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아데노신 디아미나아제를 이용한 염기 교정 확인 방법

  • 기술번호 : KST2019014546
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 디아미나아제 및 표적특이적 뉴클레아제를 포함하는 염기 교정용 조성물, 및 상기 염기 교정용 조성물을 이용한 염기 교정 방법 및 유전자 변형 동물 제조 방법이 제공된다.
Int. CL C12Q 1/6869 (2018.01.01) C12Q 1/34 (2006.01.01) C12N 9/22 (2006.01.01) C12N 9/78 (2006.01.01) C12N 9/96 (2006.01.01)
CPC
출원번호/일자 1020190009908 (2019.01.25)
출원인 주식회사 툴젠, 서울대학교산학협력단
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2019-0090724 (2019.08.02) 문서열기
공고번호/일자
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보 대한민국  |   1020180009508   |   2018.01.25
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2019.01.25)
심사청구항수 22

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 주식회사 툴젠 대한민국 서울특별시 금천구
2 서울대학교산학협력단 대한민국 서울특별시 관악구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김대식 서울특별시 관악구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 유미특허법인 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 서림빌딩 **층 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
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번호, 서류명, 접수/발송일자, 처리상태, 접수/발송일자의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 행정처리 표입니다.
번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2019.01.25 수리 (Accepted) 1-1-2019-0092560-95
2 보정요구서
Request for Amendment		 2019.01.29 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2019-0018330-70
3 [출원서등 보정]보정서(납부자번호)
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment(Payer number)		 2019.02.19 수리 (Accepted) 1-1-2019-0102260-83
4 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.05.13 수리 (Accepted) 4-1-2019-5093546-10
5 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.05.23 수리 (Accepted) 4-1-2019-5101798-31
6 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.08.02 수리 (Accepted) 4-1-2019-5154561-59
7 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2019.11.14 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
8 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2019.12.09 수리 (Accepted) 9-1-2019-0055769-71
9 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2020.03.18 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0202644-95
10 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견서·답변서·소명서
 2020.05.12 수리 (Accepted) 1-1-2020-0480264-44
11 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2020.05.12 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2020-0480265-90
12 등록결정서
Decision to grant		 2020.10.28 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0745926-01
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
(1) 아데노신 디아미나아제, 이를 암호화 하는 핵산 분자, 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 플라스미드, (2) 불활성화된 표적 특이적 뉴클레아제, 이를 암호화하는 핵산 분자, 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 플라스미드, (3) 가이드 RNA, 및(4) Alkyladenine DNA Glycosylase (AAG)와 엔도뉴클레아제 VIII (endonuclease VIII)의 조합 또는 엔도뉴클레아제 V (endonuclease V)을 포함하고,상기 불활성화된 표적 특이적 뉴클레아제는 DNA 이중 가닥을 모두 절단하는 엔도뉴뉴클레아제 활성을 상실한 것인,아데닌 디아미나제를 사용하는 DNA 이중 가닥 절단용 조성물
2 2
제1항에 있어서, 상기 불활성화된 표적특이적 뉴클레아제는 DNA 이중 가닥을 절단하는 엔도뉴클레아제 활성을 상실한 Cas9 단백질 또는 Cpf1 단백질인, 아데닌 디아미나아제를 사용하는 DNA 이중 가닥 절단용 조성물
