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미생물 탈리 및 페놀-클로로포름을 이용한 동물성 식품으로부터 메타게놈 DNA의 분리방법(Method for isolation of metagenomic DNA from animal food with detaching of bacteria and phenol-chloroform)

  • 기술번호 : KST2017010537
  • 담당센터 : 서울동부기술혁신센터
  • 전화번호 : 02-2155-3662
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 미생물 탈리 및 페놀-클로로포름을 이용한 동물성 식품으로부터 메타게놈 DNA의 분리방법에 관한 것으로, 기존 상용화 키트를 이용하는 경우에 비하여 동물성 식품으로부터 박테리아의 메타제노믹 DNA를 높은 수율로 분리할 수 있다. 따라서, 본 발명을 이용할 경우, 동물성 식품에 감염되어 있는 박테리아를 PCR 등의 방법을 통해 정확하게 검출할 수 있다.
Int. CL C12Q 1/68 (2016.02.23) C12N 15/10 (2016.02.23)
CPC C12Q 1/6806(2013.01) C12Q 1/6806(2013.01) C12Q 1/6806(2013.01)
출원번호/일자 1020150181805 (2015.12.18)
출원인 대한민국 (식품의약품안전처장), 서울대학교산학협력단
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2017-0073192 (2017.06.28) 문서열기
공고번호/일자 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2015.12.18)
심사청구항수 3

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 대한민국 (식품의약품안전처장) 대한민국 충청북도 청주시 흥덕구
2 서울대학교산학협력단 대한민국 서울특별시 관악구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 곽효선 대한민국 충청북도 청주시 흥덕구
2 김순한 대한민국 충청북도 청주시 흥덕구
3 이우정 대한민국 충청북도 청주시 흥덕구
4 이주훈 대한민국 경기도 수원시 영통구
5 김봉수 대한민국 서울특별시 강서구
6 윤현진 대한민국 경기도 수원시 장안구
7 최상호 대한민국 경기도 양평군
8 김희발 대한민국 서울특별시 서초구
9 정한영 대한민국 서울특별시 서초구
10 김수연 대한민국 서울특별시 관악구
11 나은정 대한민국 경기도 성남시 분당구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 특허법인태동 대한민국 서울특별시 구로구 가마산로 ***, ***호(구로동, 대림오피스밸리)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 서울대학교산학협력단 대한민국 서울특별시 관악구
2 대한민국(관리청: 특허청장, 승계청: 식품의약품안전처장) 대한민국
번호, 서류명, 접수/발송일자, 처리상태, 접수/발송일자의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 행정처리 표입니다.
번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2015.12.18 수리 (Accepted) 1-1-2015-1244788-48
2 보정요구서
Request for Amendment		 2015.12.22 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2015-0191421-46
3 [출원서등 보정]보정서
[Amendment to Patent Application, etc.] Amendment		 2016.01.19 수리 (Accepted) 1-1-2016-0062019-54
4 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2016.08.23 수리 (Accepted) 4-1-2016-5119884-11
5 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2016.09.20 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
6 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2016.12.06 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-6-2016-0161551-92
7 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2016.12.09 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0889718-15
8 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2017.02.07 수리 (Accepted) 1-1-2017-0128303-87
9 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2017.03.09 수리 (Accepted) 1-1-2017-0238001-06
10 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2017.04.10 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2017-0348923-78
11 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2017.04.10 수리 (Accepted) 1-1-2017-0348924-13
