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비바이러스성 유전자편집 CRISPR 나노복합체 및 이의 제조방법

  • 기술번호 : KST2018016442
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 비바이러스성 유전자편집 CRISPR 나노복합체, 그의 제조방법 등에 관한 것이다. 본 발명에 의한 비바이러스성 유전자편집 CRISPR 나노복합체는 수 나노미터~수 마이크론 단위의 크기이고, 외부의 물리적인 자극 없이 세포내 전달이 가능하고, 세포의 표적유전자에 대해 비바이러스성 경로에 의한 유전자편집에 유용하게 활용할 수 있다. 결과적으로 상기 CRISPR 나노복합체를 동물모델 제작, 미생물공학, 질병 치료를 위한 세포공학 또는 생체 투여 제형에 이용할 경우, 높은 세포내 전달 및 유전자편집 효율을 보이고, 비특이적 편집, 유전자변이, 세포 및 생체독성 유발 등의 문제를 최소화할 수 있다.
Int. CL C12N 15/10 (2017.01.01) C12N 15/113 (2010.01.01) C12N 15/90 (2006.01.01) C12N 9/22 (2006.01.01)
CPC C12N 15/102(2013.01) C12N 15/102(2013.01) C12N 15/102(2013.01) C12N 15/102(2013.01)
출원번호/일자 1020170075053 (2017.06.14)
출원인 한국과학기술원
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2018-0136293 (2018.12.24) 문서열기
공고번호/일자
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2020.04.01)
심사청구항수 22

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 정현정 대한민국 대전광역시 유성구
2 강유경 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 공병욱 대한민국 서울특별시 관악구 남부순환로 ****(봉천동), ***호(제니스특허법률사무소)

최종권리자

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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2017.06.14 수리 (Accepted) 1-1-2017-0568900-22
2 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2019-5081392-49
3 [대리인사임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Resignation of Agent] Report on Agent (Representative)		 2019.12.19 수리 (Accepted) 1-1-2019-1313521-11
4 [심사청구]심사청구서·우선심사신청서
 2020.04.01 수리 (Accepted) 1-1-2020-0341107-13
5 [우선심사신청]심사청구서·우선심사신청서
 2020.04.02 수리 (Accepted) 1-1-2020-0347174-02
6 [우선심사신청]선행기술조사의뢰서
[Request for Preferential Examination] Request for Prior Art Search		 2020.04.03 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
7 [우선심사신청]선행기술조사보고서
[Request for Preferential Examination] Report of Prior Art Search		 2020.04.09 수리 (Accepted) 9-1-2020-0014866-10
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.05.15 수리 (Accepted) 4-1-2020-5108396-12
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.06.12 수리 (Accepted) 4-1-2020-5131486-63
10 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2020.06.26 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0439177-65
11 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견서·답변서·소명서
 2020.08.25 수리 (Accepted) 1-1-2020-0895442-97
12 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2020.08.25 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2020-0895441-41
13 거절결정서
Decision to Refuse a Patent		 2020.10.30 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2020-0754436-41
14 [법정기간연장]기간 연장신청서·기간 단축신청서·기간 경과 구제신청서·절차 계속신청서
