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대장균 유래 ｐｔｓＬ 프로모터를 함유하는 재조합벡터 및이를 이용한 외래 단백질의 제조방법

  • 기술번호 : KST2015112827
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 대장균 유래 ptsL 프로모터를 함유하는 재조합벡터 및 이를 이용한 외래 단백질의 생산방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 대장균 유래 ptsL 프로모터 및 외래 단백질을 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합벡터가 도입된 형질전환체를 이용하여 외래 단백질을 세포 성장 정지기에 선택적으로 발현시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 성장 정지기에 자동 발현되는 ptsL 프로모터를 이용하여 외래 단백질이나 펩타이드를 성장 정지기에 효율적으로 발현시킬 수 있고, 특정 유도체 없이 성장기에 따라 자동으로 발현되므로 경제적이며, 고농도 배양에서의 낮은 발현 효율 문제를 해결하는데 유용하다. ptsL 프로모터, 성장 정지기 발현, 발현 억제 단백질, 유해 단백질, 항미생물 펩타이드
Int. CL C12N 15/66 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
CPC C07K 14/245(2013.01) C07K 14/245(2013.01) C07K 14/245(2013.01) C07K 14/245(2013.01) C07K 14/245(2013.01)
출원번호/일자 1020070082686 (2007.08.17)
출원인 한국과학기술원
등록번호/일자 10-0963302-0000 (2010.06.04)
공개번호/일자 10-2009-0018315 (2009.02.20) 문서열기
공고번호/일자 (20100611) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2007.08.17)
심사청구항수 24

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이상엽 대한민국 대전시 유성구
2 박태정 대한민국 대전시 서구
3 정순 중국 대전시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이처영 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, **층 (역삼동, 윤익빌딩)(*T국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2007.08.17 수리 (Accepted) 1-1-2007-0594645-93
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2008.05.13 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2008.06.13 수리 (Accepted) 9-1-2008-0038262-12
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2009.06.30 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2009-0275463-57
5 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2009.08.28 수리 (Accepted) 1-1-2009-0529703-10
6 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2009.12.30 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2009-0535785-75
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2010.03.02 수리 (Accepted) 1-1-2010-0133186-96
8 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2010.03.02 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2010-0133207-67
9 등록결정서
Decision to grant		 2010.05.31 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2010-0234344-41
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2013.02.01 수리 (Accepted) 4-1-2013-5019983-17
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157968-69
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5158129-58
13 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157993-01
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2019-5081392-49
15 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.05.15 수리 (Accepted) 4-1-2020-5108396-12
16 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.06.12 수리 (Accepted) 4-1-2020-5131486-63
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
대장균(Escherichia coli) 유래 ptsL 프로모터 및 외래 단백질을 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
2 2
제1항에 있어서, 상기 ptsL 프로모터는 서열번호 1의 염기서열을 가지는 ptsL 프로모터 활성체(activator)를 코딩하는 DNA를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
3 3
대장균(Escherichia coli) 유래 ptsL 프로모터, ptsL 유전자의 발현 조절 단백질을 코딩하는 유전자, 상기 발현 조절 단백질을 코딩하는 유전자의 발현용 프로모터 및 외래 단백질을 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
4 4
제3항에 있어서, 상기 ptsL 프로모터는 서열번호 1의 염기서열을 가지는 ptsL 프로모터 활성체(activator)를 코딩하는 DNA를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
5 5
