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펩티딜―프롤린 시스―트랜스 이성질화 효소 Ｂ를 융합발현파트너로 이용한 가용성 재조합 단백질의 제조방법

  • 기술번호 : KST2015133760
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 펩티딜-프롤린 시스-트랜스 이성질화 효소 B(Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase B; PpiB)를 융합발현파트너로 이용하는 재조합 단백질의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 1) 융합발현파트너(fusion expression partner)인 PpiB, 및 외래 단백질의 유전자를 연결한 발현벡터를 제조하는 단계, 2) 상기 발현벡터를 숙주세포에 도입하여 형질전환체를 제조하는 단계, 및 3) 상기 형질전환체를 배양하여 재조합 단백질의 발현을 유도하고 이를 수득하는 단계를 포함하는 재조합 단백질의 제조방법, 및 상기 제조방법에 의해 제조된 재조합 단백질에 관한 것이다. 본 발명의 PpiB는 스트레스 환경하에서도 자체 구조적 안정성을 유지할 수 있는 대장균내 단백질로 이 단백질의 유전자를 융합발현파트너로 사용하여 재조합 단백질을 제조하는 방법은 기존의 융합발현파트너가 가지고 있는 가용성 및 접힘(folding) 능력을 향상시켜 목적 단백질의 구조적 안정성을 유지하며 높은 생산 수율로 발현시킬 수 있으므로, 의료용 및 산업용 단백질 생산에 유용하게 이용될 수 있다. 펩티딜-프롤린 시스-트랜스 이성질화 효소 B(Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase B; PpiB) , 융합발현파트너(fusion expression partner), 스트레스 환경
Int. CL C12N 15/31 (2006.01) C12P 21/00 (2006.01) C12N 15/61 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01)
CPC C12N 15/68(2013.01) C12N 15/68(2013.01) C12N 15/68(2013.01) C12N 15/68(2013.01) C12N 15/68(2013.01) C12N 15/68(2013.01) C12N 15/68(2013.01) C12N 15/68(2013.01) C12N 15/68(2013.01)
출원번호/일자 1020080135679 (2008.12.29)
출원인 고려대학교 산학협력단
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2010-0077665 (2010.07.08) 문서열기
공고번호/일자
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 거절
심사진행상태 수리
심판사항 심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호 1020110147660;
심사청구여부/일자 Y (2008.12.29)
심사청구항수 14

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 고려대학교 산학협력단 대한민국 서울특별시 성북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이지원 대한민국 서울특별시 성북구
2 송종암 대한민국 서울특별시 성북구
3 한경연 대한민국 서울특별시 성북구
4 박진승 대한민국 서울특별시 성북구
5 서혁성 대한민국 서울특별시 성북구
6 안금영 대한민국 서울특별시 성북구
7 이종환 대한민국 서울특별시 성북구
8 이은정 대한민국 서울특별시 성북구
9 권수정 대한민국 서울특별시 성북구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이원희 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2008.12.29 수리 (Accepted) 1-1-2008-0899443-21
2 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2009.06.09 수리 (Accepted) 4-1-2009-5111177-32
3 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2010.08.12 수리 (Accepted) 4-1-2010-5149278-93
4 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2010.10.08 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
5 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2010.11.12 수리 (Accepted) 9-1-2010-0068285-57
6 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2011.02.14 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0081294-46
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2011.04.12 수리 (Accepted) 1-1-2011-0267142-86
8 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2011.04.12 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-0267144-77
9 거절결정서
Decision to Refuse a Patent		 2011.10.31 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0637134-91
10 [분할출원]특허출원서
[Divisional Application] Patent Application		 2011.12.30 취하 (Withdrawal) 1-1-2011-1056005-70
11 명세서 등 보정서(심사전치)
Amendment to Description, etc(Reexamination)		 2011.12.30 보정승인 (Acceptance of amendment) 7-1-2011-0052344-11
