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Ｌ-루신 생성능이 개선된 변이 미생물 및 이를 이용한 Ｌ-루신의 제조방법

  • 기술번호 : KST2015113733
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 L-루신 생성능이 개선된 변이 미생물 및 이를 이용한 L-루신의 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, L-루신 생성 대사경로를 가지는 미생물에서, L-이소루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자, L-발린 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자 및 D-판토텐산 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자가 결실되고, L-루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자의 발현이 증가되도록 변이되고, aceE, aceF, lpdA, pfkA, pfkB, mdh, fba, gnd, aceB, glcB, aceA, glyA 및 folD로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 유전자가 부분 결실되어 있는 것을 특징으로 하는 L-루신 고생성능을 가지는 변이 미생물 및 이를 이용한 L-루신의 제조방법에 관한 것이다. 부위특위적 돌연변이 방법과 대사흐름 조작에 의해 수득된 본 발명에 따른 변이 미생물은 분지쇄 아미노산의 하나인 L-루신을 고효율로 생성할 수 있어, L-루신의 산업적 생성 미생물로 유용하다. 부위특위적 돌연변이화, L-루신, 대장균, 부분 결실
Int. CL C12N 15/31 (2006.01) C12P 13/06 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01)
CPC C12P 13/06(2013.01) C12P 13/06(2013.01) C12P 13/06(2013.01) C12P 13/06(2013.01) C12P 13/06(2013.01) C12P 13/06(2013.01) C12P 13/06(2013.01) C12P 13/06(2013.01)
출원번호/일자 1020090075375 (2009.08.14)
출원인 한국과학기술원
등록번호/일자 10-1119593-0000 (2012.02.16)
공개번호/일자 10-2011-0017747 (2011.02.22) 문서열기
공고번호/일자 (20120306) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2009.08.14)
심사청구항수 24

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이상엽 대한민국 대전광역시 유성구
2 박진환 대한민국 대전광역시 유성구
3 김태용 대한민국 대전광역시 유성구
4 이광호 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이처영 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, **층 (역삼동, 윤익빌딩)(*T국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2009.08.14 수리 (Accepted) 1-1-2009-0498385-66
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2011.03.15 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2011.04.15 수리 (Accepted) 9-1-2011-0033113-49
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2011.06.03 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0307198-06
5 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2011.08.01 수리 (Accepted) 1-1-2011-0593006-98
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2011.09.02 수리 (Accepted) 1-1-2011-0689309-90
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2011.09.02 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-0689308-44
8 등록결정서
Decision to grant		 2012.02.15 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0089258-23
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2013.02.01 수리 (Accepted) 4-1-2013-5019983-17
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157968-69
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5158129-58
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157993-01
13 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2019-5081392-49
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.05.15 수리 (Accepted) 4-1-2020-5108396-12
15 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.06.12 수리 (Accepted) 4-1-2020-5131486-63
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
L-루신 생성 대사경로를 가지는 미생물에서, L-이소루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자, L-발린 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자 및 D-판토텐산 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 100% 결실시키고; L-루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자의 발현이 증가되도록 변이시키고; (a) fba, pfkA 및 pfkB로 구성된 군에서 선택되는 유전자와 mdh 유전자, (b) fba, pfkA 및 pfkB로 구성된 군에서 선택되는 유전자와 aceE, aceF, lpdA 및 folD로 구성된 군에서 선택되는 유전자, 또는 (c) fba, pfkA 및 pfkB로 구성된 군에서 선택되는 유전자, aceE, aceF, lpdA 및 folD로 구성된 군에서 선택되는 유전자, 및 mdh 유전자를, 100% 결실시킨 경우에 비해, L-루신 생산성이 1
2 2
제1항에 있어서, 상기 미생물은 박테리아, 효모 및 곰팡이로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
3 3
제2항에 있어서, 상기 박테리아는 코리네박테리움(Corynebacterium) 속, 브레비박테리움(Brevibacterium) 속 및 대장균으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
