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링커를 이용하여 바이오마커를 수집할 수 있는 제1 항체(primary antibody)를 그 표면에 고정시킨 자성입자들을 제공하는 단계,상기 바이오마커를 탐지할 수 있는 제2 항체(secondary antibody)를 그 표면에 고정시킨 양자점들을 제공하는 단계,상기 자성입자들과 상기 양자점들에 의해 상기 바이오마커를 샌드위치 표적시키는 단계,상기 양자점들 중 상기 바이오마커를 샌드위치 표적시킨 양자점들을 선택적으로 분리하는 단계, 및상기 분리된 양자점들의 흡광도 또는 형광의 세기를 측정하여 상기 바이오마커의 농도를 정량화하는 단계를 포함하는 바이오마커의 진단 방법
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제1항에 있어서,상기 자성입자들을 제공하는 단계는,상기 자성입자들의 표면을 티올로 기능화하는 단계, 상기 자성입자들의 표면에 화학적 링커를 이용하여 단백질 G, 단백질 A, 단백질 A/G 및 Fc 리셉터로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 링커 단백질을 결합시키는 단계, 및상기 제1 항체를 상기 자성입자의 표면에 고정시켜서 상기 제1 항체의 Fab를 활성화시키는 단계를 포함하는 바이오마커의 진단 방법
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제2항에 있어서,상기 링커 단백질을 결합시키는 단계에서, 상기 화학적 링커는 설포석시니미들-4-{엔-말레이미도메틸}시클로헥산-1-카르복실레이트 (Sulfosuccinimidyl-4-{N-maleimidomethyl} cyclohexane-1-carboxylate) 및 석시니미들-4-{엔-말레이미도메틸}시클로헥산-1-카르복실레이트(Succinimidyl-4-{N-maleimidomethyl}cyclohexane-1-carboxylate)(SMCC)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 화학적 링커인 바이오마커의 진단 방법
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제1항에 있어서,상기 양자점들을 제공하는 단계는, 1-마이리스토일-2-하이드록시-에스엔-글리세로-3-포스포콜린(1-Myristoyl-2-Hydroxy-sn-Glycero-3-Phosphocholine)(MHPC), 1,2-디스티어로일-에스엔-글라이세로-3-포스포에탄올아민-엔-메톡시 폴리에틸렌 글리콜-2000(1,2-Distearoyl-sn-Glycero-3-Phosphoethanolamine-N-(Methoxy Polyethylene glycol)-2000(DPPE-PEG2000) 및 1,2-디오레일-에스엔-글리세로-3-엔-{5-아미노-1-복실펜틸}이미노디아세틱 에시드 석시닐 니켈 쏠트(1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-N-{5-amino-1-carboxypentyl} iminodiacetic acid succinyl nickel salt)(Ni-NTA)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 지질을 이용하여 상기 양자점들의 표면을 친수성으로 변환시키는 단계,상기 양자점의 표면에 헥사히스티딘 시퀀스(Hexahistidine sequence)를 포함하는 링커 단백질을 니켈-히스티딘 결합반응을 이용하여 고정하는 단계, 및상기 링커 단백질 위에 상기 제2 항체를 고정시키는 단계를 포함하는 바이오마커의 진단 방법
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제4항에 있어서,상기 링커 단백질을 고정하는 단계에서, 상기 링커 단백질은 단백질 G, 단백질 A, 단백질 A/G 및 Fc 리셉터로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 단백질이고, 상기 링커 단백질에 의해 상기 제2 항체의 Fab가 항상 활성화되는 바이오마커의 진단 방법
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제1항에 있어서,상기 하나 이상의 바이오마커를 샌드위치 표적시킨 양자점들을 선택적으로 분리하는 단계는,이미다졸 및 에틸렌 디아민 테트라아세틱 에시드(ethylenediamine tetraacetic acid)(EDTA)으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 첨가제를 첨가하여 니켈-히스티딘 결합반응을 끊어서 상기 제2 항체에 부착된 양자점들만을 분리하는 단계, 및자력을 이용하여 상기 자성입자들을 제거하는 단계를 포함하는 바이오마커의 진단 방법
