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형광 검출기를 포함한 모세관 전기영동법을 이용한 ｍｉＲＮＡ의 검출 방법

  • 기술번호 : KST2015122319
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 시료 내 극소량으로 존재하는 miRNA를 검출하는 방법 및 이를 검출하기 위한 키트에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 시료 내 극소량으로 존재하는 miRNA를 빠른 시간에 정량적으로 분석이 가능하다. 또한, 본 발명의 검출방법은 miRNA를 활용한 다양한 질환의 진단, 예컨대 심근경색을 포함하는 심혈관 질환의 신속한 진단에 이용될 수 있다.
Int. CL C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01)
CPC C12Q 1/6816(2013.01) C12Q 1/6816(2013.01) C12Q 1/6816(2013.01) C12Q 1/6816(2013.01) C12Q 1/6816(2013.01)
출원번호/일자 1020120110113 (2012.10.04)
출원인 한국과학기술연구원
등록번호/일자 10-1426530-0000 (2014.07.29)
공개번호/일자 10-2014-0044116 (2014.04.14) 문서열기
공고번호/일자 (20140805) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2012.10.04)
심사청구항수 22

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술연구원 대한민국 서울특별시 성북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 반은미 대한민국 서울특별시 송파구
2 채동규 대한민국 서울특별시 강동구
3 송은주 대한민국 서울특별시 용산구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 한라특허법인(유한) 대한민국 서울시 서초구 강남대로 ***(서초동, 남강빌딩 *층)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술연구원 서울특별시 성북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2012.10.04 수리 (Accepted) 1-1-2012-0804746-84
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2013.06.04 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2013.07.08 수리 (Accepted) 9-1-2013-0051851-17
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2013.12.27 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2013-0902415-34
5 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.02.19 수리 (Accepted) 4-1-2014-5022002-69
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2014.02.27 수리 (Accepted) 1-1-2014-0196756-69
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2014.02.27 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2014-0196763-89
8 등록결정서
Decision to grant		 2014.07.24 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2014-0505333-77
9 대리인선임신고서
Report on Appointment of Agent		 2015.12.23 수리 (Accepted) 1-1-2015-5033520-42
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
다음의 단계를 포함하는 시료 내 miRNA의 1시간 이내 검출방법:(a) 분석하고자 하는 시료로부터 RNA를 추출하는 단계;(b) 상기 단계 (a)로부터 추출한 RNA와, 상기 시료에 50 펨토몰(femto mole) 이하의 극소량으로 존재할 것으로 예상되는 miRNA에 특이적인 프로브로서 형광물질이 결합된 단일가닥 DNA를 혼성화 버퍼에서 혼성화 시키는 단계;(c) LIF(laser induced fluorescence) 검출기가 장착된 모세관 전기영동(CE/LIF) 시스템을 이용하여 DNA-miRNA 복합체를 분리 및 확인하는 단계; 및(d) 상기 단계 (c)의 결과 DNA-miRNA 복합체 피크를 확인하여 시료내 극소량의 miRNA의 존재를 확인하는 단계
2 2
제 1 항에 있어서, 상기 LIF 검출기는 여기 파장이 400-500 ㎚이고 방출 파장이 500-600 ㎚인 것을 특징으로 하는 검출방법
