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혈액응고인자 13과 트랜스글루타미나제 2 활성도 동시 측정 방법

  • 기술번호 : KST2015009167
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 피브리노겐 어레이를 사용하여 하나의 샘플에서 혈액응고인자 13(FXIII) 및 트랜스글루타미나제 2 (TG2)의 트랜스아미네이션 활성을 동시에 측정할 수 있는 온-칩 활성도 측정 시스템 및 상기 측정 시스템에 효과적으로 사용될 수 있는 혈액응고인자 13- 및 트랜스글루타미나제 2- 특이적인 활성도 측정에 최적화된 반응 조성물에 관한 것이다.본 발명자는 버퍼, pH, 디티오트레이톨 및 5-(바이오틴아미도)펜틸아민의 농도와 같은 측정 조건을 최적화하였으며, 시료내 특이적 FXIII 및 TG2 활성들을 결정하는 식을 생성하였다. 본 발명자는 성공적으로 이 측정 시스템을 적용하여 포볼 12-미리스테이트 13-아세테이트 및 인터루킨-4로 분화된 THP-1 단핵세포에서 FXIII 및 TG2 활성의 변화를 모니터하였다. 본 활성 측정법은 FXIII 및 TG2 활성의 고속대량 결정을 위해 민감하고 적합하기 때문에, 세포 신호전달 및 심장혈관 병태생리학 연구에 있어 이들 이소자임들의 차별적 기능들을 조사하는데 강한 잠재력을 가지고 있다.
Int. CL G01N 33/68 (2006.01) C12Q 1/56 (2006.01) C12Q 1/48 (2006.01) G01N 33/52 (2006.01)
CPC G01N 33/573(2013.01) G01N 33/573(2013.01) G01N 33/573(2013.01) G01N 33/573(2013.01)
출원번호/일자 1020110128102 (2011.12.02)
출원인 강원대학교산학협력단
등록번호/일자 10-1338401-0000 (2013.12.02)
공개번호/일자 10-2013-0061838 (2013.06.12) 문서열기
공고번호/일자 (20131210) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2011.12.02)
심사청구항수 7

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 강원대학교산학협력단 대한민국 강원도 춘천시

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 하권수 대한민국 강원도 춘천시
2 권미혜 대한민국 강원도 원주시 흥

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이문섭 대한민국 서울특별시 관악구 남부순환로 ****, ***호 제니스국제특허법률사무소 (봉천동, 청동빌딩)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 강원대학교산학협력단 강원도 춘천시
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2011.12.02 수리 (Accepted) 1-1-2011-0958797-89
2 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2011.12.13 수리 (Accepted) 4-1-2011-5249875-98
3 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2012.03.08 수리 (Accepted) 4-1-2012-5049179-27
4 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2012.09.06 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
5 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2012.10.15 수리 (Accepted) 9-1-2012-0077778-34
6 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2013.07.10 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2013-0477087-03
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2013.08.19 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2013-0746639-92
8 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2013.08.19 수리 (Accepted) 1-1-2013-0746638-46
9 등록결정서
Decision to grant		 2013.11.20 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2013-0802775-32
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.11.05 수리 (Accepted) 4-1-2019-5230938-29
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
하기 단계들을 포함하는 혈액응고인자 13(FXIII) 및 트랜스글루타미나제 2(TG2)의 활성도 동시 측정방법:a) 다수의 스폿(spot) 상에 혈액응고인자 13 및 트랜스글루타미나제 2의 공통 기질인 피브리노겐(fibrinogen)이 고정된, 혈액응고인자 13 활성도 측정용 표준 어레이(어레이 1), 트랜스글루타미나제 2 활성도 측정용 표준 어레이(어레이 2), 및 샘플의 혈액응고인자 13 및 트랜스글루타미나제 2 활성도 동시 측정용 어레이(어레이 3)를 준비하는 단계;b) 상기 어레이 1의 피브리노겐 상에 농도별의 혈액응고인자 13, 트롬빈 및 5-바이오틴아미도펜틸아민(BAPA)을 함유하는 pH 9
2 2
제 1항에 있어서, 상기 a)단계에서 혈액응고인자 13 활성도 측정용 표준 어레이(어레이 1), 트랜스글루타미나제 2 활성도 측정용 표준 어레이(어레이 2), 및 샘플의 혈액응고인자 13 및 트랜스글루타미나제 2 활성도 동시 측정용 어레이(어레이 3)는 하나의 칩상에 존재하는 것을 특징으로 하는 혈액응고인자 13 및 트랜스글루타미나제 2의 활성도 동시 측정방법
3 3
제 1항에 있어서, 상기 a)단계에서 피브리노겐을 고정한 후 피브리노겐이 결합되지 않은 스폿의 빈 부분을 블로킹(blocking) 용액으로 처리하여 블로킹시키는 것을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 혈액응고인자 13 및 트랜스글루타미나제 2의 활성도 동시 측정방법
4 4
제 1항에 있어서, 상기 b)단계에서 반응용액1은 1-3 mM의 5-바이오틴아미도펜틸아민(BAPA), 1-3 mM의 Ca2+, 0
5 5
제 1항에 있어서, 상기 c)단계에서 형광물질이 표지된 물질은 형광물질이 표지된 스트렙타비딘 또는 아비딘인 것을 특징으로 하는 혈액응고인자 13 및 트랜스글루타미나제 2의 활성도 동시 측정방법
6 6
제 5항에 있어서, 상기 형광물질은 Cy3, Cy5, Alexa, BODIPY
7 7
제 1항에 있어서, 상기 e)단계에서 표준(standard)곡선들을 통해 만들어진 두개의 활성도 측정식들은 다음 혈액응고인자 13 활성도 측정용 식 1과 트랜스글루타미나제 2 활성도 측정용 식 2인 것을 특징으로 하는 혈액응고인자 13 및 트랜스글루타미나제 2의 활성도 동시 측정방법:[식 1]상기 식에서, xFXIII는 단백질의 mg당 Loewy 유니트로 표시되는 FXIII 활성이고, x0는 반최고(halfmaximal) 형광강도에서의 FXIII 활성이고, A1 및 A2 는 각각 정상(top) 및 바닥(bottom) 점근선들(asymptotes)이고, yFXIII는 샘플의 형광강도이고, p는 파워(Hill slope)이다
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9 9
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10 10
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11 11
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1 교육과학기술부 강원대학교 산학협력단 의료·바이오 신소재 융복합 연구사업단/지역거점 연구단 육성사업 혈관질환 연구·진단용 바이오칩 개발
2 보건복지부 강원대학교병원 암정복추진연구개발사업 암바이오 마커의 발굴과 응용 연구기반 구축(전체과제명)/암 진단용 단백질 칩 개발(세부과제명)