SPR 측정 장치로 상기 센서에 빛을 조사하여 그 표면 플라스몬 공명 신호를 얻는 단계 및iv) 상기 iii)의 공명 신호와 후보 물질을 첨가하지 않았을 때 상기 두 융합단백질 사이의 결합에 의한 공명 신호를 비교하여 GPCR 결합의 촉진 또는 억제 정도를 판단하는 단계(이때 후보 물질을 첨가하지 않은 경우는 상기 i) 내지 iv) 단계를 동일한 조건으로 적용하되, 상기 ii) 단계 중 후보 물질을 첨가 부분을 제외한다)를 포함하는 GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색방법
9 9
i) Gα를 포함하는 융합단백질 및 GPCR의 세포 내 루프 부위를 포함하는 융합단백질; ii) 표지항체 접합체; 및, iii) 발색제를 함유하는 기질용액을 포함하는 GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색키트
10 10
제 9항에 있어서, 상기 단계 i)의 Gα는 Gαs이고, GPCR의 세포 내 루프 부위는 세로토닌 수용체 6의 iL3인 것을 특징으로 하는 GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색키트
11 11
제 9항에 있어서, 상기 단계 ii)의 표지항체 접합체는 항 GST 항체-HRP 접합체(anti-GST Ab HRP-conjugate)인 것을 특징으로 하는 GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색키트
12 12
서열번호 12로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 GST-iL3 융합단백질
13 13
제 12항의 GST-iL3 융합단백질을 코딩하는 서열번호 11의 유전자를 포함하는 발현벡터 pGST-iL3
14 14
서열번호 14로 기재되는 아미노산 서열을 갖는 His-Gαs 융합단백질
15 15
제 14항의 His-Gαs 융합단백질을 코딩하는 서열번호 13의 유전자를 포함하는 발현벡터 pH-Gαs
16 16
서열번호 15로 기재되는 염기서열을 갖는 GST-ApLZ-iL3 유전자를 포함하는 발현벡터 pGST-ApLZ-iL3
17 17
제8항에서 iii) 단계의 SPR 측정장치는 Biacore社 SPR 측정 시스템인 것을 특징으로 하는 GPCR의 신호전달 억제제 또는 촉진제의 검색방법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
국가 R&D 정보가 없습니다.