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특정 뉴클레아제에 의해 세포 내 특정 뉴클레오티드 서열이 절단되거나 또는 상기 절단에 의해 상기 뉴클레오티드 서열이 변형된 세포를 확인 또는 농축시키는 방법으로서,상기 뉴클레아제에 의해 인식되는 표적 서열 및 리포터 유전자를 포함하는 리포터 구성물을 준비하는 단계로서, 상기 리포터 구성물은 상기 뉴클레아제가 상기 표적 서열에 결합하여 리포터 구성물을 절단하는 여부에 따라 상기 리포터 유전자의 발현 여부가 결정되는 것인 제1 단계;상기 리포터 구성물을 후보 세포에 도입시키는 단계로서, 상기 후보 세포 중 일부 또는 전부는 상기 리포터 구성물의 도입 전 또는 후에 상기 뉴클레아제를 발현하는 것인 제2 단계; 및제2 단계의 결과물인 후보 세포로부터 리포터 유전자를 발현하는 세포 또는 리포터 유전자를 발현하지 않는 세포를 분류하는 제3단계;를 포함하는 것이 특징인 방법
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제1항에 있어서, 상기 세포 내 특정 뉴클레오티드 서열은 게놈 상에 존재하는 내재성 뉴클레오티드 서열인 것인 방법
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제1항에 있어서, 상기 리포터 구성물은 상기 뉴클레아제에 의해 인식되는 표적 서열이 리포터 유전자의 중간이나 앞에 삽입되어 있는 것으로, 상기 세포에서 발현되는 뉴클레아제가 상기 표적 서열에 결합하여 리포터 구성물을 절단하는 여부에 따라 상기 리포터 유전자의 발현 여부가 결정되는 것인 방법
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제1항에 있어서, 상기 리포터 구성물은 제1리포터 유전자, 상기 뉴클레아제에 의해 인식되는 표적 서열, 및 제2리포터 유전자가 순차적으로 포함되어 있되, 상기 세포에서 발현되는 뉴클레아제가 상기 표적 서열에 결합하여 리포터 구성물을 절단하는 여부에 따라 상기 제2리포터 유전자의 발현 여부가 결정되는 것인 방법
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제1항에 있어서, 상기 리포터 유전자는 베타-갈락토시다제(beta-galactosidase), 베타-락타마아제(β-lactamase), TEV-프로테아제(TEV-protease), 디히드로엽산환원효소(Dihydrofolate reductase), 루시퍼라제(luciferase), 레닐라 루시퍼라아제(Renilla luciferase), 가우시아 루시퍼라아제(Gaussia luciferase), 선택마커(selection marker), 표면 마커 유전자(surface marker gene), 형광단백질, 및 항생제 저항성 단백질로 구성된 군으로부터 선택된 단백질을 코딩하는 것인 방법
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제4항에 있어서, 상기 제1 리포터 유전자는 적색 형광 단백질을 코딩하는 유전자이고, 제2 리포터 유전자는 녹색 형광 단백질을 코딩하는 유전자인 것인 방법
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제4항에 있어서, 상기 제1 리포터 유전자는 형광 단백질을 코딩하는 유전자이고, 제2 리포터 유전자는 2A-펩타이드를 코딩하는 유전자 및 H-2Kk 유전자가 융합된 것인 방법
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제1항에 있어서, 상기 제2 단계에서 발현되는 상기 뉴클레아제는 일시적으로 세포에서 발현되거나, 세포 내 게놈에 삽입된 상태에서 발현되는 것인 방법
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제1항에 있어서, 상기 뉴클레아제는 징크-핑거 뉴클레아제(zinc-finger nuclease), TALE(Transcription Activator-Like Effectors) 뉴클레아제 또는 메가뉴클레아제(meganuclease)인 것인 방법
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제1항에 있어서, 상기 제3단계의 분류방법은 FACS(Fluorescence-activated cell sorting) 또는 MACS(Magnetic-activated cell sorting)로 세포를 분류하는 것인 방법
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제4항에 있어서, 제3 단계의 세포 분류 단계는 제1 리포터 유전자 및 제2 리포터 유전자가 모두 발현되는 세포를 분류하는 것인 방법
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제1항에 있어서, 리포터 유전자를 발현하는 세포 또는 리포터 유전자를 발현하지 않는 세포를 분류하는 제3 단계를 통해, 상기 뉴클레아제의 활성을 확인하는 것인 방법
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제1항에 있어서, 상기 후보 세포는 유도 만능 줄기세포(induced pluripotent stem cells)인 것인 방법
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제1항에 있어서, 상기 제1 단계 내지 제3 단계를 2회 이상 수행하는 것인 방법
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특정 뉴클레아제에 의해 세포 내 특정 뉴클레오티드 서열이 절단되거나 또는 상기 절단에 의해 상기 뉴클레오티드 서열이 변형된 세포를 확인 또는 농축시키기 위한 리포터 구성물로서, 제1리포터 유전자, 상기 뉴클레아제에 의해 인식되는 표적 서열, 및 제2리포터 유전자가 순차적으로 포함되어 있고, 상기 뉴클레아제가 상기 표적 서열에 결합하여 상기 리포터 구성물을 절단하는 여부에 따라 상기 제2리포터 유전자의 발현 여부가 결정되는 것인 리포터 구성물
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제15항에 있어서, 상기 리포터 유전자는 베타-갈락토시다제(beta-galactosidase), 베타-락타마아제(β-lactamase), TEV-프로테아제(TEV-protease), 디히드로엽산환원효소(Dihydrofolate reductase), 루시퍼라제(luciferase), 레닐라 루시퍼라아제(Renilla luciferase), 가우시아 루시퍼라아제(Gaussia luciferase), 선택마커(selection marker), 표면 마커 유전자(surface marker gene), 형광단백질, 및 항생제 저항성 단백질로 구성된 군으로부터 선택된 단백질을 코딩하는 것인 리포터 구성물
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제15항에 있어서, 상기 구성물은 벡터인 것인 리포터 구성물
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제15항 내지 제17항 중 어느 한 항의 리포터 구성물을 포함하는 숙주세포
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제15항 내지 제17항 중 어느 한 항의 리포터 구성물; 숙주 세포; 뉴클레아제를 발현하는 구성물을 포함하는 뉴클레아제 활성의 모니터링 시스템으로서,상기 리포터 구성물, 상기 뉴클레아제 발현 구성물 또는 둘다는 상기 숙주 세포 내에 도입되어 있거나 세포 외에 별도로 구비되어 있는 것인 시스템
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제19항에 있어서, 상기 뉴클레아제는 일시적으로 세포에서 발현되거나, 세포 내 게놈에 삽입된 상태에서 발현되는 것인 시스템
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