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대장균 내에서 생산된 단백질을 대장균의 주변세포질(periplasm)로 분비하게 해주는 시그날 펩타이드(signal peptide) 서열이 리파아제의 N-말단에 결합하여 있고, 음이온으로 하전된 극성 사이드 체인(negatively charged polar side chain)을 갖는 아미노산으로 아스파테이트(aspartate) 및 글루타메이트(glutamate) 중 선택되는 어느 하나; 또는, 비전하 극성 사이드 체인(uncharged polar side chain)을 갖는 아미노산으로 아스파라긴(asparagine) 및 글루타민(glutamine) 중 선택되는 어느 하나;가, 상기의 시그날 펩타이드와 리파아제 사이에 2~5개 또는 7개 위치하도록 결합되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 리파아제
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제1항에 있어서,상기 시그날 펩타이드는,PelB인 것을 특징으로 하는 재조합 리파아제
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제1항에 있어서,상기 음이온으로 하전된 극성 사이드 체인(negatively charged polar side chain)을 갖는 아미노산 또는 비전하 극성 사이드 체인(uncharged polar side chain)을 갖는 아미노산은,상기 아미노산 4~5개가 태그 형태로 리파아제에 결합하여 있는 것을 특징으로 하는 재조합 리파아제
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4
제1항에 있어서,상기 재조합 리파아제는,리파아제의 C-말단에 정제용 아미노산 태그가 결합하여 있는 것을 특징으로 하는 재조합 리파아제
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5
제4항에 있어서,상기 정제용 아미노산은,음이온으로 하전된 극성 사이드 체인(negatively charged polar side chain)을 갖는 아미노산인 것을 특징으로 하는 재조합 리파아제
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6 |
6
대장균 내에서 생산된 단백질을 대장균의 주변세포질(periplasm)로 분비하게 해주는 시그날 펩타이드(signal peptide) 서열이 리파아제의 N-말단에 결합하여 있고, 음이온으로 하전된 극성 사이드 체인(negatively charged polar side chain)을 갖는 아미노산으로 아스파테이트(aspartate) 및 글루타메이트(glutamate) 중 선택되는 어느 하나; 또는, 비전하 극성 사이드 체인(uncharged polar side chain)을 갖는 아미노산으로 아스파라긴(asparagine) 및 글루타민(glutamine) 중 선택되는 어느 하나;가 상기의 시그날 펩타이드와 리파아제 사이에 2~5개 또는 7개 위치하도록 결합되어 있는 재조합 리파아제를 대장균을 호스트로 이용해 배양함으로써 생산하는 것을 특징으로 하는 재조합 리파아제의 생산방법
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제6항에 있어서,상기 대장균은,대장균 내에서 생산된 단백질을 대장균의 주변세포질(periplasm)로 분비하게 해주는 시그날 펩타이드(signal peptide) 서열이 리파아제의 N-말단에 결합하여 있고, 음이온으로 하전된 극성 사이드 체인(negatively charged polar side chain)을 갖는 아미노산으로 아스파테이트(aspartate) 및 글루타메이트(glutamate) 중 선택되는 어느 하나; 또는, 비전하 극성 사이드 체인(uncharged polar side chain)을 갖는 아미노산으로 아스파라긴(asparagine) 및 글루타민(glutamine) 중 선택되는 어느 하나;가, 상기의 시그날 펩타이드와 리파아제 사이에 2~5개 또는 7개 위치하도록 결합되어 있는 재조합 리파아제로, 형질전환된 대장균인 것을 특징으로 하는 재조합 리파아제의 생산방법
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8
제6항에 있어서,상기 배양은, 유가식 배양인 것을 특징으로 하는 재조합 리파아제의 생산방법
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제6항 또는 제7항에 있어서,상기 시그날 펩타이드는,PelB인 것을 특징으로 하는 재조합 리파아제의 생산방법
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10
제6항 또는 제7항에 있어서,상기 음이온으로 하전된 극성 사이드 체인(negatively charged polar side chain)을 갖는 아미노산 또는 비전하 극성 사이드 체인(uncharged polar side chain)을 갖는 아미노산은,상기 아미노산 4~5개가 태그 형태로 리파아제에 결합하여 있는 것을 특징으로 하는 재조합 리파아제의 생산방법
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제6항 또는 제7항에 있어서,상기 재조합 리파아제는,리파아제의 C-말단에 정제용 아미노산 태그가 결합하여 있는 것을 특징으로 하는 재조합 리파아제의 생산방법
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12
제11항에 있어서,상기 정제용 아미노산은,음이온으로 하전된 극성 사이드 체인(negatively charged polar side chain)을 갖는 아미노산인 것을 특징으로 하는 재조합 리파아제의 생산방법
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