3 3
제 1 항에 있어서, 상기 시료는 세포, 혈청, 혈장, 타액, 눈물 또는 뇨인 것을 특징으로 하는 검출방법
4 4
제 1 항에 있어서, 상기 DNA-miRNA 복합체의 분리는 미코팅 모세관(uncoated capillary)을 이용하여 수행하는 것을 특징으로 하는 검출방법
5 5
제 4 항에 있어서, 상기 미코팅 모세관은 내경이 50-100 ㎛이고 길이가 20-60 ㎝인 것을 특징으로 하는 검출방법
6 6
제 4 항에 있어서, 상기 분리는 트리스-보레이트 버퍼를 사용하여 미코팅 모세관 내에서 10-20 kV의 전압을 적용하여 분리하는 것을 특징으로 하는 검출방법
7 7
제 3 항에 있어서, 상기 세포는 심근세포(cardiomyocyte)인 것을 특징으로 하는 검출방법
8 8
제 1 항에 있어서, 상기 miRNA는 miRNA-499, miRNA-1, miRNA-133 및 miRNA-208으로 구성된 군으로부터 선택되는 1 또는 그 이상의 miRNA인 것을 특징으로 하는 검출방법
9 9
제 8 항에 있어서, 상기 miRNA는 서열목록 제1서열의 miRNA-499, 서열목록 제2서열의 miRNA-1, 서열목록 제3서열의 miRNA-133a 및 서열목록 제4서열의 miRNA-208으로 구성된 군으로부터 선택되는 1 또는 그 이상의 miRNA인 것을 특징으로 하는 검출방법
10 10
제 9 항에 있어서, 상기 miRNA는 서열목록 제1서열의 miRNA-499인 것을 특징으로 하는 검출방법
11 11
제 1 항에 있어서, 상기 특이적인 프로브는 서열목록 제5서열의 프로브인 것을 특징으로 하는 검출방법
12 12
제 1 항에 있어서, 상기 형광물질은 6-카르복시풀루오리신인 것을 특징으로 하는 검출방법
13 13
제 1 항에 있어서, 상기 단계 (a)는 상기 miRNA 및 이에 특이적인 프로브로서 형광물질이 결합된 단일가닥 DNA를 다양한 혼성화 버퍼에서 혼성화시켜 혼성화에 가장 적합한 혼성화 버퍼를 확립하는 단계(pre-(a))를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 검출방법
14 14
제 1 항에 있어서, 상기 혼성화 버퍼는 TNM(Tris NaCl MgCl2) 버퍼, PBS(Phosphate Buffered Saline) 버퍼, Tris-Cl 버퍼, SSC(Saline Sodium Citrate) 버퍼, HEN(Hepes EDTA Neocuproine) 버퍼 및 TEN(Tris EDTA NaCl) 버퍼로 구성된 군으로부터 선택되는 1 또는 그 이상의 버퍼인 것을 특징으로 하는 검출방법
15 15
제 14 항에 있어서, 상기 혼성화 버퍼는 TEN 버퍼인 것을 특징으로 하는 검출방법
16 16
50 펨토몰 이하의 극소량의 miRNA를 1시간 이내에 검출하기 위한 키트로서, (a) 상기 miRNA에 특이적인 혼성화가 가능한 DNA 프로브 및 상기 프로브에 결합 가능한 형광물질, 또는 형광물질이 결합된 프로브로서 상기 miRNA에 특이적인 혼성화가 가능한 DNA 프로브; (b) 혼성화 버퍼; 및 (c) DNA-miRNA 복합체 분리용 버퍼를 포함하는 모세관 전기영동(CE/LIF) 시스템에 적용하기 위한 miRNA 검출용 키트
17 17
제 16 항에 있어서, 상기 miRNA는 miRNA-499, miRNA-1, miRNA-133 및 miRNA-208으로 구성된 군으로부터 선택되는 1 또는 그 이상의 miRNA인 것을 특징으로 하는 miRNA 검출용 키트
18 18
제 17 항에 있어서, 상기 miRNA는 서열목록 제1서열의 miRNA-499, 서열목록 제2서열의 miRNA-1, 서열목록 제3서열의 miRNA-133a 및 서열목록 제4서열의 miRNA-208으로 구성된 군으로부터 선택되는 1 또는 그 이상의 miRNA인 것을 특징으로 하는 miRNA 검출용 키트
19 19
제 16 항에 있어서, 상기 프로브는 서열목록 제5서열의 프로브인 것을 특징으로 하는 miRNA 검출용 키트
20 20
제 16 항에 있어서, 상기 혼성화 버퍼는 TNM(Tris NaCl MgCl2) 버퍼, PBS(Phosphate Buffered Saline) 버퍼, Tris-Cl 버퍼, SSC(Saline Sodium Citrate) 버퍼, HEN(Hepes EDTA Neocuproine) 버퍼 및 TEN(Tris EDTA NaCl) 버퍼로 구성된 군으로부터 선택되는 1 또는 그 이상의 버퍼인 것을 특징으로 하는 miRNA 검출용 키트
21 21
제 16 항에 있어서, 상기 분리용 버퍼는 트리스-보레이트 버퍼인 것을 특징으로 하는 miRNA 검출용 키트
22 22
제 16 항에 있어서, 상기 형광물질은 6-카르복시풀루오리신인 것을 특징으로 하는 miRNA 검출용 키트
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1 US20140099633 US 미국 FAMILY

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1 US2014099633 US 미국 DOCDBFAMILY
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