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유전체 유래 인공 ncRNA 발현 라이브러리 및 이의 제조방법

  • 기술번호 : KST2019024040
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 인공 ncRNA 발현 라이브러리 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 구체적으로, 본 발명은 대장균의 전체 유전체 DNA를 무작위로 자른 무작위 조각화 DNA를 이중 줄기-고리를 갖는 RNA 골격 중간에 클로닝함으로써 인공 ncRNA의 안정성을 확보한 라이브러리 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
Int. CL C12N 15/10 (2017.01.01) C12N 15/70 (2006.01.01)
CPC C12N 15/1086(2013.01) C12N 15/1086(2013.01)
출원번호/일자 1020160102606 (2016.08.11)
출원인 한국과학기술원
등록번호/일자 10-1803472-0000 (2017.11.24)
공개번호/일자
공고번호/일자 (20171228) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2016.08.11)
심사청구항수 14

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이영훈 대한민국 대전광역시 유성구
2 김원경 대한민국 대전광역시 유성구
3 박근우 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 유미특허법인 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 서림빌딩 **층 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2016.08.11 수리 (Accepted) 1-1-2016-0782930-11
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2016.10.11 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2016.11.24 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-6-2017-0075770-78
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2017.05.23 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0358662-82
5 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2017.07.24 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2017-0711276-51
6 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2017.07.24 수리 (Accepted) 1-1-2017-0711275-16
7 등록결정서
Decision to grant		 2017.11.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0811177-09
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2019-5081392-49
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.05.15 수리 (Accepted) 4-1-2020-5108396-12
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.06.12 수리 (Accepted) 4-1-2020-5131486-63
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
대장균 전체 유전체 DNA를 30 내지 100bp 크기로 무작위 조각화하고, 무작위 조각화 DNA 말단을 비부착성 말단(blunt end)으로 만드는 단계;비부착성 말단이 형성된 DNA 단편을 플라스미드 DNA에 연결하여 인공 비암호화 RNA(non-coding RNA; ncRNA) 발현 플라스미드를 제조하는 단계;인공 ncRNA 발현 플라스미드로 세포를 형질전환시키는 단계; 및형질전환된 세포로부터 인공 ncRNA 발현 플라스미드를 정제하여 인공 ncRNA 발현 라이브러리를 제작하는 단계를 포함하는, 인공 ncRNA 발현 라이브러리 제조방법으로서,상기 인공 ncRNA 발현 플라스미드는, 서열번호 1의 이중 줄기-고리(double stem-loop)형태의 RNA 골격을 발현하는 DNA 서열을 포함하고,상기 RNA 골격의 이중 줄기-고리 사이에 위치하는, 비부착성 말단을 만드는 제한효소가 인식하는 인식자리에, 비부착성 말단이 형성된 DNA 단편이 삽입되어 있으며,상기 인공 ncRNA 발현 플라스미드에서 발현되는 ncRNA는, 상기 제한효소 자리에 삽입된 대장균 유전체 유래 DNA 단편과 상기 이중 줄기-고리 형태의 RNA 골격을 포함하는 것인,대장균의 유전자 발현을 조절하는 ncRNA를 선발하는 것을 특징으로 하는, 대장균 전체 유전체를 포함하는 인공 ncRNA 발현 라이브러리 제조방법
2 2
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3 3
제1항에 있어서, 상기 플라스미드 DNA는,플라스미드에 제한 효소를 처리하는 단계; 및인산가수분해효소 (phosphatase) 처리하는 단계;를 포함하는 단계로 준비하는 것인, 인공 ncRNA 발현 라이브러리 제조방법
4 4
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5 5
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6 6
삭제
7 7
제1항에 있어서, 상기 제한효소 자리는 SmaI 제한효소 자리인 것인, 인공 ncRNA 발현 라이브러리 제조방법
8 8
삭제
9 9
제1항에 있어서, 상기 전체 유전체 DNA는 DNA 가수분해효소(DNase)를 이용하여 조각화하는 것인, 인공 ncRNA 발현 라이브러리 제조방법
10 10
제1항에 있어서, 상기 전체 대장균 유전체 DNA의 무작위 조각화는,망간 이온의 농도, 및 DNA 가수분해효소 처리 시간 및 온도를 조절하여 무작위 조각화 DNA의 길이를 조절하는 것인, 인공 ncRNA 발현 라이브러리 제조방법
11 11
제10항에 있어서, 상기 전체 대장균 유전체 DNA의 무작위 조각화는, 망간 이온의 농도는 5 내지 15 mM에서 수행하는 것인, 인공 ncRNA 발현 라이브러리 제조방법
12 12
제10항에 있어서, 상기 DNA 가수분해효소 처리는 15 내지 25℃에서 5 내지 7분 동안 수행하는 것인, 인공 ncRNA 발현 라이브러리 제조방법
13 13
제1항에 있어서, 상기 무작위 조각화 DNA 말단을 비부착성 말단(blunt end)으로 만드는 단계는, DNA 중합효소를 이용하여 무작위 조각화 DNA의 3' 돌출부(overhang)는 분해하고, 반응용액 교체없이 dNTP만 추가해 5' 돌출부는 채우는 방법으로 제조하는 것인, 인공 ncRNA 발현 라이브러리 제조방법
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삭제
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제1항에 있어서, 상기 인공 ncRNA 발현 라이브러리를 제작하는 단계 이후에 콜로니 PCR 반응을 수행하고, 인공 ncRNA의 크기를 조사하여 라이브러리 제작을 검증하는 단계를 추가로 수행하는 것인, 인공 ncRNA 발현 라이브러리 제조방법
17 17
제16항에 있어서, 상기 PCR 반응은 서열번호 2 및 서열번호 3의 염기서열로 이루어진 프라이머쌍을 사용하여 수행하는 것인, 인공 ncRNA 발현 라이브러리 제조방법
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19 19
삭제
20 20
제1항, 제3항, 제7항, 제9항 내지 제13항, 제16항 및 제17항 중 어느 한 항의 방법에 따라 제작된, 대장균 전체 유전체를 포함하는 인공 ncRNA 발현 라이브러리
21 21
제20항의 대장균의 전체 유전체의 인공 ncRNA 발현 라이브러리로 세포를 형질전환하고 인공 ncRNA 발현을 유도하여 세포의 스트레스 저항성을 향상시키는 인공 ncRNA를 스크리닝하는 방법
22 22
제21항에 있어서, 상기 스트레스 저항성을 향상시키는 인공 ncRNA는 서열번호 4 내지 12로 이루어진 군에서 선택된 염기서열을 포함하고, 페놀에 대한 저항성 향상용 인공 ncRNA이거나, 서열번호 13 내지 31로 이루어진 군에서 선택된 염기서열을 포함하고, 신남알데히드에 대한 저항성 향상용 인공 ncRNA인, 인공 ncRNA를 스크리닝하는 방법
23 23
제20항의 대장균의 전체 유전체의 인공 ncRNA 발현 라이브러리를 포함하는, 대장균의 유전자 발현을 조절하는 ncRNA의 선발용 조성물
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2 US2018044666 US 미국 DOCDBFAMILY
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1 미래창조과학부 한국과학기술원 기초연구실육성사업 질병극복을 위한 케미컬 바이올로지 나노바이오융합 기반기술개발
2 미래창조과학부 한국과학기술원 중견연구자지원사업 세포내 핵심 조절 인자로서의 ncRNA의 새로운 작용 메커니즘의 규명
3 미래창조과학부 한국과학기술원 글로벌프론티어연구개발사업 친환경 선충 퇴치제 고효율 생산