1 |
1
서열번호 1로 표시되는 C-글리코실전이효소(C-glycosyltransferase)에서 F17, V93, V132, Y193, L164 및 R322로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 아미노산에 변이를 포함하는 C-글리코실전이효소 (C-glycosyltransferase) 변이체
|
2 |
2
제1항에 있어서, 상기 변이체는 서열번호 1로 표시되는 C-글리코실 전이효소에서, 다음으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 아미노산에 변이를 추가로 포함하는 C-글리코실전이효소 변이체:F17, V405, P107, L208, L164, P45, I305, L316, F401, Y94, N57, Y187, C16, P319, F167, V132, N206, R406, Q386, V129, L125, L194, I95, S215, L184, Y158, L29, L27, F202, H159, S370, H365, V329, M301, V315, V190, C366, W80, L58, Q210, F312, D61, I207, L363, P196, L106, V93, A394, W314, S155, P88, D99, Y284, E189, G49, H328, E399, T392, F387, A44, P199, E46, R28, V285, I124, R419, L306, Y157, Y200, E373, P191, L214, S376, V15, E332, E51, I417, L98, I323, H161, T383, P127, E309, N84, L313, Q104, T371, N213, G79, L330, N307, K105, L128, A152, I18, N59, W147, S86, L293, E296, S377, L185, K216, F89, S286, F396, F211, Y303, D223, R415, N96, V22, S153, F154, D192, Y193, H195, P201, Y292, 및 R322
|
3 |
3
제1항에 있어서, 상기 아미노산 변이는 V93 및 Y193 아미노산에 변이를 포함하는 것을 특징으로 하는, C-글리코실전이효소 (C-glycosyltransferase) 변이체
|
4 |
4
제1항에 있어서, F17G, V93Q, V132A, Y193F, L164G 및 R322D로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 C-글리코실전이효소 (C-glycosyltransferase) 변이체
|
5 |
5
제3항에 있어서, V93Q 및 Y193F 아미노산 치환을 포함하는 것을 특징으로 하는 C-글리코실전이효소 (C-glycosyltransferase) 변이체
|
6 |
6
제2항에 있어서, 다음으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 C-글리코실 전이효소 변이체:F17G, V405M, P107G, L208G, L164G, P45G, I305A, L316G, F401H, Y94G, N57G, Y187A, C16G, P319G, F167G, V132A, N206E, R406G, Q386H, V129A, L125V, L194A, I95G, S215D, L184G, Y158T, L29A, L27A, F202S, H159G, S370A, H365G, V329T, M301W, V315A, V190A, C366G, W80Y, L58E, Q210G, F312G, D61G, I207P, L363G, P196G, L106G, V93G, A394G, W314C, S155A, P88D, D99G, Y284H, E189A, G49TH328G, E399D, T392A, F387T, A44G, P199E, E46G, R28G, V285I, I124T, R419A, L306M, Y157T, Y200L, E373A, P201G, P191G, L214A, S376G, V15G, E332P, E51C, I417L, L98G, I323A, H161G, T383C, P127A, E309N, N84S, L313T, Q104D, T371A, N213L, G79S, L330G, N307A, K105G, L128D, A152G, S153G, I18A, N59V, W147F, S86V, L293V, E296D, S377A, L185V, K216R, F89A, S286C, F396L, F211G, Y303A, D223G, R415L, N96A, V22H, V93Q, V93L, S153C, F154L, D192S, Y193F, H195Y, H195L, P201T, Y292H, Y292F, R322D 및 R322A
|
7 |
7
