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인산화세린의 선택적 첨가를 통한 맞춤형 인산화 단백질 생산기술

  • 기술번호 : KST2014063091
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 활성이 증가한 SepRS(O-phosphoseryl-tRNA synthetase) 변이체 및 EF-Tu변이체를 이용하여 인산화된 단백질을 제조하는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 목적 단백질이나 폴리펩티드의 mRNA에서 최소한 하나의 코돈을 인식하는 tRNASep과 분자진화기법을 통해 선별된 tRNASep에 포스포세린(phosphoserine, Sep)을 아미노아실화 시키는데 특화된 O-포스포세릴-tRNA 합성효소(O-phosphoseryl-tRNA synthetase, SepRS) 변이체 및 tRNASep과 SepRS 복합체를 탈아실화로부터 보호해주는 EF-Tu 변이체를 이용하여, 특정 위치에 포스포세린을 함입하여 인산화 단백질을 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, SepRS 및 EF-Tu 변이체를 이용하여 인산화 단백질을 L 당 mg 수율로 생산할 수 있어, 인산화효소를 포함한 다양한 인산화단백질의 생산, 항체 생산, 단백질 칩의 제조, 신약 개발을 위한 세포 기반 스크리닝 등에 유용하다.
Int. CL C12N 9/00 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/52 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01)
CPC
출원번호/일자 1020130053365 (2013.05.10)
출원인 한국과학기술원
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2014-0133744 (2014.11.20) 문서열기
공고번호/일자
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 거절
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호 1020160052369;
심사청구여부/일자 Y (2013.05.10)
심사청구항수 25

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 박희성 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이처영 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, **층 (역삼동, 윤익빌딩)(*T국제특허법률사무소)
2 장제환 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, **층 (역삼동, 윤익빌딩)(*T국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
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번호, 서류명, 접수/발송일자, 처리상태, 접수/발송일자의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 행정처리 표입니다.
번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2013.05.10 수리 (Accepted) 1-1-2013-0416102-91
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2013.12.26 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2014.02.13 수리 (Accepted) 9-1-2014-0014493-97
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2014.07.11 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0475582-80
5 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2014.09.11 수리 (Accepted) 1-1-2014-0861421-01
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2014.09.25 수리 (Accepted) 1-1-2014-0911530-86
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2014.09.25 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2014-0911531-21
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157968-69
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157993-01
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5158129-58
11 최후의견제출통지서
Notification of reason for final refusal		 2015.02.27 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2015-0141660-99
12 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2015.04.21 수리 (Accepted) 1-1-2015-0386955-39
13 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2015.04.21 보정승인 (Acceptance of amendment) 1-1-2015-0386958-76
14 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2015.08.28 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2015-0589830-38
15 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2015.10.28 수리 (Accepted) 1-1-2015-1048720-13
16 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2015.10.28 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2015-1048721-58
17 거절결정서
Decision to Refuse a Patent		 2015.12.28 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2015-0903017-13
18 [법정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Extension of Legal Period] Request for Extension of Period (Reduction, Expiry Reconsideration)		 2016.01.27 수리 (Accepted) 7-1-2016-0004735-73
19 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2016.02.26 수리 (Accepted) 1-1-2016-0192083-26
20 [명세서등 보정]보정서(재심사)
Amendment to Description, etc(Reexamination)		 2016.02.26 보정각하 (Rejection of amendment) 1-1-2016-0192093-83
21 거절결정서