3 3
제2항에 있어서, 상기 불활성화된 표적특이적 뉴클레아제는 스트렙토코커스 피요젠스 (Streptococcus pyogenes) 유래의 Cas9 단백질에 아미노산 잔기 D10, H840, F539, M763, 및 K890로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이 원래와 다른 아미노산으로 치환된 돌연변이가 도입된 것인, 아데닌 디아미나아제를 사용하는 DNA 이중 가닥 절단용 조성물
4 4
제1항에 있어서, 상기 아데닌 디아미나아제, 불활성화된 표적특이적 뉴클레아제, 및 가이드 RNA는 (i) 아데노신 디아미나아제, 표적 특이적 뉴클레아제, 및 가이드 RNA의 혼합물, (ii) 아데노신 디아미나아제 암호화 핵산 서열 또는 이를 포함하는 플라스미드, 표적 특이적 뉴클레아제 암호화 핵산 서열 또는 이를 포함하는 플라스미드, 및 가이드 RNA 또는 이의 암호화 핵산 분자를 포함하는 플라스미드의 혼합물, (iii) 아데노신 디아미나아제 및 표적 특이적 뉴클레아제가 연결된 융합 단백질 및 가이드 RNA의 혼합물, (iv) 아데노신 디아미나아제 및 표적 특이적 뉴클레아제가 연결된 융합 단백질 암호화 핵산 분자 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 플라스미드, 및 가이드 RNA 또는 이의 암호화 핵산 분자를 포함하는 플라스미드의 혼합물, 및 (v) 아데노신 디아미나아제 및 표적 특이적 뉴클레아제가 연결된 융합 단백질 및 가이드 RNA의 복합체 또는 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 형태인, 아데닌 디아미나아제를 사용하는 DNA 이중 가닥 절단용 조성물
5 5
제1항에 있어서, 상기 불활성화된 표적특이적 뉴클레아제는, 스트렙토코커스 피요젠스 (Streptococcus pyogenes) 유래의 Cas9 단백질에,아미노산 잔기 D10가 원래 아미노산과 다른 아미노산으로 치환된 돌연변이가 도입되거나,아미노산 잔기 D10 및 H840이 모두 원래 아미노산과 다른 아미노산으로 치환된 돌연변이가 도입되거나아미노산 잔기 F539, M763, 및 K890이 모두 원래 아미노산과 다른 아미노산으로 치환된 돌연변이가 도입된 것인, 아데닌 디아미나아제를 사용하는 DNA 이중 가닥 절단용 조성물
6 6
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 가이드 RNA는 crRNA와 tracrRNA가 서로 결합된 이중 가닥 crRNA:tracrRNA 복합체, 또는 단일 가닥 가이드 RNA (sgRNA)인, 아데닌 디아미나아제를 사용하는 DNA 이중 가닥 절단용 조성물
7 7
(a) (1) 아데노신 디아미나아제, 아데노신 디아미나아제를 암호화하는 핵산 분자, 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 플라스미드, 및 (2) 불활성화된 표적 특이적 뉴클레아제, 불활성화된 표적 특이적 뉴클레아제를 암호화하는 핵산 분자, 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 플라스미드를 분리된 세포에 도입시키거나 또는 분리된 DNA에 처리하여, DNA 이중가닥 중 하나를 절단하는 단계; 및(b) 상기 DNA 이중가닥 중 하나가 절단된 DNA에 Alkyladenine DNA Glycosylase (AAG)와 엔도뉴클레아제 VIII (endonuclease VIII)의 조합, 또는 엔도뉴클레아제 V (endonuclease V)을 처리하여, 나머지 DNA 가닥을 절단하는 단계를 포함하는, 아데닌 디아미나아제를 사용하여 DNA에 이중 가닥 절단 (double strand break)를 생성하는 방법
8 8
(a) (1) 아데노신 디아미나아제, 아데노신 디아미나아제를 암호화하는 핵산 분자, 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 플라스미드, 및 (2) 불활성화된 표적 특이적 뉴클레아제, 불활성화된 표적 특이적 뉴클레아제를 암호화하는 핵산 분자, 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 플라스미드를 분리된 세포에 도입시키거나 또는 분리된 DNA에 처리하여, DNA 이중가닥 중 하나를 절단하는 단계;(b) 상기 DNA 이중가닥 중 하나가 절단된 DNA에 Alkyladenine DNA Glycosylase (AAG)와 엔도뉴클레아제 VIII (endonuclease VIII)의 조합, 또는 엔도뉴클레아제 V (endonuclease V)을 처리하여, 나머지 DNA 가닥을 절단하는 단계; 및(c) 상기 이중가닥 절단된 DNA에 대하여 전체 유전체 시퀀싱 (whole genome sequencing)을 수행하는 단계를 포함하는, 아데닌 디아미나아제에 의하여 염기 교정(base editing)이 도입된 DNA의 핵산 서열 분석 방법
9 9
(a) (1) 아데노신 디아미나아제, 아데노신 디아미나아제를 암호화하는 핵산 분자, 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 플라스미드, 및 (2) 불활성화된 표적 특이적 뉴클레아제, 불활성화된 표적 특이적 뉴클레아제를 암호화하는 핵산 분자, 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 플라스미드를 분리된 세포에 도입시키거나 또는 분리된 DNA에 처리하여, DNA 이중가닥 중 하나를 절단하는 단계;(b) 상기 DNA 이중가닥 중 하나가 절단된 DNA에 Alkyladenine DNA Glycosylase (AAG)와 엔도뉴클레아제 VIII (endonuclease VIII)의 조합, 또는 엔도뉴클레아제 V (endonuclease V)을 처리하여, 나머지 DNA 가닥을 절단하는 단계;(c) 상기 이중가닥 절단된 DNA에 대하여 전체 유전체 시퀀싱 (whole genome sequencing)을 수행하는 단계; 및(d) 상기 시퀀싱으로 수득한 염기서열 데이터 (sequence read)에서 상기 절단된 위치를 확인하는 단계를 포함하는, 아데닌 디아미나아제의 염기 교정 위치 확인 방법
10 10
