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모세관등전집중-중공사흐름장흐름분획법을 이용한 단백질분리장치 및 분리방법

  • 기술번호 : KST2014020468
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 단백질 시료를 pI별로 1차 분리하는 모세관등전집중부(2), 상기 모세관등전집중부(2)의 일측에 연결설치되어 1차 분리된 단백질을 2차로 분리하는 중공사흐름장흐름분획부(4)를 포함하는 단백질 분리장치에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 단백질을 pI와 분자량의 크기 순서에 따라 분리할 수 있으며, 단백질 분리시 단백질들이 변성되지 않을 뿐만 아니라, 단백질을 분리 회수한 뒤 회수된 단백질을 효소 가수분해 처리할 경우 펩타이드의 분석에 나노유속 액체크로마토그래피-전자분무이온화-탠덤질량분석법을 적용하여 단백질 식별을 직접 이용할 수 있는 효과가 있다. 단백질 분리, 모세관등전집중, 중공사흐름장흐름분획
Int. CL C12M 1/00 (2011.01) C07K 1/14 (2011.01)
CPC
출원번호/일자 1020060041596 (2006.05.09)
출원인 연세대학교 산학협력단
등록번호/일자 10-0792683-0000 (2008.01.02)
공개번호/일자 10-2007-0109088 (2007.11.15) 문서열기
공고번호/일자 (20080109) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2006.05.09)
심사청구항수 14

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 연세대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 서대문구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 문명희 대한민국 경기 성남시 분당구
2 강덕진 대한민국 서울 은평구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이세진 대한민국 서울특별시 강남구 역삼로 *길 **, 신관 *층~*층, **층(역삼동, 광성빌딩)(특허법인다나)

