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분석하고자 하는 단백질(항원)에 특이적으로 결합할 수 있는 항체를 표면에 고정시켜 단백질 칩을 제조하는 단계와; 분석하고자 하는 단백질과 동일한 단백질에 표지시킨 표준 단백질을 준비하는 단계와; 상기 표준 단백질을 분석하고자 하는 단백질이 포함된 분석시료와 혼합하고, 항체가 고정된 단백질 칩의 표면에 적하(spotting)하는 단계와; 상기 단백질 칩의 항체에 대하여 표준 단백질과 분석하고자 하는 단백질간의 경쟁적인 면역반응을 통해 나타나는 형광도(intensity)를 형광 스캐너(fluorescence scanner)로 분석하는 단계;를 포함하는 칩 기술을 기반으로 하는 경쟁적 상호작용을 이용한 비표지 혈액 단백질의 분석방법에 있어서,
상기 단백질 칩은 3-아미노프로필트리메톡시실란(3-aminopropyltrimethoxysilane) 함유용액에 기판을 침적하여 기판의 표면에 3-아미노프로필트리메톡시실란을 도입하는 단계와;
상기 3-아미노프로필트리메톡시실란이 도입된 기판의 표면에 소정의 간격으로 천공된 테이프를 부착하여 3-아미노프로필트리메톡시실란이 노출된 다수의 스폿(spot)을 갖는 어레이(array) 칩을 제조하는 단계와;
상기 어레이 칩의 3-아미노프로필트리메톡시실란과 카르복실기로 개질된 라텍스 비드(carboxylate modified latex bead)를 반응시켜 3-아미노프로필트리메톡시실란의 아민기 말단에 라텍스 비드를 도입하는 단계와;
상기 라텍스 비드가 도입된 어레이 칩에 프로테인(Protein) G가 용해된 소듐 아세테이트 완충용액(sodium acetate buffer)을 적하하여 라텍스 비드에 프로테인 G를 도입하는 단계와;
상기 프로테인 G가 도입된 어레이 칩에 항체(antibody)가 용해된 인산 완충용액(phosphate buffer)을 적하하여 프로테인 G에 항체를 도입하는 단계;에 의해 제조된 것임을 특징으로 하는 칩 기술을 기반으로 하는 경쟁적 상호작용을 이용한 비표지 혈액 단백질의 분석방법
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청구항 2에 있어서,
상기 어레이 칩에 항체를 도입한 후 항체와 결합되지 않은 스폿의 빈부분을 블로킹(blocking) 용액으로 처리하여 블로킹시키는 것을 포함함을 특징으로 하는 칩 기술을 기반으로 하는 경쟁적 상호작용을 이용한 비표지 혈액 단백질의 분석방법
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청구항 2 또는 청구항 3에 있어서,
상기 3-아미노프로필트리메톡시실란의 아민기 말단에 라텍스 비드를 도입하는 단계에서 카르복실기로 개질된 라텍스 비드를 N-하이드록시쑥신이미드와 카르보디이미드 존재하에서 반응시켜 카르복실기를 활성화시킨 다음 이 반응 용액을 3-아미노프로필트리메톡시실란에 적하하여 반응시키는 것임을 특징으로 하는 칩 기술을 기반으로 하는 경쟁적 상호작용을 이용한 비표지 혈액 단백질의 분석방법
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청구항 4에 있어서,
상기 카르보디이미드가 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 하이드로클로라이드나 N,N'-디싸이클로헥실 카르보이미드(N,N'-dicyclohexyl carbodiimide; DCC) 또는 디이소프로필카르보디이미드(diisopropylcarbodiimide)에서 선택된 것임을 특징으로 하는 칩 기술을 기반으로 하는 경쟁적 상호작용을 이용한 비표지 혈액 단백질의 분석방법
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청구항 5에 있어서,
상기 라텍스 비드에 프로테인 G를 도입하기 전에 3-아미노프로필트리메톡시실란의 아민기 말단에 도입된 라텍스 비드 상에 N-하이드록시쑥신이미드와 카르보디이미드 혼합용액을 적하하여 라텍스 비드의 카르복실기를 활성화시킨 다음 여기에 프로테인(Protein) G가 용해된 소듐 아세테이트 완충용액을 적하하는 것임을 특징으로 하는 칩 기술을 기반으로 하는 경쟁적 상호작용을 이용한 비표지 혈액 단백질의 분석방법
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청구항 6에 있어서,
상기 카르보디이미드가 N-에틸-N'-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드 하이드로클로라이드나 N,N'-디싸이클로헥실 카르보이미드(N,N'-dicyclohexyl carbodiimide; DCC) 또는 디이소프로필카르보디이미드(diisopropylcarbodiimide)에서 선택된 것임을 특징으로 하는 칩 기술을 기반으로 하는 경쟁적 상호작용을 이용한 비표지 혈액 단백질의 분석방법
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청구항 2에 있어서,
상기 표준 단백질은 Alexa 시리즈를 비롯하여 Cy3, Cy5, Alexa, BODIPY, Rhodamine, Q-dot중에 선택된 하나를 사용하여 형광표지된 것임을 특징으로 하는 칩 기술을 기반으로 하는 경쟁적 상호작용을 이용한 비표지 혈액 단백질의 분석방법
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청구항 2에 있어서,
상기 표준 단백질는 바이오틴(biotin)으로 표지된 것임을 특징으로 하는 칩 기술을 기반으로 하는 경쟁적 상호작용을 이용한 비표지 혈액 단백질의 분석방법
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청구항 8 또는 청구항 9에 있어서,
상기 분석하고자 하는 단백질은 혈액 내에 존재하는 질병관련 단백질(항원)임을 특징으로 하는 칩 기술을 기반으로 하는 경쟁적 상호작용을 이용한 비표지 혈액 단백질의 분석방법
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청구항 10에 있어서, 상기 형광 스캐너에 의해 단백질 칩의 형광도(intensity)를 분석한 후 미리 제작된 표준 단백질의 농도에 따른 형광도가 세기별로 기재된 대조표와 비교 분석하여 분석하고자 하는 단백질의 농도를 산출하는 단계를 포함함을 특징으로 하는 칩 기술을 기반으로 하는 경쟁적 상호작용을 이용한 비표지 혈액 단백질의 분석방법
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