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초음파 영상 기반의 유전자 전달 기술을 이용한 형질전환 동물의 제조방법

  • 기술번호 : KST2014050439
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 초음파 영상 기반의 유전자 전달(Ultrasound Image-guided Gene Delivery, UIGD) 기술을 이용한 형질전환 동물의 제조방법에 관한 것으로서, 구체적으로 초음파 영상을 기반으로 유전자를 전달함으로써 E8.5 내지 E9.5의 초기 발생 단계의 마우스 배아의 뇌실에 유전자를 주입할 수 있고, 마우스 백혈병 바이러스(Murine Leukemia Virus, MLV) 기반 레트로바이러스 벡터, 또는 이의 3'LTR이 마우스 줄기세포 바이러스(Murine Stem Cell Virus, MSCV)의 3'LTR로 치환된 레트로바이러스 벡터는 바이러스 역가가 향상되어 고농도로 생산 가능하며, 목적 단백질을 코딩하는 유전자 및 MSCV 3'LTR을 갖는 MLV 기반 레트로바이러스 벡터와, 수포성 구내염 바이러스-G(vescular stomatitis virus, VSV-G) 단백질을 외피 단백질로서 사용하여 제조한 레트로바이러스를 마우스 배아의 뇌실에 주입함으로써, 목적 단백질이 초기 발생 단계의 마우스 배아 및 성체의 뇌세포에서 안정적으로 발현됨을 확인하였으므로, 최적화된 UIGD 기술 및 유전자 전달체는 목적 단백질이 뇌세포 특이적으로 발현하는 형질전환 동물의 제조에 유용하게 이용할 수 있다.
Int. CL C12N 15/867 (2006.01.01) A01K 67/027 (2006.01.01) C12N 15/85 (2006.01.01) C12N 15/89 (2017.01.01)
CPC C12N 15/867(2013.01) C12N 15/867(2013.01) C12N 15/867(2013.01) C12N 15/867(2013.01) C12N 15/867(2013.01) C12N 15/867(2013.01)
출원번호/일자 1020100139050 (2010.12.30)
출원인 서울대학교산학협력단
등록번호/일자 10-1257002-0000 (2013.04.16)
공개번호/일자 10-2012-0077182 (2012.07.10) 문서열기
공고번호/일자 (20130426) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2010.12.30)
심사청구항수 15

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 서울대학교산학협력단 대한민국 서울특별시 관악구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김선영 대한민국 경기도 포천시
2 윤기정 대한민국 경기도 과천시 관문로 ,

