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레귤론 변이를 통한 지방산 및 지방산 유도체 생산에서 불포화도 감소

  • 기술번호 : KST2020000910
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 대장균(Escherichia coli)에서 생성되는 불포화지방산 생산을 줄이기 위해 FadR 전사조절인자(이후 FadR)의 레귤론(regulon)을 재배선(rewiring)시킨 균주를 제작하는 것을 목적으로 한다. FadR은 대장균 내 존재하는 전사조절인자로 지방산 합성 관련 유전자의 발현을 유도한다. 대장균에서 FadR의 발현은 지방산 및 지방산 유도체의 효과적인 과생산 방법이지만 부산물로 다량의 불포화지방산이 생산되는 것이 문제였다. 본 발명에서는 상기 문제를 해결하기 위해 불포화지방산 합성에 관련된 유전자의 프로모터에서 FadR 결합부위를 제거하고, 포화지방산 합성 관련 유전자를 FadR 레귤론에 포함시켰다. 더 나아가 포화지방산 합성 관련 유전자의 프로모터를 FadR에 더 강하게 발현되는 프로모터로 교체한 균주를 제작하였다. 최종적으로 FadR이 발현되는 조건에서도 지방산 및 지방산 유도체 생산에서 불포화지방산의 비율이 낮은 균주를 제작하였다.
Int. CL C12N 15/70 (2006.01.01) C12N 15/67 (2006.01.01) C12P 7/64 (2006.01.01) C07K 14/245 (2006.01.01)
CPC C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01) C12N 15/70(2013.01)
출원번호/일자 1020180083868 (2018.07.19)
출원인 서울대학교산학협력단
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2020-0009462 (2020.01.30) 문서열기
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국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2018.07.19)
심사청구항수 18

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 서울대학교산학협력단 대한민국 서울특별시 관악구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김병기 서울특별시 서초구
2 김준원 서울특별시 용산구
3 이평강 서울특별시 관악구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인코리아나 대한민국 서울특별시 강남구 강남대로 **길 **(역삼동, 케이피빌딩)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 서울대학교산학협력단 서울특별시 관악구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application
2018.07.19 수리 (Accepted) 1-1-2018-0712976-16
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2018.10.12 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2018.12.07 수리 (Accepted) 9-1-2018-0068502-68
4 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2019.05.13 수리 (Accepted) 4-1-2019-5093546-10
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2019.05.14 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0345577-74
6 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2019.05.23 수리 (Accepted) 4-1-2019-5101798-31
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2019.06.10 수리 (Accepted) 1-1-2019-0588218-39
8 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2019.06.10 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2019-0588219-85
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2019.08.02 수리 (Accepted) 4-1-2019-5154561-59
10 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2019.11.19 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2019-0835700-10
11 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2020.01.10 수리 (Accepted) 1-1-2020-0029518-34
12 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2020.01.10 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2020-0029519-80
13 등록결정서
Decision to grant
2020.05.19 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0343378-62
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2020.11.25 수리 (Accepted) 4-1-2020-5265458-48
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번호 청구항
1 1
불포화지방산 비율이 낮은 지방산 또는 지방산 유도체를 생산하기 위한 재조합 대장균으로서 하기를 특징으로 하는 재조합 대장균:a) 지방산 생산 감소 유전자인 fadD가 제거됨;b) fabA, fabB, 또는 fabA 및 fabB의 프로모터에서 FadR의 결합부위가 변이됨;c) fabZ가 FadR 레귤론 중 fabI 오페론에 추가됨;d) 티오에스터라제가 발현됨; 및e) FadR이 과발현됨