 2020.12.02 수리 (Accepted) 1-1-2020-1306568-16
15 법정기간연장승인서
 2020.12.07 발송처리완료 (Completion of Transmission) 1-5-2020-0184963-78
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
고분자 캐리어 물질-접합 CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats) 효소 단백질
2 2
제 1 항에 있어서, 상기 CRISPR 유전자편집 효소 단백질은 Cas1(CRISPR associated protein 1), Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas9, Cse1, Cse2, Cse3, Cse4, Cas5d, Cas5e, Csy1, Csy2, Csy3, Csy4, Cpf1, Csn1, Csn2, Csd1, Csd2, Cst1, Cst2, Cas5t, Csh1, Csh2, Cas5h, Csa1, Csa2, Csa3, Csa4, Csa5, Cas5a, Csm1, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Cmr1, Cmr2, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, C2c2(Cas13a), dCas9(dead Cas9), Cas9 nickase, CDA(cytidine deaminase enzyme), APOBEC(apolipoprotein B editing complex)14, UGI(uracil glycosylase inhibitor), 및 AID(activation-induced deaminase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 고분자 캐리어 물질-접합 CRISPR 효소 단백질
3 3
제 1 항에 있어서, 상기 고분자 캐리어 물질은 가지형 폴리에틸렌이민, 선형 폴리에틸렌이민, 폴리프로필렌이민, 폴리아미도아민, 폴리에틸렌글리콜, 폴리에틸렌옥사이드-폴리프로필렌옥사이드 공중합체, 폴리-락트산, 폴리-글리콜산, 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산, 폴리카프로락톤, 폴리포스포에스터, 폴리포스파진, 폴리베타아미노에스터, 가지형 폴리아미노에스터, 폴리아미노부틸-글리콜산, 폴리오르소에스터, 폴리하이드록시프롤린에스터, 폴리아크릴아마이드, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐알코올, poly(2-(dimethylamino)ethylmethacrylate) (PDMAEMA), 덴드리머, 히알루론산, 알긴산, 키토산, 덱스트란, 사이클로덱스트린, 스퍼민, 폴리-Arginine, 폴리-Lysine, 및 이들의 공중합체 또는 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 고분자 캐리어 물질-접합 CRISPR 효소 단백질
4 4
제 1 항에 있어서, 상기 고분자 캐리어 물질과 CRISPR 효소 단백질은 SMCC(succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate)), sulfo-SMCC(sulfosuccinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate), AMAS(N-α-maleimidoacet-oxysuccinimide ester), BMPS(N-β-maleimidopropyl-oxysuccinimide ester), GMBS(N-γ-maleimidobutyryl-oxysuccinimide ester), MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester), EMCS(N-ε-malemidocaproyl-oxysuccinimide ester), SM(PEG) (PEGylated SMCC), SPDP(succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate), PEG-SPDP(PEGylated SPDP), DSG(disuccinimidyl glutarate), DCC(Dicyclohexylcarbodiimide), DSS(disuccinimidyl suberate), BS3(Bissulfosuccinimidyl suberate), DSP(dithiobis(succinimidyl propionate)), EGS(ethylene glycol bis(succinimidyl succinate)), DMP(dimethyl pimelimidate), BMOE(bismaleimidoethane), BMB(1,4-bismaleimidobutane), DTME(dithiobismaleimidoethane), EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride), NHS(N-Hydroxysuccinimide), 프로파길-숙신이미딜-에스테르(propargyl-succinimidyl-ester), DBCO-말레이미드(Dibenzocyclooctyne-maleimide), DBCO-PEG-말레이미드(Dibenzocyclooctyne-PEG4-maleimide), DBCO-S-S-NHS 에스테르(Dibenzocyclooctyne-S-S-N-hydroxysuccinimidyl ester), DBCO-NHS 에스테르(dibenzocyclooctyne-N-hydroxysuccinimidyl ester), 아세틸렌-PEG-NHS 에스테르(acetylene-PEG-NHS ester), 및 알킬렌-PEG-말레이미드(alkyne-PEG-maleimide)로 이루어진 군으로부터 선택된 가교제로 접합(conjugation)된 것을 특징으로 하는, 고분자 캐리어 물질-접합 CRISPR 효소 단백질
