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3-하이드록실기에 형광을 띄는 장애그룹이 부착된 뉴클레오시드 삼인산을 가역적 종결자로서 이용한 DNA 염기서열 분석 방법

  • 기술번호 : KST2014049330
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 3'-하이드록실기에 형광을 띄는 장애그룹이 부착된 뉴클레오시드 삼인산을 가역적 종결자로서 이용한 DNA 염기서열 분석 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 3'-하이드록실기 부분에 형광신호를 내면서 화학적으로 제거가 가능한 가역적 장애그룹(reversible blocking group)을 부착한 새로운 뉴클레오티드 단량체인 단일 부분이 변형된 가역적 종결자(mono-modified reversible terminator, MRT)를 이용한 합성에 의한 염기서열 분석 방법(sequencing-by-synthesis)에 관한 것이다. 본 발명의 염기서열 분석 방법은 상기 새로운 뉴클레오티드 단량체가 염기서열 사슬의 연장을 중단시킴과 동시에 3'-하이드록실기 부분에 부착된 형광 신호를 감지함으로써 삽입된 염기의 종류를 분석할 수 있으며, 형광 신호 분석 이후 3'-하이드록실기에 부착된 장애그룹이 효과적으로 제거되어서 3'-OH 작용기로 복구되기 때문에 다음 단량체의 삽입을 가능하게 하여 연이어 염기서열 분석을 가능하게 한다. DNA 염기서열 분석(DNA sequencing), 중합효소에 의한 염기서열 분석(sequencing-by-synthesis), 3'-하이드록실기가 변형된 뉴클레오티드(3'-O-modified nucleotide), 형광(fluorescence), 가역적 종결자(reversible terminator).
Int. CL C12Q 1/68 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C07H 21/04 (2006.01) G01N 33/533 (2006.01)
CPC C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01)
출원번호/일자 1020090092296 (2009.09.29)
출원인 한국과학기술연구원
등록번호/일자 10-1107315-0000 (2012.01.11)
공개번호/일자 10-2011-0034838 (2011.04.06) 문서열기
공고번호/일자 (20120120) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2009.09.29)
심사청구항수 8

