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다음 단계를 포함하는 특정 위치가 변형된(modified) 목적 단백질의 제조방법:(a) 목적 단백질의 특정 위치에 포스포세린(phosphoserine, Sep)을 첨가하는 단계;(b) 상기 포스포세린이 첨가된 목적 단백질에 염기(alkiali)를 처리하여 포스포세린을 디하이드로알라닌(dehydroalanine, Dha)으로 치환하여 활성화시키는 단계; 및 (c) 상기 Dha와 번역후변형(post translational modification, PTM) 작용기(moiety)를 함유한 할로겐화합물을 아연, 구리, 철, 금, 은, 수은, 코발트, 망간 및 니켈로 구성된 군에서 선택되는 2 이상의 전이금속 촉매의 존재 하에 반응시켜, 번역후변형 작용기를 탄소-탄소 결합시켜 변형된 단백질을 수득하는 단계
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제1항에 있어서, 상기 번역후변형 작용기는 아실레이션(acylation), 아세틸레이션(acetylation), 모노메틸레이션(mono-methylation), 다이메틸레이션(di-methylation), 트라이-메틸레이션(tri-methylation), 아미데이션(amidation), 뷰티릴레이션(butyrylation), 카복실레이션(carboxylation), 클라이코실레이션(glycosylation), 포밀레이션(formylation), 하이드록실레이션(hydroxylation), 아오디네이션(iodination), 옥시데이션(oxidation), 포스포릴레이션(phosphorylation), 프로피오닐레이션(propionylation), 석시닐레이션(succinylation), 설페이션(sulfation), 글라이케이션(glycation), 카보닐레이션(carbonylation), 포밀레이션(formylation), 니트로실레이션(nitrosylation), 리피데이션(lipidation), 바이오티닐레이션(biotinylation) 및 페길레이션(pegylation) 으로 구성된 군에서 선택되는 반응으로 생성되는 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 포스포세린의 첨가는 목적 단백질의 mRNA에서 최소한 하나의 코돈을 인식하는 tRNASep과 상기 tRNASep에 포스포세린(phosphoserine, Sep)을 아미노아실화 시키는데 특화된 O-포스포세릴-tRNA 합성효소(O-phosphoseryl-tRNA synthetase, SepRS) 변이체 및 상기 tRNASep과 SepRS 복합체를 탈아실화로부터 보호해주는 Elongation factor Tu(EF-Tu) 변이체를 이용하여, 목적 단백질을 코딩하는 mRNA를 발현하는 단계를 포함하여 수행되는 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조 방법
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제4항에 있어서, 상기 SepRS 변이체는 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되는 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조 방법
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제4항에 있어서, 상기 Ef-Tu 변이체는 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되는 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조 방법
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제4항에 있어서, 상기 tRNASep은, 서열번호 3의 염기서열로 표시되는 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 염기는 수산화리튬(LiOH), 수산화바륨(Ba(OH)2), 수산화스트론튬(Sr(OH)2), 수산화마그네슘(Mg(OH)2), 수산화칼슘(Ca(OH)2), 수산화라듐(Ra(OH)2), 및 수산화베릴륨(Be(OH)2)로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조 방법
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제1항에 있어서, 상기 탄소-탄소 결합은 목적 단백질이 히스톤일 경우, pH 4
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제1항에 있어서, 상기 번역후변형 작용기는 하기 화학식 1로 표시되는 화합물인 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조방법:화학식 1: R-X여기서 R은 수소 원자, 알킬기, 시클로알킬기, C2-C6 알케닐기, C2-C6 알키닐기, 알콕시기, C1-C6 알킬술포닐기, C1-C6 알킬카르보닐기, C1-C6 알콕시카르보닐기, C3-C6 시클로알킬카르보닐기, 카르복시기, 히드로카르보닐기, 아미노기, 알킬아미노기, 아릴아미노기, 알콕시카르보닐아미노기, 아릴옥시카르보닐아미노기, 히드로카르보닐아미노기, 알킬카르보닐아미노기, 아릴카르보닐아미노기, 알킬티오기, 아릴티오기, 시아노기, 여기서 알킬기는 C1-C6, 알콕시기는 C1-C6, 아릴기는 C6-C14임, 포스포릴기, 석시닐기, 포르밀기, 또는 아실기이며,X는 할로겐이다