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이원희 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 서울대학교산학협력단 서울특별시 관악구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2010.12.30 수리 (Accepted) 1-1-2010-0876760-65
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2011.08.09 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2011.09.15 수리 (Accepted) 9-1-2011-0073131-98
4 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2011.09.27 수리 (Accepted) 4-1-2011-5195109-43
5 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2012.08.24 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2012-0493282-30
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2012.10.24 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2012-0867353-54
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2012.10.24 수리 (Accepted) 1-1-2012-0867351-63
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2013.01.14 수리 (Accepted) 4-1-2013-5007213-54
9 등록결정서
Decision to grant		 2013.02.18 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2013-0107799-69
10 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2013.05.15 수리 (Accepted) 1-1-2013-0428095-84
11 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2013.06.04 수리 (Accepted) 1-1-2013-0496511-15
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2015.03.17 수리 (Accepted) 4-1-2015-5033829-92
13 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2015.05.13 수리 (Accepted) 4-1-2015-5062924-01
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.05.13 수리 (Accepted) 4-1-2019-5093546-10
15 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.05.23 수리 (Accepted) 4-1-2019-5101798-31
16 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.08.02 수리 (Accepted) 4-1-2019-5154561-59
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번호 청구항
1 1
1) 캡시드 단백질(nucleocapsid protein, gag), 역전사효소(reverse transcriptase, pol) 및 외피 단백질(envelope protein, env)을 코딩하는 유전자가 포함되지 않은 마우스 백혈병 바이러스(Murine Leukemia Virus, MLV) 유래의 복제-결핍 레트로바이러스 벡터에 하나 이상의 목적 단백질을 코딩하는 유전자가 5' 긴 말단 반복부(long terminal repeat, LTR)와 3'LTR 사이에 포함되고 상기 3'LTR의 유전자 전장이 마우스 줄기세포 바이러스(Murine Stem Cell Virus, MSCV) 유래의 3'LTR 유전자로 치환된 재조합 레트로바이러스 벡터를 제조하는 단계;2) 단계 1)에서 제조한 재조합 레트로바이러스 벡터, 및 수포성 구내염 바이러스 G(vescular stomatitis virus, VSV-G) 당단백질 발현벡터를 이용하여 레트로바이러스 입자를 제조하는 단계;3) 배아(embryo)가 존재하는 인간을 제외한 포유동물 모체의 자궁을 초음파에 노출시켜 초음파 영상(ultrasound image)을 통해 상기 단계 2)에서 수득한 레트로바이러스 입자를 배아의 뇌실(ventricle) 부위에 미세주입(microinjection)하는 단계; 및4) 단계 3)에서 레트로바이러스 입자가 미세주입된 배아를 모체 내에서 발생시키는 단계를 포함하고, 상기 단계 2)의 레트로바이러스 입자는 VSV-G 슈도타입의 레트로바이러스(VSV-G pseudotyped retrovirus) 입자인, 목적 단백질이 뇌세포 특이적으로 발현하는 형질전환 동물의 제조방법
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1) 캡시드 단백질(nucleocapsid protein, gag), 역전사효소(reverse transcriptase, pol) 및 외피 단백질(envelope protein, env)을 코딩하는 유전자가 포함되지 않은 마우스 백혈병 바이러스(Murine Leukemia Virus, MLV) 유래의 복제-결핍 레트로바이러스 벡터에 하나 이상의 목적 단백질을 코딩하는 유전자가 5' 긴 말단 반복부(long terminal repeat, LTR)와 3'LTR 사이에 포함된 재조합 레트로바이러스 벡터를 제조하는 단계;2) 단계 1)에서 제조한 재조합 레트로바이러스 벡터, 및 수포성 구내염 바이러스 G(vescular stomatitis virus, VSV-G) 당단백질 발현벡터를 이용하여 레트로바이러스 입자를 제조하는 단계;3) 배아(embryo)가 존재하는 인간을 제외한 포유동물 모체의 자궁을 초음파에 노출시켜 초음파 영상(ultrasound image)을 통해 상기 단계 2)에서 수득한 레트로바이러스 입자를 배아의 뇌실(ventricle) 부위에 미세주입(microinjection)하는 단계; 및4) 단계 3)에서 레트로바이러스 입자가 미세주입된 배아를 모체 내에서 발생시키는 단계를 포함하고, 상기 단계 2)의 레트로바이러스 입자는 VSV-G 슈도타입의 레트로바이러스(VSV-G pseudotyped retrovirus) 입자인, 목적 단백질이 뇌세포 특이적으로 발현하는 형질전환 동물의 제조방법
3 3
제 1항 또는 제 2항 중 어느 한 항에 있어서, 단계 2)의 레트로바이러스 입자는 단계 1)의 재조합 레트로바이러스 벡터, 레트로바이러스 유래의 gag-pol 발현벡터, 및 수포성 구내염 바이러스 G(vescular stomatitis virus, VSV-G) 당단백질 발현벡터를 숙주세포에 공형질전환(cotransfection)하여 제조하는 것을 특징으로 하는 형질전환 동물의 제조방법
4 4
제 3항에 있어서, 상기 숙주세포는 293T 세포인 것을 특징으로 하는 형질전환 동물의 제조방법
5 5
제 3항에 있어서, 상기 공형질전환은 리포펙타민 매개된 방법, 인산 칼슘(CaPO4) 침전법, 염화 칼슘(CaCl2) 침전법, DEAE-덱스트란-매개된 방법, 폴리브렌-매개된 방법, 전기천공법(electroporation), 미세주입(microinjection), 리포좀 융합, 원형질체 융합, 레트로바이러스 감염 및 바이오리스틱스(biolistics)를 사용하여 전달하는 방법으로 구성된 군으로부터 선택되는 어느 하나의 방법을 사용하여 수행하는 것을 특징으로 하는 형질전환 동물의 제조방법
6 6
삭제
7 7
제 1항 또는 제 2항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 2)에서 수득한 레트로바이러스 입자에, 숙주세포에 대한 레트로바이러스 입자의 결합활성을 유도하는 물질인 폴리브렌(polybrene), 리포펙타민(lipofectamince) 또는 폴리에틸렌이민(polyethyleneimine, PEI)을 처리하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 형질전환 동물의 제조방법
8 8
제 7항에 있어서, 상기 폴리브렌(polybrene)은 최종농도 60 ~ 100 ㎍/㎖로 처리하는 것을 특징으로 하는 형질전환 동물의 제조방법
9 9
제 1항 또는 제 2항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 3)의 포유동물은 마우스, 랫드, 돼지, 토끼, 기니아피그, 햄스터, 개, 고양이, 소 및 염소로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 형질전환 동물의 제조방법
10 10
제 9항에 있어서, 상기 포유동물은 마우스인 것을 특징으로 하는 형질전환 동물의 제조방법
11 11
제 1항 또는 제 2항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 3)의 배아는 배자기(embryonic day) 6 내지 14일의 배아인 것을 특징으로 하는 형질전환 동물의 제조방법
12 12
제 11항에 있어서, 상기 배아는 배자기 8 내지 12일의 배아인 것을 특징으로 하는 형질전환 동물의 제조방법
13 13
제 11항에 있어서, 상기 배아는 배자기 8
14 14
제 1항 또는 제 2항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 단계 3)의 미세주입은 말단이 10° 내지 50°로 연마된 마이크로피펫(micropipette)을 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 형질전환 동물의 제조방법
15 15
제 14항에 있어서, 상기 미세주입은 말단이 20° 내지 30°로 연마된 마이크로피펫(micropipette)을 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 형질전환 동물의 제조방법
16 16
제 14항에 있어서, 상기 미세주입은 말단이 25°로 연마된 마이크로피펫(micropipette)을 사용하여 수행되는 것을 특징으로 하는 형질전환 동물의 제조방법
17 17
삭제
18 18
삭제
19 19
삭제
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