1 |
1
1) 인산화 단백질 또는 인산화 펩티드의 세린 잔기 및 트레오닌 잔기 중의 어느 한쪽의 잔기 또는 양쪽 모두의 잔기를 탈인산화(dephosphorylation)시키는 제 1단계;2) 상기 제 1단계의 탈인산화된 아미노산 잔기를 R-L-G의 구조(이 구조 중, R은 탈인산화된 아미노산 부위와 선택적으로 결합하는 친핵성 작용기이고, G는 양이온 형성을 유발시키는 친양성자성 작용기이며, L은 상기 친핵성 작용기와 친양성자성 작용기를 연결시켜 주는 링커(linker)임)로 이루어진 펩티드 반응성 표지물질(tag)로 표지시키는 제 2단계; 및3) 상기 제 2단계에서 표지된 단백질 또는 펩티드 유도체를 질량 분석방법으로 검출하는 제 3단계를 포함하는 인산화 단백질 또는 인산화 펩티드의 질량 분석방법에 있어서,상기 제 2단계의 표지물질은 모노-N-보호된 구아니디노기, 디-N-보호된 구아니디노기, N'-보호된 구아니디노기 및 아민이 보호되지 않은 구아니디노기로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 친양성자성 작용기(G)로 사용하는 것을 특징으로 하는 인산화 단백질 또는 인산화 펩티드의 질량 분석방법
|
2 |
2
삭제
|
3 |
3
삭제
|
4 |
4
제 1항에 있어서, 상기 제 2단계의 표지물질의 친핵성 작용기(R)는 설프히드릴(sulfhydryl)인 것을 특징으로 하는 방법
|
5 |
5
제 4항에 있어서, 설프히드릴기는 탈인산화 아미노산 잔기에 대한 표지반응 직전에 또는 표지반응 중에, 설프히드릴기의 이황체를 트리스(2-시아노에틸)포스핀(tris(2-cyanoethyl)phosphine, TCNEP), 트리스(2-카복시에틸)포스핀(tris(2-carboxyethyl)phosphine, TCEP), 트리스(하이드록시프로필)포스핀(tris(hydroxypropyl)phosphine, THPP) 및 트리뷰틸포스핀(tributylphosphine, TBP)으로 구성된 군으로부터 선택되는 트리알킬포스핀(trialkylphosphine) 제제로 환원시킴으로써 제조되는 것을 특징으로 하는 방법
|
6 |
6
제 4항에 있어서, 설프히드릴기는 탈인산화 아미노산 잔기에 대한 표지반응 직전에 또는 표지반응 중에, 보호된 설프히드릴기를 염기 가수분해 또는 친핵성 치환에 의해 탈보호시킴으로써 제조되는 것을 특징으로 하는 방법
|
7 |
7
제 1항에 있어서, 상기 제 2단계의 표지물질의 링커(linker, L)는 하이드로카본(hydrocarbon), 에틸렌 옥시드(ethylene oxide) 또는 펩티드(peptide)로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 기본골격으로 하는 것을 특징으로 하는 방법
|
8 |
8
제 1항에 있어서, 상기 제 3단계의 표지된 단백질은 질량 분석을 수행하기 전에 효소적 방법 또는 화학적 방법으로 표지된 펩티드로 가수분해되어 분석되는 것을 특징으로 하는 방법
|
9 |
9
제 1항의 분석방법에서, 표지물질을 추가로 2H, 13C, 15N, 17O, 18O 및 34S로 구성된 군으로부터 선택되는 동위원소로 치환시킴으로써, 상기 동위원소로 치환되지 않은 표지물질과 상기 동위원소로 치환한 표지물질 각각을 시료에 각각 표지반응시킨 후, 표지화된 두 시료를 합쳐서 질량분석을 수행하는 방법
|
10 |
10
제 1항의 인산화 단백질 또는 인산화 펩티드의 질량 분석방법에서의 표지화에 이용되는 표지물질에 있어서, 상기 표지물질은 구아니디노알칸티올인 것을 특징으로 하는 표지물질
|
11 |
11
제 10항에 있어서, 상기 구아니디노알칸티올은 구아니디노에탄티올인 것을 특징으로 하는 표지물질
|
12 |
12
제 10항에 있어서, 상기 구아니디노알칸티올은 구아니디노알칸디설피드 또는 구아니디노알킬 티오에스테르로 구성되는 표지물질의 전구체로부터 환원 반응 또는 탈보호 반응에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는 표지물질
|
13 |
13
제 1항에 있어서, 상기 표지물질은 구아니디노알칸티올인 것을 특징으로 하는 방법
|
14 |
14
제 13항에 있어서, 상기 구아니디노알칸티올은 구아니디노에탄티올인 것을 특징으로 하는 방법
|
15 |
15
제 14항에 있어서, 상기 구아니디노알칸티올은 구아니디노알칸디설피드 또는 구아니디노알킬 티오에스테르로 구성되는 표지물질의 전구체로부터 환원 반응 또는 탈보호 반응에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는 방법
|
16 |
16
제 9항에 있어서, 상기 표지물질은 구아니디노알칸티올인 것을 특징으로 하는 방법
|
17 |
17
제 16항에 있어서, 상기 구아니디노알칸티올은 구아니디노에탄티올인 것을 특징으로 하는 방법
|
18 |
18
제 16항에 있어서, 상기 구아니디노알칸티올은 구아니디노알칸디설피드 또는 구아니디노알킬 티오에스테르로 구성되는 표지물질의 전구체로부터 환원 반응 또는 탈보호 반응에 의해 제조되는 것을 특징으로 하는 방법
|