제4항에 있어서, 다음으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 C-글리코실 전이효소 변이체:I18P, Q20M, T50N, T50Q, T50K, T50R, T50V, I95M, I95T, V290G, V290A, I323S, I323A, I95L, V22A, L29A, E46G, V48G, E51C, A55S, S86V, D99G, R103V, C151G, L184G, L194A, E332P, I18A 및 P385A
|
8 |
8
제7항에 있어서, 다음으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 C-글리코실 전이효소 변이체:I323S, T50R, T50V, I18P, I95T, Q20M, I323A, P385A, L194A 및 V48G
|
9 |
9
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 변이체를 암호화하는 핵산
|
10 |
10
제9항의 핵산이 도입된 재조합 미생물
|
11 |
11
제10항에 있어서, 상기 재조합 미생물은 UTP-글루코오스-1-포스페이트 우리딜트렌스퍼라아제 (UTP-glucose-1-phosphate uridylyltransferase), 포스포글루코뮤타아제(phosphoglucomutase) 및/또는 뉴클레오시드-디포스페이트 키나제(nucleoside-diphosphate kinase)를 암호화하는 유전자의 발현이 강화되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
|
12 |
12
제10항에 있어서, 상기 재조합 미생물은 폴리케타이드 배당체 및/또는 페닐프로파노이드 배당체 생산용인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
|
13 |
13
제12항에 있어서, 상기 재조합 미생물은 폴리케타이드 합성효소 또는 페닐프로파노이드 합성효소가 추가로 도입된 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
|
14 |
14
제12항에 있어서, 상기 재조합 미생물은 pabA 유전자의 발현이 약화되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
|
15 |
15
제12항에 있어서, 상기 폴리케타이드는 라파마이신(rapamycin), 로바스타틴(lovastatin), 에리트로마이신(erythromycin), 리파마이신(rifamycin), 아버멕틴(avermectin), 겔다나마이신(geldanamycin), 이버멕틴(ivermectin), 칼리케아마이신(calicheamicin), 에포타일론(epothilone), 트라이아세트산 락톤(triacetic acid lactone) 및 6-메틸살리실산(6-methylsalicylic acid)로 구성된 군에서 선택되는 타입 I 폴리케타이드;액티로노딘(actinorhodin), 독소루비신(doxorubicin), 다우노루비신(daunorubicin), 옥시테트라사이클린(oxytetracycline), SEK4, SEK4b, SEK34, SEK15, SEK26, FK506, DMAC, 아클라비논(aklavinone), 아클라노닉산(aklanonic acid), 엡실론 로도마이시논(epsilon-rhodomycinone), 독시사이클린(doxycycline), 안트라마이신(anthramycin), 테트라세노마이신(tetracenomycin), 카르민산(Carmin acid) 및 프레놀리신(frenolicin)로 구성된 군에서 선택되는 타입 II 폴리케타이드; 및알로에신(aloesin), 알로에닌(aloenin), 바바로인(barbaloin), 5,7-다이하이드록시-2-메틸크로몬(5,7-dihydroxy-2-methylchromone) 및 알로에손(aloesone)로 구성된 군에서 선택되는 타입 III 폴리케타이드;로 구성된 군에서 선택되고,상기 페닐프로파노이드는 액티노마이신(actinomycin), 바키트라신(bacitracin), 답토마이신(daptomycin), 밴코마이신(vancomycin), 테익소박틴(teixobactin), 타이로시딘(tyrocidine), 그라미시딘(gramicidin), 즈위터미신 A(zwittermicin A), 블레오마이신(bleomycin), 시클로스포린(ciclosporin), 피오버딘(pyoverdine), 엔테로박틴(enterobactin), 믹소켈린 A(myxochelin A), 인디고이딘(indigoidine), 사이아노피신(cyanophycin) 등으로 구성된 비리보솜 펩티드, 피노켐브린(pinocembrin), 다이하이드로캄페롤(dihydrokaempferol), 에리오딕티올(eriodictyol), 다이하이드로쿼세틴(dihydroquercetin), 코리페릴알코올(coniferyl