최종권리자

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1 연세대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 서대문구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 특허출원서
Patent Application
2006.05.09 수리 (Accepted) 1-1-2006-0324886-34
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2007.01.09 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2007.02.09 수리 (Accepted) 9-1-2007-0006497-05
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2007.04.30 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2007-0236854-78
5 의견서
Written Opinion
2007.06.26 수리 (Accepted) 1-1-2007-0462886-72
6 명세서등보정서
Amendment to Description, etc.
2007.06.26 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2007-0462885-26
7 등록결정서
Decision to grant
2007.11.30 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2007-0648996-49
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2011.12.15 수리 (Accepted) 4-1-2011-5252006-10
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2013.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2013-5062749-37
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2013.06.24 수리 (Accepted) 4-1-2013-5088566-87
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2014.09.25 수리 (Accepted) 4-1-2014-5114224-78
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번호 청구항
1 1
단백질 시료를 pI별로 1차 분리하기 위해 등전집중용 모세관; 상기 등전집중용 모세관의 종단 일측에 연결설치된 제 1 연결부재; 상기 제 1 연결부재의 일측에 연결설치되어 단백질 시료 및 양쪽성 전해질 혼합물을 주입하는 제 1 주입펌프; 상기 제 1 연결부재의 일측에 연결설치된 제 2 연결부재; 상기 제 2 연결부재의 일측에 연결설치되어 양전해질 용액을 주입하는 제 2 주입펌프; 상기 제 2 연결부재의 일측에 연결설치된 양극; 상기 제 1 연결부재가 연결설치된 모세관 일측 종단에 대향되는 타측 종단에 연결설치된 제 3 연결부재; 상기 제 3 연결부재의 일측에 연결설치된 제 4 연결부재; 상기 제 4 연결부재의 일측에 연결설치된 음극 전해질 저장부재 및 상기 음극 전해질 저장부재가 연결설치된 제 4 연결부재의 일측에 대향되는 타측에 연결설치된 음극을 포함하도록 구성된 모세관등전집중부와 상기 모세관등전집중부의 일측에 연결설치되어 1차 분리된 단백질을 2차로 분리하는 중공사흐름장흐름분획부를 포함하는 단백질 분리장치
2 2
삭제
3 3
제 1항에 있어서, 상기 등전집중용 모세관이 테프론 모세관인 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
4 4
제 1항에 있어서, 상기 제 3 연결부재 및 제 4 연결부재가 분자량투과한계 약 10kDa의 반투막이 구비된 모세관에 의하여 연결설치되는 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
5 5
제 1항에 있어서, 상기 중공사흐름장흐름분획부가 모세관등전집중부의 제 3 연결부재의 일측에 연결설치되어 모세관등전집중부에서 분리된 단백질 시료가 유입되는 제 1 밸브; 상기 제 1 밸브의 일측에 연결설치된 중공사막; 상기 제 1 밸브가 연결설치된 중공사막의 일측에 대향되는 타측에 연결설치된 검출기; 상기 제 1 밸브 및 상기 제 1 밸브에 연결설치된 중공사막의 일측 종단에 대향되는 타측 종단에 연결설치되고 그 내부에 완충용액이 저장되어 제 1 밸브 및 중공사막이 일측으로 완충용액을 제공하는 완충용액 저장부재; 상기 완충용액 저장부재에 연결설치되어 저장된 완충용액을 외부로 공급하는 공급펌프를 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
6 6
제 5항에 있어서, 상기 중공사흐름장흐름분획부가 완충용액 저장부재로부터 배출되는 완충용액의 이동경로를 두 개의 흐름경로로 분리한 뒤 각각의 흐름경로에 제 2 밸브 및 제 3 밸브를 각각 연결시키고, 상기 제 2 밸브의 일측으로 제 1 압력밸브 및 제 1 밸브를 순차적으로 연결시키고, 상기 제 3 밸브의 일측은 제 1 밸브가 연결설치된 중공사막의 일측에 대향되는 타측 종단에 연결설치된 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
7 7
제 5항 또는 제 6항에 있어서, 상기 제 1 밸브와 중공사막 사이에 구비되어 제 1 밸브로부터 유입되는 단백질 및 시료를 중공사막으로 이동시키는 경로를 제공하는 동시에 그 일측이 방사흐름과 연결설치된 제 5 연결부재를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 분리장치
8 8
제 5항 또는 제 6항에 있어서, 상기 중공사막이 폴리스티렌설포네이트, 폴리비닐클로라이드, 폴리아크릴로나이트릴 또는 이들의 혼합물로 이루어진 것을 특징으로 하는 단백질 처리장치
9 9
제 5항 또는 제 6항에 있어서, 상기 제 1 밸브에 시료루프가 더 구비된 것을 특징으로 하는 단백질 처리장치
10 10
제 5항 또는 제 6항에 있어서, 상기 제 1 밸브가 6-포트 밸브인 것을 특징으로 하는 단백질 처리장치
11 11
ⅰ) 분리분석하고자 하는 단백질 시료와 양쪽성 전해질 용액 혼합물을 제 1 주입펌프에 채운 후 등전집중용 모세관에 상기 혼합물을 공급하는 단계; ⅱ) 상기 등전집중용 모세관에 10 내지 50분간 200 내지 700V/cm의 전기장을 걸어 등전집중시킨 뒤 모든 분리가 종료될 때까지 200 내지 700V/cm의 전기장을 유지하는 단계; ⅲ) 제 2 주입펌프에 양전해질 용액을 채운 후 이를 등전집중용 모세관으로 주입하여 등전집중된 단백질 분취액을 제 1 밸브로 이동시켜 시료루프에 채우는 단계; ⅳ) 완충용액 저장부재의 일측에 연결설치된 공급펌프를 작동시켜 완충용액 저장부재에 저장된 완충용액을 제 1 밸브로 공급하여 상기 시료루프에 채워진 단백질 분취액을 중공사막으로 공급하는 동시에 상기 제 1 밸브와 연결설치된 중공사막의 종단 일측에 대향되는 타측 종단으로 완충용액을 공급하여 평형을 유지하는 단계; 및 ⅴ) 상기 단계 ⅳ)의 평형이 종료된 후 제 3 밸브를 폐쇄한 뒤 완충용액 저장부재의 완충용액을 제 1 밸브를 통해 중공사막으로 유입되도록 하여 흐름장흐름분획법으로 분자량이 작은 단백질로부터 분자량이 큰 단백질 순서로 단백질을 분리하여 검출기로 유입시키는 단계를 포함하는 단백질 분리방법
12 12
제 11항에 있어서, 상기 단계 v)의 후단으로 전자분무이온화 질량분석기를 직접 연결하여 분석하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 분리방법
13 13
제 11항에 있어서, 상기 단계 v)의 후단으로 분리된 단백질 시료를 회수하여 프로테옴을 분석하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 단백질 분리방법
14 14
제 11항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 ⅲ)의 시료루프에 채워지는 등전집중된 단백질의 부피가 1 내지 10㎕로 조절하되 원하는 pI 영역의 크기만큼 부피를 조절하는 것을 특징으로 하는 단백질 분리방법
15 15
제 11항 내지 제 13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 ⅳ)에서 상기 제 1 밸브 및 상기 제 1 밸브와 연결설치된 중공사막의 종단 일측에 대향되는 타측 종단으로 흐르는 완충용액의 유속 비율이 1:9 내지 5:5로 조절되고, 중공사막의 양쪽 종단으로 유입되는 완충용액은 중공사막의 입구로부터 전체 길이의 약 10 내지 50%가 되는 위치에서 집중되게 되며, 상기 단백질 분취액 시료가 중공사막의 입구로부터 전체 길이의 약 10 내지 50%가 되는 위치에서 평형을 이루게 되는 것을 특징으로 하는 단백질 분리방법
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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 EP01987053 EP 유럽특허청(EPO) FAMILY
2 JP04866430 JP 일본 FAMILY
3 JP21524818 JP 일본 FAMILY
4 US08585884 US 미국 FAMILY
5 US20080264792 US 미국 FAMILY
6 WO2007129806 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

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1 EP1987053 EP 유럽특허청(EPO) DOCDBFAMILY
2 EP1987053 EP 유럽특허청(EPO) DOCDBFAMILY
3 JP2009524818 JP 일본 DOCDBFAMILY
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5 JP2009524818 JP 일본 DOCDBFAMILY
6 JP4866430 JP 일본 DOCDBFAMILY
7 US2008264792 US 미국 DOCDBFAMILY
8 US8585884 US 미국 DOCDBFAMILY
9 WO2007129806 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
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