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1) 융합발현파트너(fusion expression partner)로서 펩티딜-프롤린 시스-트랜스 이성질화 효소 B(Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase B; PpiB)의 유전자, 및 외래 단백질의 유전자를 연결한 발현벡터를 제조하는 단계;2) 상기 발현벡터를 숙주세포에 도입하여 형질전환체를 제조하는 단계; 및3) 상기 형질전환체를 배양하여 재조합 단백질의 발현을 유도하고 이를 수득하는 단계로 구성되는 재조합 단백질의 제조방법
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제 1항에 있어서, PpiB는 서열번호 1로 기재되는 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
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제 1항에 있어서, 외래 단백질은 항원, 항체, 세포수용체, 효소, 구조 단백질, 혈청 및 세포 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 생물학적 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
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제 3항에 있어서, 외래 단백질은 인간 과립구 군체 자극인자(granulocyte colony-stimulating factor; hG-CSF)인 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
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제 1항에 있어서, 발현벡터는 PpiB의 유전자와 외래 단백질 유전자 사이에 단백질 제한효소 인식부위를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
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제 5항에 있어서, 단백질 제한효소 인식부위는 Xa 인자 인식부위, 엔테로키나제 인식부위(enterokinase cleavage site), 제네나제(Genenase) I 인식부위 및 퓨린(Furin) 인식부위로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
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제 1항에 있어서, 발현벡터는 골격 벡터로서 pT7, pET/Rb, pGEX, pET28a(+), pET-22b(+) 및 pGEX로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나를 이용하는 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
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제 1항에 있어서, 상기 숙주세포는 대장균(E
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제 1항에 있어서, 상기 배양은 단백질의 3차 구조 형성을 방해하는 스트레스 환경 조건에서 배양하는 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
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제 9항에 있어서, 상기 스트레스 환경 조건은 2-HEDS(2-hydroxyethyldisulfide)가 첨가된 조건인 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
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제 5항의 제조방법에 의해 제조된 재조합 단백질에 추가적으로 엔테로키나아제(enterokinase)를 첨가하는 단계를 포함하는 PpiB가 제거된 가용성 외래 단백질의 제조방법
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융합발현파트너로서 PpiB의 유전자 및 외래 단백질의 유전자를 포함하는 유전자 컨스트럭트
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제 12항에 있어서, 상기 유전자 컨스트럭트는 PpiB의 유전자와 외래 단백질 유전자 사이에 단백질 제한효소 인식부위를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 유전자 컨스트럭트
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제 13항에 있어서, 단백질 제한효소 인식부위는 Xa 인자 인식부위, 엔테로키나제 인식부위(enterokinase cleavage site), 제네나제(Genenase) I 인식부위 및 퓨린(Furin) 인식부위로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 유전자 컨스트럭트
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제 12항에 있어서, 상기 유전자 컨스트럭트는 도 2(B)로 표시되는 것을 특징으로 하는 유전자 컨스트럭트
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제 12항의 유전자 컨스트럭트를 포함하는 발현벡터
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제 16항에 있어서, 발현벡터는 골격 벡터로서 pT7, pET/Rb, pGEX, pET28a(+), pET-22b(+) 및 pGEX로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나를 이용하는 것을 특징으로 하는 발현벡터
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제 16항의 발현벡터가 형질도입된 형질전환체
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제 1항의 제조방법에 의해 제조된 재조합 융합 단백질
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제 5항의 제조방법에 의해 제조된 PpiB가 제거된 가용성 외래 단백질
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