Decision to Refuse a Patent		 2016.03.31 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0239453-09
22 보정각하결정서
Decision of Rejection for Amendment		 2016.03.31 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0239452-53
23 [분할출원]특허출원서
[Divisional Application] Patent Application		 2016.04.28 수리 (Accepted) 1-1-2016-0411286-14
24 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2019-5081392-49
25 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.05.15 수리 (Accepted) 4-1-2020-5108396-12
26 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.06.12 수리 (Accepted) 4-1-2020-5131486-63
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
서열번호 17의 아미노산 서열에서 K347E, N352D, E412S, E412D, E414I, E414M, E414W, P495R, P495S, I496R, I496S 및 L512I 중 하나 이상의 변이를 가지는 것을 특징으로 하는 SepRS 변이체
2 2
제1항에 있어서, 상기 SepRS 변이체는 F452L, E481D, 및 V532A 중 하나 이상의 변이를 추가로 가지는 것을 특징으로 하는 SepRS 변이체
3 3
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 SepRS 변이체는 서열번호 1 내지 4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 SepRS 변이체
4 4
제1항 또는 제2항 중 어느 한 항의 SepRS 변이체를 코딩하는 유전자
5 5
제4항에 있어서, 서열번호 1 내지 4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 코딩하는 유전자
6 6
서열번호 19의 아미노산 서열에서 H67R, E216V, E216L, E216T, E216A, E216R, E216C, E216Y, D217G, F219Y, T229S, T229A, W274A 및 W274N 중 하나 이상의 변이를 가지는 것을 특징으로 하는 EF-Tu 변이체
7 7
제6항에 있어서, 상기 EF-Tu 변이체는 서열번호 6 내지 14 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 EF-Tu 변이체
8 8
제6항의 EF-Tu 변이체를 코딩하는 유전자
9 9
제8항에 있어서, 서열번호 6 내지 14 중 어느 하나의 아미노산 서열을 코딩 하는 유전자
10 10
목적 단백질이나 폴리펩티드의 mRNA에서 최소한 하나의 코돈을 인식하는 tRNASep과 tRNASep에 포스포세린(phosphoserine, Sep)을 아미노아실화 시키는데 특화된 제1항의 SepRS 변이체 및 tRNASep과 SepRS 복합체를 탈아실화로부터 보호해주는 제6항의 EF-Tu 변이체를 이용하여, 시스템 내에서 목적 단백질을 코딩하는 mRNA를 발현하는 단계를 포함하는, 특정 위치에 포스포세린을 함입하여 인산화 단백질을 제조하는 방법
11 11
제10항에 있어서, 상기 SepRS 변이체는 F452L, E481D, 및 V532A 중 하나 이상의 변이를 추가로 가지는 것을 특징으로 하는 인산화 단백질을 제조하는 방법
12 12
제 10항에 있어서, 상기 SepRS 변이체는 서열번호 1 내지 4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 인산화 단백질을 제조하는 방법
13 13
제10항에 있어서, 상기 EF-Tu 변이체는 서열번호 6 내지 14 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 인산화 단백질을 제조하는 방법
14 14
제10항에 있어서, 상기 tRNASep은, Methanocaldococcus jannaschii로부터 유래하는 것을 특징으로 하는 인산화 단백질을 제조하는 방법
15 15
제14항에 있어서, 상기 tRNASep은, 서열번호 16의 염기서열로 표시되는 것을 특징으로 하는 인산화 단백질을 제조하는 방법
16 16
tRNASep을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 제1항의 SepRS 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 제6항의 EF-Tu 변이체를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 먼저 혹은 목적 단백질이나 폴리텝티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 함께 생체 외(in vitro)에서 전사/발현시켜 인산화된 목적 단백질을 제조하는 방법
17 17
tRNASep을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 제1항의 SepRS를 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 제6항의 EF-Tu을 코딩하는 폴리뉴클레오티드, 목적 단백질이나 폴리텝티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 포스포세린을 포함하는 인산화 단백질 제조 키트
18 18
제1항의 SepRS 변이체를 코딩하는 유전자, 제6항의 EF-Tu을 변이체를 코딩하는 유전자, 목적 단백질이나 폴리펩티드의 mRNA에서 최소한 하나의 코돈을 인식하는 tRNASep, 및 목적 단백질을 코딩하는 유전자가 도입되어 있는 재조합 미생물
19 19
제18항에 있어서, 상기 SepRS 변이체는 F452L, E481D, 및 V532A 중 하나 이상의 변이를 추가로 가지는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
20 20
제18항에 있어서, 상기 SepRS 변이체는 서열번호 1 내지 4 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
21 21
제18항에 있어서, 상기 EF-Tu 변이체는 서열번호 6 내지 14 중 어느 하나의 아미노산 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
22 22
제18항에 있어서, 상기 tRNASep은, 서열번호 16의 염기서열로 표시되는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
23 23
제18항에 있어서, 상기 미생물은 세균, 고세균 및 진핵세포로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
24 24
제18항에 있어서, 상기 미생물은 대장균인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
25 25
제18항의 재조합 미생물을 배양하여 목적 단백질의 특정 위치에 포스포세린이 함입되어 있는 인산화된 목적 단백질을 발현시키는 단계; 및 상기 발현된 인산화 목적 단백질을 회수하는 단계를 포함하는 인산화된 목적 단백질의 제조방법
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 기초과학연구부 한국과학기술원 중견연구자사업(핵심) 효모내 인산화 및 아미노산 합유 변형 단백질의 생합성 및 기능 연구