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술연구원 대한민국 서울특별시 성북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 신동윤 대한민국 서울특별시 강남구
2 안대로 대한민국 서울특별시 성북구
3 안희철 대한민국 서울특별시 강남구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 리앤목특허법인 대한민국 서울 강남구 언주로 **길 **, *층, **층, **층, **층(도곡동, 대림아크로텔)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술연구원 대한민국 서울특별시 성북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2009.09.29 수리 (Accepted) 1-1-2009-0598171-15
2 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2009.12.15 수리 (Accepted) 4-1-2009-5247056-16
3 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2010.02.04 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2010.03.15 수리 (Accepted) 9-1-2010-0015187-50
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2011.04.14 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0200623-89
6 [대리인선임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Appointment of Agent] Report on Agent (Representative)		 2011.04.19 수리 (Accepted) 1-1-2011-0290237-54
7 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2011.06.14 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2011-0449375-20
8 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2011.06.14 수리 (Accepted) 1-1-2011-0449374-85
9 등록결정서
Decision to grant		 2011.12.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2011-0755647-35
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.02.19 수리 (Accepted) 4-1-2014-5022002-69
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
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당(sugar) 부위가 리보오스(ribose) 또는 디옥시리보오스(deoxyribose)인 뉴클레오시드 삼인산(nucleoside triphosphate)의 3'-하이드록실기 부분에 물리 또는 화학적으로 제거가 가능한 가역적 형광그룹이 부착된 뉴클레오티드 단량체로서, 상기 형광그룹은 형광물질(Fluorophore, FL) 단독, 또는 형광물질과 상기 형광물질을 3'-하이드록실기에 연결해주는 링커(linker)로 구성되고, 상기 형광물질은 쿠마린(coumarin), 알렉사플루오르(AlexaFluor), 보디피(Bodipy), 플루오레세인(fluorescein), 테트라메틸로다민(tetramethylrhodamine), Cy5, Cy3 및 텍사스 레드(Texas Red)로 구성된 군으로부터 선택되고, 상기 링커는 알릴(allyl), 아지도메틸(azidomethyl) 및 2- 또는 4-나이트로벤질(2- or 4-nitrobenzyl)로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 뉴클레오티드 단량체
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제 1항에 있어서, 하기 [구조식 2]의 구조를 포함하는 것을 특징으로 하는 뉴클레오티드 단량체: [구조식 2] 상기 [구조식 2]에 있어서, R1은 삼인산(triphosphate)이고, R2는 핵산염기(nucleobase)이며, R3는 쿠마린, 알렉사플루오르, 보디피, 플루오레세인, 테트라메틸로다민, Cy5, Cy3 및 텍사스 레드로 구성된 군으로부터 선택되는 형광물질이고, 상기 링커(Linker)는 알릴, 아지도메틸 및 2- 또는 4-나이트로벤질로 구성된 군으로부터 선택된다
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1) 제 1항의 뉴클레오티드 단량체를 합성하는 단계; 2) 단계 1)의 뉴클레오티드 단량체 또는 이들의 다량체, 및 DNA 또는 RNA 중합효소를 이용하여 분석하고자 하는 주형 핵산 사슬(template)을 중합반응시켜 시발체(primer)에 하나의 뉴클레오타이드를 연장하는 단계; 3) 상기 단계 2)의 중합반응에서 연장된 뉴클레오타이드의 3' 하이드록실기에 부착된 형광그룹의 형광 신호를 감지하여 연장된 뉴클레오타이드의 염기를 인지하는 단계; 4) 단계 3)의 연장된 뉴클레오타이드의 3' 하이드록실기에 부착된 형광 그룹을 제거하여 다음 중합반응이 일어날 수 있도록 3'-OH를 회복시키는 단계; 및 5) 상기 단계 2)에서 4)까지를 반복하는 단계를 통하여 분석하고자 하는 주형 사슬의 염기서열을 결정하는 단계를 포함하는 염기서열 분석방법
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제 6항에 있어서, 단계 2)의 주형 핵산 사슬은 게놈 DNA(genomic DNAs), 플라스미드(plasmids) 및 올리고뉴클레오타이드(oligonucleotides)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염기서열 분석방법
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제 6항에 있어서, 단계 2)의 중합효소는 호열성(thermophilic), 중온성(mesophilic) 중합효소 및 이의 변형체(mutant)로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 염기서열 분석방법
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제 6항에 있어서, 단계 3)의 형광 신호는 주형사슬 및 시발체 DNA의 이중 사슬이 지지되어 있는 고체상의 형광을 감지하거나 상기 이중사슬이 포함되어 있는 용액의 형광 세기를 측정하여 감지하는 것을 특징으로 하는 염기서열 분석방법
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제 6항에 있어서, 단계 4)의 형광그룹은 화합물, 효소 및 빛으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나를 처리하여 제거하는 것을 특징으로 하는 염기서열 분석방법
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제 1항의 뉴클레오티드 단량체 또는 이들의 다량체를 포함하는, 합성에 의한 염기서열 분석(sequencing-by-synthesis, SBS)용 키트
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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 CN102030792 CN 중국 FAMILY
2 EP02305835 EP 유럽특허청(EPO) FAMILY
3 EP02305835 EP 유럽특허청(EPO) FAMILY
4 US08030466 US 미국 FAMILY
5 US20110076679 US 미국 FAMILY

DOCDB 패밀리 정보

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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 CN102030792 CN 중국 DOCDBFAMILY
2 CN102030792 CN 중국 DOCDBFAMILY
3 EP2305835 EP 유럽특허청(EPO) DOCDBFAMILY
4 EP2305835 EP 유럽특허청(EPO) DOCDBFAMILY
5 US2011076679 US 미국 DOCDBFAMILY
6 US8030466 US 미국 DOCDBFAMILY
국가 R&D 정보가 없습니다.