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제1항에 있어서,상기 하나 이상의 바이오마커의 농도를 정량화하는 단계는,농도가 서로 상이한 또다른 양자점들을 포함하는 복수의 용액들을 제공하는 단계,상기 복수의 용액들의 350nm 파장에서의 흡광도 또는 형광의 세기를 측정하는 단계,상기 또다른 양자점들의 농도와 상기 흡광도 또는 형광의 세기를 비교하여 표준 곡선을 제공하는 단계,상기 분리된 양자점의 350nm 파장에서의 흡광도 또는 형광의 세기를 측정하는 단계,상기 분리된 양자점의 350nm 파장에서의 흡광도 또는 형광의 세기를 상기 표준 곡선과 비교하여 상기 분리된 양자점의 농도를 계산하는 단계, 및상기 분리된 양자점의 농도와 비례하는 바이오마커의 농도를 정량화하는 단계를 포함하는 바이오마커의 진단 방법
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제1항에 있어서,상기 자성입자들을 제공하는 단계에서, 상기 제1 항체는 복수로 이루어지고,상기 양자점들을 제공하는 단계에서, 상기 제2 항체는 복수로 이루어지며, 상기 바이오마커를 샌드위치 표적시키는 단계에서, 상기 바이오마커는 복수로 이루어지고, 상기 복수의 바이오마커들은 서로 상이하며, 상기 바이오마커들마다 상기 제1 항체와 상기 2 항체가 각각 서로 상이한 바이오마커의 진단 방법
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제8항에 있어서,상기 양자점들을 제공하는 단계에서 상기 양자점은 CdSe/ZnS의 코어/쉘로 된 물질을 포함하는 바이오마커의 진단 방법
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바이오마커 수집용 자성입자 함유 용액이 수용된 제1 용기,상기 제1 용기와 별도로 수납되고, 정량분석용 양자점 함유 용액이 수용된 하나 이상의 제2 용기,상기 제2 용기와 별도로 수납되고, 이미다졸 및 에틸렌 디아민 테트라아세틱 에시드(ethylenediamine tetraacetic acid)(EDTA)로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 분리제를 함유한 버퍼 용액이 수용된 제3 용기,상기 제3 용기와 별도로 수납되고, 그 내부가 비어 있는 제4 용기,상기 제1 용기 내지 상기 제4 용기와 별도로 수납된 자성체, 및상기 제1 용기 내지 상기 제4 용기 및 자성체와 별도로 수납된 설명서를 포함하는 바이오마커 진단 키트
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제10항에 있어서,상기 설명서에는,바이오마커와 상기 제1 용기의 용액을 상기 제4 용기에 넣어서 제1 혼합 용액을 제공하는 단계,상기 제4 용기에 상기 자성체를 접촉시켜서 상기 제1 혼합 용액 중 상기 자성체에 붙은 객체만 잔존시키는 단계,상기 제4 용기에 상기 제2 용기의 용액을 넣어서 제2 혼합 용액을 제공하는 단계,상기 제4 용기에 상기 제3 용기의 용액을 넣어서 상기 제2 혼합 용액과 상기 제3 용기의 용액이 혼합된 제3 혼합 용액을 제공하는 단계, 및상기 제4 용기에 상기 자성체를 접촉시켜서 상기 제3 혼합 용액 중 상기 자성체에 붙은 자성입자를 제외한 나머지 용액을 분리시키는 단계를 포함하는 내용이 안내된 바이오마커 진단 키트
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제11항에 있어서,상기 설명서에는,상기 나머지 용액의 흡광도 또는 형광의 세기를 측정하는 단계,상기 바이오마커의 농도와 상기 흡광도 또는 형광의 세기를 비교한 표준 곡선을 제공하는 단계,상기 흡광도 또는 형광의 세기를 상기 표준 곡선과 비교하여 상기 나머지 용액의 농도를 계산하는 단계, 및상기 나머지 용액의 농도와 비례하는 바이오마커의 농도를 정량화하는 단계를 포함하는 내용이 추가로 안내된 바이오마커 진단 키트
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제10항에 있어서,상기 하나 이상의 제2 용기는 복수의 제2 용기들을 포함하고, 상기 복수의 제2 용기들 각각의 제2 용기에는 상호 다른 정량분석용 양자점 함유 용액이 포함된 바이오마커 진단 키트
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