12 등록결정서
Decision to grant		 2017.07.09 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2017-0478046-58
13 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.05.13 수리 (Accepted) 4-1-2019-5093546-10
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.05.23 수리 (Accepted) 4-1-2019-5101798-31
15 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.08.02 수리 (Accepted) 4-1-2019-5154561-59
16 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.11.25 수리 (Accepted) 4-1-2020-5265458-48
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
필터-백(Filtra-bag)에 BPW(buffered peptone water)와 동물성 식품 샘플을 넣은 후, 스핀들(spindle) 또는 스토마커(stomacher) 기계를 사용하여 미생물을 탈리하는 단계 (1); 상기 단계 (1) 후, 멸균된 비커에 멸균된 거즈를 씌우고 상기에서 탈리된 미생물을 포함하는 BPW를 붓는 단계 (2);상기 단계 (2) 후, 원심분리기를 이용하여 1차 원심분리하는 단계 (3);상기 1차 원심분리 후, 상층액을 버리고, 펠렛을 TES 버퍼로 풀어준 후, 2차 원심분리하는 단계 (4);상기 2차 원심분리 후, 상층액을 버리고, 펠렛을 TE 버퍼에 풀어주는 단계 (5);상기 단계 (5) 후, 라이소자임(lysozyme)을 섞어준 후, 반응시켜 1차 반응물을 생성시키는 단계 (6);상기 단계 (6)의 반응물을 얼린 뒤, 해동하는 단계 (7);상기 해동 후, EDTA, 프로티나아제 K 및 SDS로 조성된 프로티나아제 K 혼합물을 첨가한 뒤, 37℃에서 1시간 동안 수행함으로써 반응시켜 2차 반응물을 생성시키는 단계 (8);상기 2차 반응물에 페놀, 클로로포름, 이소아밀알코올이 25:24:1의 중량비로 혼합된 용액을 2차 반응물과 동일한 양만큼 첨가한 뒤, 층이 보이지 않을 때까지 인버팅(inverting) 하여 섞어주는 단계 (9);상기 단계 (9) 후, 3차 원심분리하고, 두 개의 분리된 층 중 윗 층을 분리하여 새로운 튜브(tube)에 옮겨 담는 단계 (10);상기 단계 (10) 후, RNase A를 튜브에 첨가한 뒤 반응시켜 3차 반응물을 생성시키는 단계 (11); 상기 단계 (11) 후, 3차 반응물에 NaOAc를 넣고, 인버팅하여 섞어준 뒤, 아이스-콜드(ice-cold) 에탄올을 첨가하는 단계 (12); 상기 단계 (12) 후, 4차 원심분리하는 단계 (13);상기 4차 원심분리 후, 상층액을 제거하고, 아이스-콜드 에탄올로 펠렛을 씻어주는 단계 (14);상기 단계 (14) 후, 5차 원심분리하는 단계 (15);상기 5차 원심분리 후, 상층액을 버리고 펠렛을 상온에서 충분히 말리는 단계 (16);상기 단계 (16) 후, TE 버퍼를 넣고, 펠렛을 녹이는 단계 (17);을 포함하는 것을 특징으로 하는 동물성 식품으로부터 메타게놈 DNA의 분리방법
2 2
제1항에 있어서, 상기 단계 (1) 중, 스핀들은, 탈리 과정 중 식품 조직이 와해되거나, 분리될 가능성이 높은 동물성 식품에 적용하고, 그렇지 않은 동물성 식품에는 스토마커를 적용하는 것을 특징으로 하는 동물성 식품으로부터 메타게놈 DNA의 분리방법
3 3
제1항에 있어서, 상기 1차 원심분리는, 4℃, 9000 rpm으로 15분간 수행하고, 상기 2차 원심분리는, 4℃, 6000 rpm으로 10분간 수행하며, 상기 3차 원심분리는, 4℃, 5000 rpm으로 5분간 수행하고, 상기 4차 원심분리는, 4℃, 13200 rpm으로 20분간 수행하며, 상기 5차 원심분리는 4℃, 13200 rpm으로 5분간 수행하는 것을 특징으로 하는 동물성 식품으로부터 메타게놈 DNA의 분리방법
4 4
삭제
5 5
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6 6
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7 7
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8 8
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9 9
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10 10
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11 11
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12 12
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지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
순번, 연구부처, 주관기관, 연구사업, 연구과제의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 국가R&D 연구정보 정보 표입니다.
순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 식품의약품안전처 서울대학교 식중독균유전체연구사업 내 식물성 식품 유래 식중독균의 분자생물학적 특성 분석 및 유전체 정보 확보