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서열번호 2의 아미노산 서열을 가지는 바실러스 스테아로써머필러스 SD1(Bacillus stearothermophilus SD1) 유래 히단토이나제에서 63, 65 및 159 위치의 아미노산 중 하나 이상의 아미노산이 다른 아미노산으로 치환되어 방향족 기질에 대한 효소활성이 향상된 히단토이나제 변이체
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제1항에 있어서, 159 위치의 페닐알라닌(Phe)이 알라닌(Ala)으로 치환된 히단토이나제 변이체(F159A)
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제1항에 있어서, 63 위치의 메치오닌(Met)이 페닐알라닌(Phe)으로 치환되고, 65 위치의 루이신(Leu)이 발린(Val)으로 치환된 히단토이나제 변이체(M63F/L65V)
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4
제1항에 있어서, 159 위치의 페닐알라닌(Phe)이 알라닌(Ala)으로 치환되고, 65 위치의 루이신(Leu)이 페닐알라닌(Phe)으로 치환된 히단토이나제 변이체(L65F/F159A)
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제2항의 히단토이나제 변이체(F159A)를 코딩하는 유전자
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제5항의 유전자를 함유하는 재조합 벡터
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7
제6항의 재조합 벡터를 박테리아, 효모 및 곰팡이로 구성된 군에서 선택된 숙주세포에 도입하여 수득되는 형질전환된 미생물
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8
제7항에 있어서, 형질전환된 미생물은 대장균인 것을 특징으로 하는 미생물
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9
제3항의 히단토이나제 변이체(M63F/L65V)를 코딩하는 유전자
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10
제9항의 유전자를 함유하는 재조합 벡터
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11
제10항의 재조합 벡터를 박테리아, 효모 및 곰팡이로 구성된 군에서 선택된 숙주세포에 도입하여 수득되는 형질전환된 미생물
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12
제11항에 있어서, 형질전환된 미생물은 대장균인 것을 특징으로 하는 미생물
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13
제4항의 히단토이나제 변이체(L65F/F159A)를 코딩하는 유전자
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14
제13항의 유전자를 함유하는 재조합 벡터
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15
제14항의 재조합 벡터를 박테리아, 효모 및 곰팡이로 구성된 군에서 선택된 숙주세포에 도입하여 수득되는 형질전환된 미생물
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16
제15항에 있어서, 형질전환된 미생물은 대장균인 것을 특징으로 하는 미생물
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17
제7항, 제11항 또는 제15항의 형질전환된 미생물을 배양하는 것을 특징으로 하는 방향족 기질에 대한 효소활성이 향상된 히단토이나제 변이체의 제조방법
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18
다음의 단계를 포함하는 D-아미노산의 제조방법: (a) 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항의 히단토이나제 변이체를 이용하여 D,L-히단토인 유도체로부터 N-카바모일-D-아미노산을 제조하는 단계; 및 (b) 효소 또는 산을 이용하여 상기 제조된 N-카바모일-D-아미노산으로부터 D-아미노산을 제조하는 단계
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제18항에 있어서, D,L-히단토인 유도체는 5-하이드록시페닐히단토인 또는 페닐히단토인인 것을 특징으로 하는 방법
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20
제18항에 있어서, 상기 효소는 N-카바모일라제인 것을 특징으로 하는 방법
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다음의 단계를 포함하는 D-아미노산의 제조방법: (a) 제7항, 제11항 또는 제15항의 형질전환된 미생물을 배양하여 수득되는 전세포(whole cell) 또는 그 부분 파쇄물을 이용하여 D,L-히단토인 유도체로부터 N-카바모일-D-아미노산을 제조하는 단계; 및 (b) 효소 또는 산을 이용하여 상기 제조된 N-카바모일-D-아미노산으로부터 D-아미노산을 제조하는 단계
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22
제21항에 있어서, D,L-히단토인 유도체는 5-하이드록시페닐히단토인 또는 페닐히단토인인 것을 특징으로 하는 방법
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제21항에 있어서, 상기 효소는 N-카바모일라제인 것을 특징으로 하는 방법
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23
제21항에 있어서, 상기 효소는 N-카바모일라제인 것을 특징으로 하는 방법
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