4 4
제1항에 있어서, 상기 L-이소루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자는 ilvA(threonine dehydratase를 암호화하는 유전자)인 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
5 5
제1항에 있어서, 상기 L-발린 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자는 ilvE(branched chain amino acid aminotransferase를 암호화하는 유전자)인 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
6 6
제1항에 있어서, 상기 D-판토텐산 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자는 panB(3-methyl-2-oxobutanoate hydroxymethyltransferase를 암호화하는 유전자)인 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
7 7
제1항에 있어서, 상기 L-루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 그 발현이 증가되도록 변이시키는 것은 다음으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법:(a) lacI(lac operon repressor를 암호화하는 유전자) 유전자의 100% 결실; (b) leuA(2-isopropylmalate synthase) 유전자의 피드백 저해(feedback inhibition) 제거; (c) ilvGMEDA(acetohydroxy acid synthase isozyme I), ilvBN(Acetohydroxy acid synthase isozyme II) 및 leuABCD(2-isopropylmalate synthase) 오페론의 attenuator를 포함하는 native promoter를 strong promoter로 치환; 및 (d) strong promoter를 포함하는 발현벡터의 도입
8 8
제7항에 있어서, 상기 strong promoter는 trc promoter, tac promoter, T7 promoter, lac promoter 및 trp promoter로 구성된 군에서 선택된 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
9 9
제7항에 있어서, 상기 strong promoter를 포함하는 발현벡터는 ilvB, ilvN, ilvC 및 ilvD 유전자를 함유하는 벡터와 leuABCD 및 tyrB 유전자를 함유하는 벡터인 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
10 10
제9항에 있어서, 상기 발현벡터는 각각 pKBRilvBNCD 벡터와 pKK184leuABCDtyrB인 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
11 11
제1항에 있어서, 분지쇄 아미노산 엑스포터(exporter) 유전자인 ygaZH를 추가로 증폭 또는 도입시키는 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
12 12
제11항에 있어서, 상기 분지쇄 아미노산 엑스포터(exporter) 유전자는 서열번호 (61) 및 서열번호 (62)의 아미노산 서열을 암호화하는 염기서열로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상이거나, 서열번호 (63)의 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
13 13
제1항에 있어서, L-루신 엑스포터(exporter) 유전자인 yeaS를 추가로 증폭 또는 도입시키는 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
14 14
제13항에 있어서, 상기 L-루신 엑스포터(exporter) 유전자는 서열번호 (64)의 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
15 15
제1항에 있어서, global regulator인 lrp 유전자를 추가로 증폭 또는 도입시키는 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
16 16
제15항에 있어서, 상기 lrp 유전자는 서열번호 (65)의 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
17 17
L-루신 생성 대사경로를 가지는 미생물에서, L-이소루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자, L-발린 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자 및 D-판토텐산 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자가 100% 결실되어 있고; L-루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자의 발현이 증가되도록 변이되어 있고; (a) fba, pfkA 및 pfkB로 구성된 군에서 선택되는 유전자와 mdh 유전자, (b) fba, pfkA 및 pfkB로 구성된 군에서 선택되는 유전자와 aceE, aceF, lpdA 및 folD로 구성된 군에서 선택되는 유전자, 또는 (c) fba, pfkA 및 pfkB로 구성된 군에서 선택되는 유전자, aceE, aceF, lpdA 및 folD로 구성된 군에서 선택되는 유전자, 및 mdh 유전자가, 100% 결실되어 있는 경우에 비해, L-루신 생산성이 1
18 18
(a) ilvA, ilvE 및 panB 유전자가 100% 결실; (b) pfkA 및 mdh 유전자가 100% 결실된 경우에 비해, L-루신 생산성이 1
19 19
제18항에 있어서, 상기 L-루신 고생성능을 가지는 변이 미생물은 L-루신 엑스포터(exporter) 유전자인 서열번호 (64)의 yeaS가 추가로 증폭 또는 도입되어 있는 것을 특징으로 하는 L-루신 고생성능을 가지는 변이 미생물
20 20
제18항에 있어서, 상기 L-루신 고생성능을 가지는 변이 미생물은 서열번호 (65)의 lrp 유전자가 추가로 증폭 또는 도입되어 있는 것을 특징으로 하는 L-루신 고생성능을 가지는 변이 미생물
21 21
(a) ilvA, ilvE 및 panB 유전자가 100% 결실; (b) pfkA, mdh 및 aceF 유전자가 100% 결실된 경우에 비해, L-루신 생산성이 1
22 22
제21항에 있어서, 상기 L-루신 고생성능을 가지는 변이 미생물은 L-루신 엑스포터(exporter) 유전자인 서열번호 (64)의 yeaS가 추가로 증폭 또는 도입되어 있는 것을 특징으로 하는 L-루신 고생성능을 가지는 변이 미생물
23 23
제21항에 있어서, 상기 L-루신 고생성능을 가지는 변이 미생물은 서열번호 (65)의 lrp 유전자가 추가로 증폭 또는 도입되어 있는 것을 특징으로 하는 L-루신 고생성능을 가지는 변이 미생물
24 24
제17항 내지 제23항중 어느 한 항의 변이 미생물을 배양한 다음, 상기 미생물의 배양액으로부터 L-루신을 회수하는 것을 특징으로 하는 L-루신의 제조방법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
국가 R&D 정보가 없습니다.