5 5
다음 단계를 포함하는 고분자 캐리어 물질-접합 CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats) 효소 단백질의 제조방법:(a) 고분자 캐리어 물질의 기능기를 양기능성 가교제(bifunctional crosslinker)로 반응시켜 활성화된 고분자 캐리어 물질을 제조하는 단계; 및(b) CRISPR 효소 단백질의 기능기를 상기 활성화된 고분자 캐리어 물질과 반응시켜 접합 물질을 제조하는 단계
6 6
제 5 항에 있어서, 상기 CRISPR 효소 단백질은 Cas1(CRISPR associated protein 1), Cas2, Cas3, Cas4, Cas5, Cas6, Cas9, Cse1, Cse2, Cse3, Cse4, Cas5d, Cas5e, Csy1, Csy2, Csy3, Csy4, Cpf1, Csn1, Csn2, Csd1, Csd2, Cst1, Cst2, Cas5t, Csh1, Csh2, Cas5h, Csa1, Csa2, Csa3, Csa4, Csa5, Cas5a, Csm1, Csm2, Csm3, Csm4, Csm5, Cmr1, Cmr2, Cmr3, Cmr4, Cmr5, Cmr6, dCas9(dead Cas9), Cas9, C2c2 (Cas13a), CDA(cytidine deaminase enzyme), APOBEC(apolipoprotein B editing complex)14, UGI(uracil glycosylase inhibitor), 및 AID(activation-induced deaminase)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 고분자 캐리어 물질-접합 CRISPR 효소 단백질의 제조방법
7 7
제 5 항에 있어서, 상기 (a) 단계의 고분자 캐리어 물질은 가지형 폴리에틸렌이민, 선형 폴리에틸렌이민, 폴리프로필렌이민, 폴리아미도아민, 폴리에틸렌글리콜, 폴리에틸렌옥사이드-폴리프로필렌옥사이드 공중합체, 폴리-락트산, 폴리-글리콜산, 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산, 폴리카프로락톤, 폴리포스포에스터, 폴리포스파진, 폴리베타아미노에스터, 가지형 폴리아미노에스터, 폴리아미노부틸-글리콜산, 폴리오르소에스터, 폴리하이드록시프롤린에스터, 폴리아크릴아마이드, 폴리비닐피롤리돈, 폴리비닐알코올, poly(2-(dimethylamino)ethylmethacrylate) (PDMAEMA), 덴드리머, 히알루론산, 알긴산, 키토산, 덱스트란, 사이클로덱스트린, 스퍼민, 폴리-Arginine, 폴리-Lysine, 및 이들의 공중합체 또는 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 고분자 캐리어 물질-접합 CRISPR 효소 단백질의 제조방법
8 8
제 5 항에 있어서, 상기 (a) 단계의 가교제는 SMCC(succinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate)), sulfo-SMCC(sulfosuccinimidyl 4-(N-maleimidomethyl)cyclohexane-1-carboxylate), AMAS(N-α-maleimidoacet-oxysuccinimide ester), BMPS(N-β-maleimidopropyl-oxysuccinimide ester), GMBS(N-γ-maleimidobutyryl-oxysuccinimide ester), MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxysuccinimide ester), EMCS(N-ε-malemidocaproyl-oxysuccinimide ester), SM(PEG) (PEGylated SMCC), SPDP(succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate), PEG-SPDP(PEGylated SPDP), DSG(disuccinimidyl glutarate), DCC(Dicyclohexylcarbodiimide), DSS(disuccinimidyl suberate), BS3(Bissulfosuccinimidyl suberate), DSP(dithiobis(succinimidyl propionate)), EGS(ethylene glycol bis(succinimidyl succinate)), DMP(dimethyl pimelimidate), BMOE(bismaleimidoethane), BMB(1,4-bismaleimidobutane), DTME(dithiobismaleimidoethane), EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride), NHS(N-Hydroxysuccinimide), 