12 최후의견제출통지서
Notification of reason for final refusal		 2012.02.08 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0074987-48
13 심사전치출원의 심사결과통지서
Notice of Result of Reexamination		 2012.06.28 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0376173-06
14 심사관의견요청서
Request for Opinion of Examiner		 2012.08.06 수리 (Accepted) 7-8-2012-0025762-02
15 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.02.11 수리 (Accepted) 4-1-2014-5018243-16
16 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.04.22 수리 (Accepted) 4-1-2014-5049934-62
17 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.10.10 수리 (Accepted) 4-1-2019-5210941-09
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
1) 융합발현파트너(fusion expression partner)로서 펩티딜-프롤린 시스-트랜스 이성질화 효소 B(Peptidyl-prolyl cis-trans isomerase B; PpiB)의 유전자, 및 외래 단백질의 유전자를 연결한 발현벡터를 제조하는 단계; 2) 상기 발현벡터를 숙주세포에 도입하여 형질전환체를 제조하는 단계; 및 3) 상기 형질전환체를 배양하여 재조합 단백질의 발현을 유도하고 이를 수득하는 단계로 구성되는 재조합 단백질의 제조방법
2 2
제 1항에 있어서, PpiB는 서열번호 1로 기재되는 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
3 3
제 1항에 있어서, 외래 단백질은 항원, 항체, 세포수용체, 효소, 구조 단백질, 혈청 및 세포 단백질로 이루어진 군으로부터 선택되는 생물학적 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
4 4
제 3항에 있어서, 외래 단백질은 인간 과립구 군체 자극인자(granulocyte colony-stimulating factor; hG-CSF)인 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
5 5
제 1항에 있어서, 발현벡터는 PpiB의 유전자와 외래 단백질 유전자 사이에 단백질 제한효소 인식부위를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
6 6
제 5항에 있어서, 단백질 제한효소 인식부위는 Xa 인자 인식부위, 엔테로키나제 인식부위(enterokinase cleavage site), 제네나제(Genenase) I 인식부위 및 퓨린(Furin) 인식부위로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
7 7
제 1항에 있어서, 발현벡터는 골격 벡터로서 pT7, pET/Rb, pGEX, pET28a(+), pET-22b(+) 및 pGEX로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나를 이용하는 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
8 8
제 1항에 있어서, 상기 숙주세포는 대장균(E
9 9
제 1항에 있어서, 상기 배양은 단백질의 3차 구조 형성을 방해하는 스트레스 환경 조건에서 배양하는 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
10 10
제 9항에 있어서, 상기 스트레스 환경 조건은 2-HEDS(2-hydroxyethyldisulfide)가 첨가된 조건인 것을 특징으로 하는 재조합 단백질의 제조방법
11 11
제 5항의 제조방법에 의해 제조된 재조합 단백질에 추가적으로 엔테로키나아제(enterokinase)를 첨가하는 단계를 포함하는 PpiB가 제거된 가용성 외래 단백질의 제조방법
12 12
융합발현파트너로서 PpiB의 유전자 및 외래 단백질의 유전자를 포함하는 유전자 컨스트럭트
13 13
제 12항에 있어서, 상기 유전자 컨스트럭트는 PpiB의 유전자와 외래 단백질 유전자 사이에 단백질 제한효소 인식부위를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 유전자 컨스트럭트
14 14
제 13항에 있어서, 단백질 제한효소 인식부위는 Xa 인자 인식부위, 엔테로키나제 인식부위(enterokinase cleavage site), 제네나제(Genenase) I 인식부위 및 퓨린(Furin) 인식부위로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 유전자 컨스트럭트
15 15
제 12항에 있어서, 상기 유전자 컨스트럭트는 도 2(B)로 표시되는 것을 특징으로 하는 유전자 컨스트럭트
16 16
제 12항의 유전자 컨스트럭트를 포함하는 발현벡터
17 17
제 16항에 있어서, 발현벡터는 골격 벡터로서 pT7, pET/Rb, pGEX, pET28a(+), pET-22b(+) 및 pGEX로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나를 이용하는 것을 특징으로 하는 발현벡터
18 18
제 16항의 발현벡터가 형질도입된 형질전환체
19 19
제 1항의 제조방법에 의해 제조된 재조합 융합 단백질
20 20
제 5항의 제조방법에 의해 제조된 PpiB가 제거된 가용성 외래 단백질
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1 보건복지부, 과학기술부, 한국과학재단 고려대학교 산학협력단, 고려대학교 산학협력단, 광주과학기술원 보건의료기술연구개발 사업, 국가지정연구실 사업, 미생물 유전체 활용기술 개발 사업 초고감도 감연질환 진단 나노바이오센서의 개발, 생체나노프로브를 활용한 초고감도 나노바이오센서 기술, 병원성 미생물 유전체 정보 기반 차세대 나노입자 복합백신개발