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다중병렬크로마토그래피를 이용하여 항체와 반응하는 항원을 정확하게 찾아내는 프로테오믹스 기반 방법

  • 기술번호 : KST2014049399
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 항원이 알려져 있지 않은 진단용 항체나 자가항체의 정확한 항원을 찾는 방법에 관한 것으로, 구체적으로 항원-항체반응이 나타나 항원이 들어 있을 것으로 예측되는 피검시료를 각기 다른 분리 윈리를 이용하는 여러 가지 크로마토그래피법을 병렬로 조합하여 항원소스를 여러 분획으로 나누고, 각 분획을 겔 전기영동하여 항원-항체반응을 측정하고, 항원-항체 반응이 나타나는 분획에서 해당되는 겔 위치에 포함된 단백질을 질량분석기를 이용하여 동정한 다음, 서로 다른 크로마토그래피 분획에서 공통으로 검출되는 단백질을 찾아 정확한 항원으로 규명하는 방법이다. 본 발명의 새로운 방법은 기존의 항원 규명 방법의 거짓-양성 반응의 단점을 보완한 효과적인 방법으로 여러 가지 크로마토그래피 분리방법의 조합을 통해 복잡한 혼합체로부터 항체와 반응하는 항원을 정확하게 골라내는 데에 유용하게 사용될 수 있다.
Int. CL C07K 1/16 (2006.01) G01N 33/53 (2006.01) G01N 33/532 (2006.01)
CPC G01N 33/53(2013.01) G01N 33/53(2013.01) G01N 33/53(2013.01) G01N 33/53(2013.01)
출원번호/일자 1020100004296 (2010.01.18)
출원인 한국과학기술연구원
등록번호/일자 10-1144325-0000 (2012.05.02)
공개번호/일자 10-2011-0084640 (2011.07.26) 문서열기
공고번호/일자 (20120511) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2010.01.18)
심사청구항수 11

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술연구원 대한민국 서울특별시 성북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이철주 대한민국 서울특별시 광진구
2 문주희 대한민국 서울특별시 성북구
3 김용학 대한민국 서울특별시 노원구
4 유명희 대한민국 서울특별시 서초구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 리앤목특허법인 대한민국 서울 강남구 언주로 **길 **, *층, **층, **층, **층(도곡동, 대림아크로텔)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술연구원 서울특별시 성북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2010.01.18 수리 (Accepted) 1-1-2010-0030840-11
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2011.03.08 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2011.04.15 수리 (Accepted) 9-1-2011-0034571-15
4 [대리인선임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Appointment of Agent] Report on Agent (Representative)
2011.04.19 수리 (Accepted) 1-1-2011-0290237-54
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2011.06.30 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0362494-39
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2011.08.31 수리 (Accepted) 1-1-2011-0680157-92
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2011.08.31 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-0680158-37
8 등록결정서
Decision to grant
2012.03.30 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0191144-43
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2014.02.19 수리 (Accepted) 4-1-2014-5022002-69
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번호 청구항
1 1
1) 피검시료로부터 음이온교환 크로마토그래피, 소수성 결합 크로마토그래피, 크로마토포커싱 방법 및 등전점에 따른 단백질 분리 방법(IEF)으로 구성된 군으로부터 선택되는 둘 이상의 방법으로 각각 단백질을 분리하는 단계;2) 각 분리된 단백질에서 항원이 알려져 있지 않은 항체를 처리하여 항원-항체 반응시키는 단계;3) 상기 단계 2)의 결과로부터, 항원-항체 반응이 나타나는 분획을 질량 분석에 의해 동정하는 단계; 및,4) 상기 단계 3)에 따른 결과로부터, 둘 이상의 분리 방법에서 공통적으로 동정되는 단백질을 항원 후보 단백질로 판정하는 단계를 포함하는 항체에 대한 항원을 탐색하는 방법
2 2
제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 음이온교환 크로마토그래피는 세포에서 분리된 단백질을 Mono Q HR5/5 컬럼을 이용하여 25 mM Tris/HCl(pH 8
3 3
제 1항에 있어서, 상기 피검시료는 세포, 혈청, 혈장 및 혈액, 또는 이로부터 유래한 단백질, 공지의 단백질의 일부 또는 전체 아미노산 서열을 이용하여 합성된 단백질 및 유전자 재조합 기술을 통해 제조된 재조합 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방법
4 4
제 1항에 있어서, 상기 항체는 표지체가 접합된 이차항체 및 발색기질을 이용하여 탐지하는 것을 특징으로 하는 방법
5 5
제 4항에 있어서, 상기 표지체는 HRP(Horseradish peroxidase), 알칼리성 인산분해효소(Alkaline phosphatase), 콜로이드 골드(Coloid gold), FITC(Poly L-lysine-fluorescein isothiocyanate) 또는 RITC(Rhodamine-B-isothiocyanate)의 형광물질(Fluorescein) 및, 색소(Dye)로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방법
6 6
제 4항에 있어서, 상기 발색기질은 TMB(3,3'',5,5''-tetramethyl bezidine), ABTS[2,2''-azino-bis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid)] 및 OPD(o-phenylenediamine)로 이루어지는 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방법
7 7
제 1항에 있어서, 상기 단계 2)의 항원-항체 반응은 ELISA(Enzyme-linked immunosorbent assay), RIA(Radioimmnoassay), 샌드위치 측정법(Sandwich assay), 폴리아크릴아미드 겔 상의 웨스턴 블롯(Western Blot), 면역블롯 분석(Immunoblot assay) 또는 면역조직화학염색 방법 (Immnohistochemical staining)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방법
8 8
제 1항에 있어서, 상기 항체는 자가항체인 것을 특징으로 하는 방법
9 9
제 1항에 있어서, 상기 단계 이후에,1) 단계 4)에서 판정된 항원 후보 단백질을 폴리펩티드로 절단하는 단계;2) 상기 단계 1)의 절단된 폴리펩티드를 질량분석기를 통해 분석하는 단계;3) 상기 단계 2)의 결과를 이용하여 단백질을 동정하는 단계를 추가로 수행하는 것을 특징으로 하는 방법
10 10
1) 피검시료로부터 음이온교환 크로마토그래피, 소수성 결합 크로마토그래피, 크로마토포커싱 방법, 및 등전점에 따른 단백질 분리 방법(IEF)으로 각각 단백질을 분리하는 단계;2) 각 분리된 단백질에서 항원이 알려져 있지 않은 항체를 처리하여 항원-항체 반응시키는 단계;3) 상기 단계 2)의 결과로부터, 항원-항체 반응이 나타나는 분획을 질량 분석에 의해 동정하는 단계; 및,4) 상기 단계 3)에 따른 결과로부터, 둘 이상의 분리 방법에서 공통적으로 동정되는 단백질을 항원 후보 단백질로 판정하는 단계를 포함하는 항체에 대한 항원을 탐색하는 방법
11 11
제 10항에 있어서, 상기 단계 1)의 음이온교환 크로마토그래피는 세포에서 분리된 단백질을 Mono Q HR5/5 컬럼을 이용하여 25 mM Tris/HCl(pH 8
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순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 교육과학기술부 한국과학기술연구원 프로테오믹스이용기술개발사업 대장암, 유방암의 진단 및 모니터링을 위한 단백질표지 개발