프로파길-숙신이미딜-에스테르(propargyl-succinimidyl-ester), DBCO-말레이미드(Dibenzocyclooctyne-maleimide), DBCO-PEG-말레이미드(Dibenzocyclooctyne-PEG4-maleimide), DBCO-S-S-NHS 에스테르(Dibenzocyclooctyne-S-S-N-hydroxysuccinimidyl ester), DBCO-NHS 에스테르(dibenzocyclooctyne-N-hydroxysuccinimidyl ester), 아세틸렌-PEG-NHS 에스테르(acetylene-PEG-NHS ester), 및 알킬렌-PEG-말레이미드(alkyne-PEG-maleimide)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 고분자 캐리어 물질-접합 CRISPR 효소 단백질의 제조방법
9 9
제 5 항에 있어서, 상기 (a) 단계의 고분자 캐리어 물질의 활성화 반응은 DMSO(dimethylsulfoxide), DMF(dimethylformamide), 에탄올, 메탄올, 물, 메틸렌클로라이드, 및 클로로포름으로 이루어진 군으로부터 선택된 용매 중에서 이루어지는 것을 특징으로 하는 제조방법
10 10
제 5 항에 있어서, 상기 (a) 단계의 고분자 캐리어 물질의 활성화 반응은 4~60℃에서, 0
11 11
제 5 항에 있어서, 상기 (b) 단계의 고분자 캐리어 물질 및 CRISPR 효소 단백질의 몰비는 10-1:1 내지 105:1인 것을 특징으로 하는 제조방법
12 12
제 5 항에 있어서, 상기 (b) 단계의 CRISPR 효소 단백질의 기능기와 활성화된 고분자 캐리어 물질의 접합 반응은 4~60°C에서, 1~48시간 동안 이루어지는 것을 특징으로 하는 제조방법
13 13
제 5 항에 있어서, 상기 (b) 단계의 CRISPR 효소 단백질의 기능기와 활성화된 고분자 캐리어 물질의 접합 반응은 pH 4~10의 수용성 용매 중에서 이루어지는 것을 특징으로 하는 제조방법
14 14
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항의 고분자 캐리어 물질-접합 CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats) 효소 단백질 및 sgRNA(single guide RNA)를 포함하는 CRISPR 나노복합체
15 15
제 14 항에 있어서, 상기 CRISPR 나노복합체는 수용액 분산상태에서 입도크기가 1 내지 10,000 nm인 것을 특징으로 하는 CRISPR 나노복합체
16 16
제 14 항에 있어서, 상기 CRISPR 나노복합체는 제타 전위가 -100 ~ +100 mV인 것을 특징으로 하는 CRISPR 나노복합체
17 17
고분자 캐리어 물질-접합 CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats) 효소 단백질 및 sgRNA(single guide RNA)를 혼합하는 단계를 포함하는 CRISPR 나노복합체의 제조방법
18 18
제 17 항에 있어서, 상기 고분자 캐리어-접합 CRISPR 효소 단백질과 sgRNA의 몰비는 1:10-6 내지 1:106 인 것을 특징으로 하는 CRISPR 나노복합체의 제조방법
19 19
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항의 고분자 캐리어 물질-접합 CRISPR 효소 단백질, 또는 제 14 항의 CRISPR 나노복합체를 포함하는 유전자 편집용 조성물
20 20
제 19 항에 있어서, 상기 조성물은 고분자 캐리어 물질-접합 CRISPR 효소 단백질, 또는 CRISPR 나노복합체를 세포내에 전달하여 유전자 편집을 유도하는 것을 특징으로 하는 유전자 편집용 조성물
21 21
제 20 항에 있어서, 상기 세포는 진핵세포 또는 원핵세포인 것을 특징으로 하는 유전자 편집용 조성물
22 22
제 21 항에 있어서, 상기 세포는 S
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1 US20200140844 US 미국 FAMILY
2 WO2018230785 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

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1 AU2017390080 AU 오스트레일리아 DOCDBFAMILY
2 CA3009389 CA 캐나다 DOCDBFAMILY
3 US2020140844 US 미국 DOCDBFAMILY
4 WO2018230785 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
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1 보건복지부 한국과학기술원 감염병위기대응기술개발사업 나노프로브에 의한 다제내성균의 신속한 검출 및 진단
2 보건복지부 한국과학기술원 세계선도의생명과학자육성사업 순환종양세포 감지에 의한 암의 분자 진단법 개발
3 미래창조과학부 한국과학기술원 신진연구자지원사업 다제내성 병원균 감염의 초민감성 진단법 개발