alcohol), 실리빈 (silybin), 아이소실리빈 (isosilybin), 실리크리스틴 (silychristin), 실리나이드(silinide), 2,3-디하이드로실리빈(2,3-dehydrosilybin), 실리다이아닌(silydianin), 다이드제인(daidzein), 게니스타인(genistein), 아피게닌(apigenin), 루테올린(luteolin), 캄페롤(kaempferol), 쿼세틴(quercetin), 카테킨(catechin), 페라고니딘(pelargonidin), 시아니딘(cyanidin), 압젤레친(afzelechin), 미리세틴(myricetin), 피세틴(fisetin), 갈랑긴(galangin), 헤스페레틴(hesperetin), 탄제리틴(tangeritin), 델피니딘(delphinidin), 에피카테킨(epicatechin), 크리신(chrysin), 레스베라트롤(resveratrol) 및 나린제닌(naringenin)으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
|
16 |
16
제12항에 있어서,(i) 타입 II 폴리케타이드 생합성 효소를 암호화하는 유전자;(ii) 4'-포스포판테인닐 전이효소 (4'-phosphopantetheinyl transferase)를 암호화하는 유전자;(iii) 사이클라아제(cyclase)를 암호화하는 유전자;(iv) 아세틸-CoA 카르복실화 효소 (acetyl-CoA carboxylase)를 암호화하는 유전자; 및(v) 아클라비네온 12-수산화효소 (aklavinone 12-hydroxylase)를 암호화하는 유전자;로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 유전자가 도입되고,상기 폴리케타이드 배당체는 카르민산인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
|
17 |
17
제16항에 있어서, 상기 타입 II 폴리케타이드 생합성 효소를 암호화하는 유전자는 antD (ketosynthase), antE (chain-length factor), antF (ACP), antB (phosphopantetheinyl transferase) 및 antG (malonyl-CoA:ACP malonyltransferase)로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 유전자 또는 이들의 조합인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
|
18 |
18
제16항에 있어서, 상기 아클라비네온 12-수산화효소는 서열번호 2로 표시되는 아미노산 서열에서 217번째 아미노산이 프롤린에서 라이신으로의 변이(P217K)를 포함하는 것을 재조합 미생물
|
19 |
19
제16항에 있어서, 상기 타입 II 폴리케타이드 생합성 효소는 P
|
20 |
20
제12항에 있어서, (i) 알로에손 합성효소(aloesone synthase)를 암호화하는 유전자가 도입되어 있고,상기 폴리케타이드 배당체는 알로에신인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
|
21 |
21
제20항에 있어서, 상기 알로에손 합성효소는 R
|
22 |
22
다음 단계를 포함하는 폴리케타이드 배당체 및/또는 페닐프로파노이드 배당체의 제조방법:(a) 제10항의 재조합 미생물을 배양하여 폴리케타이드 배당체 및/또는 페닐프로파노이드 배당체를 생성시키는 단계; 및(b) 상기 생성된 폴리케타이드 배당체 및/또는 페닐프로파노이드 배당체를 회수하는 단계
|
23 |
23
제22항에 있어서, 상기 재조합 미생물은 폴리케타이드 배당체 및/또는 페닐프로파노이드 배당체의 전구체 생산능을 갖는 것을 특징으로 하는 제조방법
|
24 |
24
제22항에 있어서, 상기 (a) 단계는 제10항의 재조합 미생물을 폴리케타이드 및/또는 페닐프로파노이드가 첨가된 배지에서 배양하는 것을 특징으로 하는 제조방법
|
25 |
25
제22항에 있어서, 상기 폴리케타이드 배당체는 카르민산이고, 상기 (a)단계는 배양시 배양 배지에 아스코르빈산을 첨가하여 미생물을 배양하는 것을 특징으로 하는 제조방법
|
26 |
26
다음 단계를 포함하는 폴리케타이드 배당체 및/또는 페닐프로파노이드 배당체의 제조방법:(a) 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항의 C-글리코실전이효소 변이체 또는 상기 C-글리코실전이효소 변이체를 발현하는 미생물과 폴리케타이드 및/또는 페닐프로파노이드를 반응시켜 폴리케타이드 배당체 및/또는 페닐프로파노이드 배당체를 생성시키는 단계; 및(b) 상기 생성된 폴리케타이드 배당체 및/또는 페닐프로파노이드 배당체를 회수하는 단계
|