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1) 생체 외에서 세포에서 미세소관을 분해시키는 단계;2) 상기 미세소관이 분해된 세포에 암유발 단백질 키나아제 저해 후보 약물을 처리하는 단계; 및3) 미세소관 재합성 여부를 확인하는 단계;를 포함하는 암 유발 단백질 키나아제 저해제 후보 약물의 스크리닝 방법
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제1항에 있어서, 암 유발 단백질 키나아제 저해제는 미세소관결합단백질 저해제인 것을 특징으로 하는 암 유발 단백질 키나아제 저해제 후보 약물의 스크리닝 방법
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제1항에 있어서,상기 암 유발 단백질 키나아제 저해제는 LIM Kinase 1 저해제, PI3K/AKT 저해제, Raf 저해제, KDR 저해제, Fms 저해제, Tie2 저해제, SAPK2a 저해제, Ret 저해제, Abl 저해제, Abl(T315I) 저해제, ALK 저해제, Aurora A 저해제, Aurora B 저해제, Aurora C 저해제, Bmx 저해제, CDK/cyclinE 저해제, Kit 저해제, Src 저해제, EGFR 저해제, EphA1 저해제, FGFR3 저해제, Flt3 저해제, Fms 저해제, IGF-1R 저해제, IKKb 저해제, IR 저해제, Itk 저해제, JAK2 저해제, KDR 저해제, Met 저해제, mTOR 저해제, PDGFRa 저해제, Plk1 저해제, Ret 저해제, Syk 저해제, Tie2 저해제, TrtB 저해제 및 CK1 저해제 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 암 유발 단백질 키나아제 저해제 후보 약물의 스크리닝 방법
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제1항에 있어서, 상기 세포는 LIM kinase 1, PI3K/AKT, Raf, KDR, Fms, Tie2, SAPK2a, Ret, Abl, Abl(T315I), ALK, Aurora A,B,C, Bmx, CDK/cyclinE, Kit, Src, EGFR, EphA1, FGFR3, Flt3, Fms, IGF-1R, IKKb, IR, Itk, JAK2, KDR, Met, mTOR, PDGFRa, Plk1, Ret, Syk,Tie2, TrtB 및 CK1 중에서 선택되는 단백질 키나아제가 특이적으로 과발현된 세포주인 것을 특징으로 하는 암 유발 단백질 키나아제 저해제 후보 약물의 스크리닝 방법
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제1항에 있어서, 상기 1) 단계는 0
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제5항에 있어서, 미세소관 분해제는 노코다졸, 빈크리스틴, 빈블라스틴 및 콜히친 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 암 유발 단백질 키나아제 저해제 후보 약물의 스크리닝 방법
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제1항에 있어서, 상기 2) 단계는 미세소관을 분해시킨 직후 내지 10분 이내에 후보 약물을 처리하는 것을 특징으로 하는 암 유발 단백질 키나아제 저해제 후보 약물의 스크리닝 방법
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제1항에 있어서,상기 2) 단계의 상기 후보 약물은 1 내지 10 개의 서로 다른 농도 또는 1 내지 10개 군의 서로 다른 처리시간으로 처리하는 것으로상기 후보 약물의 농도는 0
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제1항에 있어서, 상기 3) 단계는 면역염색법(immunostaining), 튜블린 중합법(in vitro tubulin polymerization assay; Tubulin turbidity assay) 및 세포 미세버블 안정화법(cellular microbubble stabilization assay) 중에서 선택되는 방법으로 미세소관의 재합성 여부를 확인하는 것을 특징으로 하는 암 유발 단백질 키나아제 저해제 후보 약물의 스크리닝 방법
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1) 세포 외에서 세포에서 미세소관을 분해시키는 단계;2) 상기 미세소관이 분해된 세포에 암유발 단백질 키나아제 저해 후보 약물을 2 내지 20개의 서로 다른 처리시간으로 처리하는 단계; 및3) 미세소관 재합성 여부를 확인하는 단계;를 포함하는 암유발 단백질 키나아제 저해 후보 약물의 시간에 따른 억제활성 변화 확인방법
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세포가 고정된 기판, 미세소관 분해제, 완충용액, 알파-튜블린 특이 1차항체 및 2차항체를 포함하는 암유발 단백질 키나아제 저해 후보물질 검출키트
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제11항에 있어서, 상기 세포는 암세포 또는 백혈병세포인 것을 특징으로 하는 검출키트
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제11항에 있어서, 상기 세포는 MDA-MB-231, MCF-7, A549, PC-9, HCC827, H1975, chronic lymphocytic leuykemia(CLL) cell, SW480, HT-29, HL60, A2780, HCT116 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 검출키트
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제11항에 있어서, 미세소관 분해제는 노코다졸, 빈크리스틴, 빈블라스틴 및 콜히친 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 검출키트
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제11항에 있어서, 암유발 단백질 키나아제는 LIM kinase 1, PI3K/AKT, Raf, KDR, Fms, Tie2, SAPK2a, Ret, Abl, Abl(T315I), ALK, Aurora A,B,C, Bmx, CDK/cyclinE, Kit, Src, EGFR, EphA1, FGFR3, Flt3, Fms, IGF-1R, IKKb, IR, Itk, JAK2, KDR, Met, mTOR, PDGFRa, Plk1, Ret, Syk,Tie2, TrtB 및 CK1 중에서 선택되는 것을 특징으로 하는 검출키트
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