2 2
제 1 항에 있어서, 상기 fabI 오페론의 프로모터가 accA 프로모터로 교체된 것을 특징으로 하는 재조합 대장균
3 3
제 1 항에 있어서, 지방산 또는 지방산 유도체가 팔미트산 또는 오메가-수산화팔미트산인 재조합 대장균
4 4
제 1 항에 있어서, FadR의 결합부위가 변이된 fabA의 프로모터의 염기서열이 서열식별번호:1 이고, FadR의 결합부위가 변이된 fabB의 프로모터의 염기서열이 서열식별번호:2 인 재조합 대장균
5 5
제 1 항에 있어서, fabZ가 추가된 fabI 오페론의 염기서열이 서열식별번호:3 인 재조합 대장균
6 6
제 2 항에 있어서, accA 프로모터의 염기서열이 서열식별번호:4 인 재조합 대장균
7 7
제 1 항에 있어서, 티오에스터라제가 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis), 박테로이드 프라질리스(Bacteroides fragilis) 및 대장균(Escherichia coli)로 이루어진 군으로부터 선택되는 균으로부터 유래된 티오에스터라제인 재조합 대장균
8 8
제 7 항에 있어서 티오에스터라제가 서열식별번호:5 의 염기서열로 이루어지는 락토바실러스 브레비스(Lactobacillus brevis) 유래 티오에스터라제, 서열식별번호:6 의 염기서열로 이루어지는 박테로이드 프라질리스(Bacteroides fragilis) 유래 티오에스터라제 및 서열식별번호:7 의 염기서열로 이루어지는 대장균(Escherichia coli) 유래 티오에스터라제로 이루어진 군으로부터 선택되는 재조합 대장균
9 9
제 1 항에 있어서, 추가로 지방산 유도체를 생산하는 유전자가 과발현된 재조합 대장균으로서, 상기 지방산 유도체를 생산하는 유전자가 시토크롬 P450, AlkBGT, 트랜스아미나제(transaminase), 알코올 옥시다아제(alcohol oxidase), 알데히드 옥시다아제(aldehyde oxidase), 및 디하이드로지나아제(dehydrogenase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 효소의 유전자인 재조합 대장균
10 10
삭제
11 11
제 9 항에 있어서, 상기 시토크롬 P450이 CYP153A35 또는 CYP153A35 D131S/G297A인 재조합 대장균
12 12
제 11 항에 있어서, CYP153A35 의 유전자가 서열식별번호:12 의 염기서열로 이루어지고, CYP153A35 D131S/G297A 의 유전자가 서열식별번호:13 의 염기서열로 이루어지는 재조합 대장균
13 13
제 11 항에 있어서, FadL, CamAB, 또는 FadL 및 CamAB가 추가로 과발현된 재조합 대장균
14 14
제 1 항 내지 제 9 항 및 제 11 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 재조합 대장균을 제조하는 방법으로서 하기 단계를 포함하는 제조방법:a) 지방산 생산 감소 유전자인 fadD를 제거하는 단계;b) fabA, fabB, 또는 fabA 및 fabB 의 프로모터에서 FadR의 결합부위에 변이를 가하는 단계;c) fabZ를 FadR 레귤론 중 fabI 오페론에 추가시키는 단계;d) 티오에스터라제를 발현시키는 단계; 및e) FadR을 과발현시키는 단계
15 15
제 14 항에 있어서 f) 상기 fabI 오페론의 프로모터를 accA 프로모터로 교체하는 단계를 추가로 포함하는 제조방법
16 16
제 14 항에 있어서 g) 지방산 유도체를 생산하는 유전자를 과발현시키는 단계를 추가로 포함하는 제조방법으로서, 상기 지방산 유도체를 생산하는 유전자가 시토크롬 P450, AlkBGT, 트랜스아미나제(transaminase), 알코올 옥시다아제(alcohol oxidase), 알데히드 옥시다아제(aldehyde oxidase), 및 디하이드로지나아제(dehydrogenase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 효소의 유전자인 제조방법
17 17
제 14 항에 있어서, 제조방법이 CRISPR-Cas9 시스템을 이용하는 것인 제조방법
18 18
불포화지방산 비율이 낮은 지방산 또는 지방산유도체를 생산하기 위한 재조합 대장균의 공동배양 시스템으로서, 상기 공동배양 시스템은 지방산을 생산하기 위한 재조합 대장균 및 지방산을 가공하기 위한 재조합 대장균을 포함하고, 상기 지방산을 가공하기 위한 재조합 대장균은 지방산 유도체를 생산하는 유전자가 과발현된 것이고,상기 지방산 유도체를 생산하는 유전자가 시토크롬 P450, AlkBGT, 트랜스아미나제(transaminase), 알코올 옥시다아제(alcohol oxidase), 알데히드 옥시다아제(aldehyde oxidase), 및 디하이드로지나아제(dehydrogenase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 효소의 유전자이고,상기 지방산을 생산하기 위한 재조합 대장균은 하기를 특징으로 하는 것인 공동배양 시스템:a) 지방산 생산 감소 유전자인 fadD가 제거됨;b) fabA, fabB, 또는 fabA 및 fabB의 프로모터에서 FadR의 결합부위가 변이됨;c) fabZ가 FadR 레귤론 중 fabI 오페론에 추가됨;d) 티오에스터라제가 발현됨;e) FadR이 과발현됨; 및f) 상기 fabI 오페론의 프로모터가 accA 프로모터로 교체됨
19 19
삭제
20 20
제 18 항에 있어서, 지방산을 생산하기 위한 재조합 대장균 대 지방산을 가공하기 위한 재조합 대장균의 비율이 OD(600 nm) 값을 기준으로 9 대 1 인 공동배양 시스템
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
순번, 연구부처, 주관기관, 연구사업, 연구과제의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 국가R&D 연구정보 정보 표입니다.
순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
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