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제13항에 있어서, 상기 화합물은 3-아이오도-N-메틸프로판-1-아민 하이드로클로라이드(3-Iodo-N-methylpropan-1-amine hydrochloride), 3-아이오도-N-N-다이메틸프로판-1-아민 하이드로클로라이드(3-Iodo-N-N-dimethylpropan-1-amine hydrochloride), 3-아이오도-N-N-N-트라이메틸프로판-1-아민 하이드로클로라이드(3-Iodo-N-N-N-trimethylpropan-1-amine hydrochloride), N-(3-아이오도프로필)포름아마이드(N-(3-iodopropyl)formamide), N-(3-아이오도프로필)아세트아마이드(N-(3-Iodopropyl)acetamide), 5-(다이메틸아미노)-N-(2-((3-아이오도프로필)아미노)에틸)나프탈렌-1-솔폰아마이드 하이드로클로라이드)(5-(dimethylamino)-N-(2-((3-iodopropyl)amino)ethyl)naphtalene-1-sulfonamide hydrochlaride)), 아이오도부탄(iodobutane), 2-아이오도프로판(2-iodopropane), 2-아이오도-2-메틸프로판(2-iodo-2-methylpropane), 1-아이오도부탄(1-iodobutane), 아이오도사이클로펜탄(iodocyclopentane), 3-아이오도프로피오닉 산(3-iodopropionic acid) 및 테트-뷰틸(4-아이오도뷰톡시)다이메틸실렌(tert-butyl(4-iodobutoxy)dimethylsilane)으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조방법
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제1항에 있어서, 상기 c) 단계는 계면활성제와 테트라메틸에틸렌다이아민(tetramethylethylenediamine, TMEDA)의 존재 하에 진행하는 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조방법
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다음 단계를 포함하는 특정 위치에 형광 표지된 목적 단백질의 제조방법:(a) 목적 단백질의 특정 위치에 포스포세린(phosphoserine, Sep)을 첨가하는 단계;(b) 상기 목적 단백질에 염기(alkiali)를 처리하여 포스포세린을 디하이드로알라닌(dehydroalanine, Dha)으로 치환하여 활성화시키는 단계; 및 (c) 상기 Dha와 형광표지를 함유한 할로겐화합물을 아연, 구리, 철, 금, 은, 수은, 코발트, 망간 및 니켈로 구성된 군에서 선택되는 2 이상의 전이금속 촉매의 존재 하에 반응시켜, 번역후변형 작용기를 탄소-탄소 결합시켜 변형된 단백질을 수득하는 단계
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제18항에 있어서, 상기 할로겐화합물은 5-(다이메틸아미노)-N-(2-((3-아이오도프로필)아미노)에틸)나프탈렌-1-솔폰아마이드 하이드로클로라이드)(5-(dimethylamino)-N-(2-((3-iodopropyl)amino)ethyl)naphtalene-1-sulfonamide hydrochlaride))인 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조방법
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제18항에 있어서, 상기 (a) 단계의 포스포세린의 첨가는 목적 단백질의 mRNA에서 최소한 하나의 코돈을 인식하는 tRNASep과 상기 tRNASep에 포스포세린(phosphoserine, Sep)을 아미노아실화 시키는데 특화된 O-포스포세릴-tRNA 합성효소(O-phosphoseryl-tRNA synthetase, SepRS) 변이체 및 상기 tRNASep과 SepRS 복합체를 탈아실화로부터 보호해주는 Elongation factor Tu(EF-Tu) 변이체를 이용하여, 목적 단백질을 코딩하는 mRNA를 발현하는 단계를 포함하는 방법에 의해 수행되는 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조 방법
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제18항에 있어서, 상기 SepRS 변이체는 서열번호 1의 아미노산 서열로 표시되고, 상기 Ef-Tu 변이체는 서열번호 2의 아미노산 서열로 표시되며, 상기 tRNASep은, 서열번호 3의 염기서열로 표시되는 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조 방법
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제18항에 있어서, 상기 (b) 단계의 염기는 수산화리튬(LiOH), 수산화바륨(Ba(OH)2), 수산화스트론튬(Sr(OH)2), 수산화마그네슘(Mg(OH)2), 수산화칼슘(Ca(OH)2), 수산화라듐(Ra(OH)2), 및 수산화베릴륨(Be(OH)2)로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 목적 단백질의 제조 방법
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