(a) (1) 아데노신 디아미나아제, 아데노신 디아미나아제를 암호화하는 핵산 분자, 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 플라스미드, 및 (2) 불활성화된 표적 특이적 뉴클레아제, 불활성화된 표적 특이적 뉴클레아제를 암호화하는 핵산 분자, 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 플라스미드를 분리된 세포에 도입시키거나 또는 분리된 DNA에 처리하여, DNA 이중가닥 중 하나를 절단하는 단계;(b) 상기 DNA 이중가닥 중 하나가 절단된 DNA에 Alkyladenine DNA Glycosylase (AAG)와 엔도뉴클레아제 VIII (endonuclease VIII)의 조합, 또는 엔도뉴클레아제 V (endonuclease V)을 처리하여, 나머지 DNA 가닥을 절단하는 단계;(c) 상기 이중가닥 절단된 DNA에 대하여 전체 유전체 시퀀싱 (whole genome sequencing)을 수행하는 단계; 및(d) 상기 시퀀싱으로 수득한 염기서열 데이터 (sequence read)에서 상기 절단된 위치를 확인하는 단계를 포함하는, 아데닌 디아미나아제의 비표적 위치 (off-target site) 확인 방법
11 11
제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 불활성화된 표적특이적 뉴클레아제는 DNA 이중 가닥을 절단하는 엔도뉴클레아제 활성을 상실한 Cas9 단백질 또는 Cpf1 단백질인, 방법
12 12
제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 불활성화된 표적특이적 뉴클레아제는 스트렙토코커스 피요젠스 (Streptococcus pyogenes) 유래의 Cas9 단백질에 아미노산 잔기 D10, H840, F539, M763, 및 K890로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상이 원래와 다른 아미노산으로 치환된 돌연변이가 도입된 것인, 방법
13 13
제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서,상기 아데닌 디아미나아제, 불활성화된 표적특이적 뉴클레아제, 및 가이드 RNA는 (i) 아데노신 디아미나아제, 표적 특이적 뉴클레아제, 및 가이드 RNA의 혼합물, (ii) 아데노신 디아미나아제 암호화 핵산 서열 또는 이를 포함하는 플라스미드, 표적 특이적 뉴클레아제 암호화 핵산 서열 또는 이를 포함하는 플라스미드, 및 가이드 RNA 또는 이의 암호화 핵산 분자를 포함하는 플라스미드의 혼합물, (iii) 아데노신 디아미나아제 및 표적 특이적 뉴클레아제가 연결된 융합 단백질 및 가이드 RNA의 혼합물, (iv) 아데노신 디아미나아제 및 표적 특이적 뉴클레아제가 연결된 융합 단백질 암호화 핵산 분자 또는 상기 핵산 분자를 포함하는 플라스미드, 및 가이드 RNA 또는 이의 암호화 핵산 분자를 포함하는 플라스미드의 혼합물, 및 (v) 아데노신 디아미나아제 및 표적 특이적 뉴클레아제가 연결된 융합 단백질 및 가이드 RNA의 복합체 또는 혼합물로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 형태로 사용되는 것인, 방법
14 14
제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 불활성화된 표적특이적 뉴클레아제는, 스트렙토코커스 피요젠스 (Streptococcus pyogenes) 유래의 Cas9 단백질에, 아미노산 잔기 D10가 원래 아미노산과 다른 아미노산으로 치환된 돌연변이가 도입되거나,아미노산 잔기 D10 및 H840이 모두 원래 아미노산과 다른 아미노산으로 치환된 돌연변이가 도입되거나아미노산 잔기 F539, M763, 및 K890이 모두 원래 아미노산과 다른 아미노산으로 치환된 돌연변이가 도입된 것인,방법
15 15
제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 가이드 RNA는 crRNA와 tracrRNA가 서로 결합된 이중 가닥 crRNA:tracrRNA 복합체, 또는 단일 가닥 가이드 RNA (sgRNA)인, 방법
16 16
제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 시험관 내 (in vitro)에서 수행되는 것인, 방법
17 17
제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 (a)의 분리된 DNA는 유전체 DNA인, 방법
18 18
제10항에 있어서, 상기 단계 (d) 이후에,상기 절단 위치가 표적 위치 (on-target site)가 아닌 경우, 비표적 위치 (off-target site)로 판단하는 단계를 추가로 포함하는, 방법
19 19
제10항에 있어서, 상기 단계 (d)에서 확인된 절단 위치는 수득한 염기서열 데이터를 정렬하여 5' 말단이 수직 정렬된 위치, 또는 5' 말단 플롯에서 이중 피크 패턴을 보이는 위치인 것인, 방법
20 20
제19항에 있어서, 상기 정렬은 표준 염기서열 (reference genome)로 염기서열 데이터를 맵핑한 뒤, BWA/GATK 또는 ISAAC을 이용하여 수행되는 것인, 방법
21 21
제19항에 있어서, 왓슨 가닥 (Watson strand)과 크릭 가닥 (Crick strand)에 해당하는 염기서열 데이터 (sequence read)가 각각 두 개 이상씩 수직으로 정렬되는 위치를 비표적 위치인 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는, 방법
22 22
제19항에 있어서, 20 % 이상의 염기서열 데이터가 수직으로 정렬되고, 각각의 왓슨 가닥 및 크릭 가닥에서 동일한 5' 말단을 가진 염기서열 데이터의 수가 10 이상인 위치가 비표적 위치인 것으로 판단하는 단계를 추가로 포함하는, 방법
지정국 정보가 없습니다
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1 WO2019147073 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
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