제3항에 있어서, 상기 ptsL 유전자의 발현 조절 단백질을 코딩하는 유전자는 ptsL 유전자의 발현 억제 단백질을 코딩하는 유전자(mlc)인 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
6 6
제5항에 있어서, 상기 mlc 유전자는 서열번호 2의 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
7 7
제3항에 있어서, 상기 발현 조절 단백질을 코딩하는 유전자의 발현용 프로모터는 BAD 프로모터인 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
8 8
제7항에 있어서, 상기 BAD 프로모터는 서열번호 3의 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
9 9
제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 외래 단백질은 펩타이드, 폴리펩타이드, 결합 단백질, 결합도메인, 부착 단백질, 구조 단백질, 조절 단백질, 독소 단백질, 효소, 효소저해제, 호르몬, 호르몬 유사체, 항체, 신호 전달 단백질, 단쇄 항체, 항원, 사이토카인, 조절 인자 및 그 일부로 구성된 그룹으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
10 10
제9항에 있어서, 상기 펩타이드는 항미생물 펩타이드인 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
11 11
제10항에 있어서, 상기 항미생물 펩타이드는 뷰포린 Ⅱ(BuforinⅡ) 또는 인돌리시딘(indolicidin)인 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
12 12
제1항 또는 제2항의 재조합벡터로 형질전환된 재조합 미생물을 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
13 13
제12항에 있어서, 형질전환에 사용된 미생물은 외래 단백질의 세포 내 과발현에 유리하도록, 발현된 외래 단백질에 분해하는데 관련된 세포 내 또는 세포 외의 단백질 분해효소를 생산하지 못하도록 변형된 것임을 특징으로 하는 재조합 미생물을 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
14 14
제3항 내지 제8항 중 어느 한 항의 재조합벡터로 형질전환된 재조합 미생물을 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
15 15
제14항에 있어서, 형질전환에 사용된 미생물은 외래 단백질의 세포 내 과발현에 유리하도록, 발현된 외래 단백질에 분해하는데 관련된 세포 내 또는 세포 외의 단백질 분해효소를 생산하지 못하도록 변형된 것임을 특징으로 하는 형질전환된 재조합 미생물을 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물
16 16
제12항의 재조합 미생물을 배양하여 외래 단백질을 성장 정지기에 발현시키는 단계; 및 상기 발현된 외래 단백질을 회수하는 단계를 포함하는 외래 단백질의 제조방법
17 17
제16항에 있어서, 상기 외래 단백질은 펩타이드, 폴리펩타이드, 결합 단백질, 결합도메인, 부착 단백질, 구조 단백질, 조절 단백질, 독소 단백질, 효소, 효소저해제, 호르몬, 호르몬 유사체, 항체, 신호 전달 단백질, 단쇄 항체, 항원, 사이토카인, 조절 인자 및 그 일부로 구성된 그룹으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방법
18 18
제17항에 있어서, 상기 펩타이드는 항미생물 펩타이드인 것을 특징으로 하는 방법
19 19
제14항의 재조합 미생물을 배양하여 외래 단백질을 성장 정지기에 발현시키는 단계; 및 상기 발현된 외래 단백질을 회수하는 단계를 포함하는 외래 단백질의 제조방법
20 20
제19항에 있어서, 상기 외래 단백질은 펩타이드, 폴리펩타이드, 결합 단백질, 결합도메인, 부착 단백질, 구조 단백질, 조절 단백질, 독소 단백질, 효소, 효소저해제, 호르몬, 호르몬 유사체, 항체, 신호 전달 단백질, 단쇄 항체, 항원, 사이토카인, 조절 인자 및 그 일부로 구성된 그룹으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방법
21 21
제20항에 있어서, 상기 펩타이드는 항미생물 펩타이드인 것을 특징으로 하는 방법
22 22
다음 단계를 포함하는 외래 단백질의 개량방법: (a) 외래 단백질을 코딩하는 유전자의 변이체 라이브러리를 구축하는 단계; (b) 상기 외래 단백질의 변이체가 ptsL 프로모터를 코딩하는 유전자에 의해 발현되도록, 대장균 유래 ptsL 프로모터 및 외래 단백질을 코딩하는 유전자 변이체 라이브러리를 함유하는 유전자 재조합체 라이브러리를 제작하는 단계; (c) 상기 유전자 재조합체 라이브러리 또는 상기 유전자 재조합체 라이브러리를 포함하는 벡터로 그람음성균, 그람양성균, 방선균, 효모 및 곰팡이로 구성된 그룹으로부터 선택되는 미생물 숙주세포를 형질전환하는 단계; (d) 상기 형질전환된 숙주세포를 배양하여 상기 유전자 변이체 라이브러리를 세포 성장 정지기에 발현하는 단계; 및 (e) 개량된 형질을 갖는 외래 단백질이 발현된 세포를 스크리닝하는 단계
23 23
다음 단계를 포함하는 외래 단백질의 개량방법: (a) 외래 단백질을 코딩하는 유전자의 변이체 라이브러리를 구축하는 단계; (b) 상기 외래 단백질의 변이체가 ptsL 프로모터를 코딩하는 유전자에 의해 발현되도록, 대장균 유래 ptsL 프로모터, ptsL 유전자의 발현 조절 단백질을 코딩하는 유전자, 상기 발현 조절 단백질을 코딩하는 유전자의 발현용 프로모터 및 외래 단백질을 코딩하는 유전자 변이체 라이브러리를 함유하는 유전자 재조합체 라이브러리를 제작하는 단계; (c) 상기 유전자 재조합체 라이브러리 또는 상기 유전자 재조합체 라이브러리를 포함하는 벡터로 그람음성균, 그람양성균, 방선균, 효모 및 곰팡이로 구성된 그룹으로부터 선택되는 미생물 숙주세포를 형질전환하는 단계; (d) 상기 형질전환된 숙주세포를 배양하여 상기 유전자 변이체 라이브러리를 세포 성장 정지기에 발현하는 단계; 및 (e) 개량된 형질을 갖는 외래 단백질이 발현된 세포를 스크리닝하는 단계
24 24
제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 스크리닝 단계는 외래 단백질의 활성, 외래 단백질에 라벨링된 물질을 인식하는 단백질, 외래 단백질에 결합하는 라벨링된 리간드 또는 외래 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하는 것을 특징으로 하는 외래 단백질의 개량방법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
국가 R&D 정보가 없습니다.