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알지닌 전달 서브유닛(arginine transporter subunit: ArtJ)을 코딩하는 유전자, 고삼투압 유도 세포질 단백질(hyperosmotically inducible periplasmic protein: OsmY)을 코딩하는 유전자 및 펩티딜 프롤릴 아이소머레이즈(peptidyl-prolyl cis-trans isomerase: FkpA)를 코딩하는 유전자로 구성된 군에서 선택된 어느 하나의 분비 촉진 모티프 유전자와 목적 단백질을 코딩하는 유전자를 포함하고, 상기 ArtJ, OsmY 및 FkpA로 구성된 군에서 선택되는 분비 촉진 모티프와 목적 단백질이 세포 내에서 융합된 형태로 발현되어, 세포 밖(배양액)으로 분비되는 특성을 가지는 유전자 구조물
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제1항에 있어서, 상기 ArtJ, OsmY 및 FkpA로 구성된 군에서 선택되는 분비용 단백질과 목적 단백질을 융합된 형태로 발현시키기 위한 프로모터를 포함하는 것을 특징으로 하는 유전자 구조물
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제2항에 있어서, 상기 프로모터는 Trc 프로모터인 것을 특징으로 하는 유전자 구조물
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제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 유전자 구조물을 포함하는, 목적 단백질을 세포 밖(배양액)으로 분비·생산할 수 있는 특성을 가지는 재조합벡터
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제4항에 있어서, ColE1 오리진을 가지는 것을 특징으로 하는 재조합벡터
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제4항에 있어서, pTrcArtJC, pTrcOsmYC 및 pTrcFkpAC로 구성된 군에서 선택되는 플라스미드에 목적 단백질을 코딩하는 유전자가 삽입되어 있는 특징으로 하는 재조합벡터
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7
제6항에 있어서, pTrcArtJ-PhoA, pTrcOsmY-PhoA, pTrcFkpA-PhoA, pTrcOsmY-EGF, pTrcOsmY-ED, pTrcOsmY-obe, pTrcOsmY-gcsf, pTrcArtJ-obe 및 pTrcFkpA-obe로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 재조합벡터
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8
제4항의 재조합벡터로 형질전환되고, 목적 단백질을 세포 밖(배양액)으로 분비·생산할 수 있는 특성을 가지는 재조합 미생물
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제8항에 있어서, 대장균인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
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제1항 내지 제3항 중 어느 한 항의 유전자 구조물이 크로모좀에 삽입되어 있는, 목적 단백질을 세포 밖(배양액)으로 분비·생산할 수 있는 특성을 가지는 재조합 미생물
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제10항에 있어서, 대장균인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물
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다음의 단계를 포함하는 목적 단백질의 세포 외 분비·생산 방법:(a) 제8항의 재조합 미생물을 배양하여 목적 단백질을 세포 밖(배양액)으로 분비시키는 단계; 및(b) 상기 배양액으로부터 목적 단백질을 회수하는 단계
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제12항에 있어서, 상기 (a) 단계에서 목적 단백질의 세포 밖 분비시 미생물의 용해(lysis)를 실질적으로 수반하지 않는 것을 특징으로 하는 방법
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제12항에 있어서, (b) 단계는 단백질 분해효소로 처리하여, ArtJ, OsmY 및 FkpA로 구성된 군에서 선택되는 분비용 단백질을 제거시켜 목적 단백질을 회수하는 것을 특징으로 하는 방법
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제14항에 있어서, 상기 단백질 분해효소는 엔테로키나아제인 것을 특징으로 하는 방법
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다음의 단계를 포함하는 목적 단백질의 세포 외 분비·생산 방법:(a) 제10항의 재조합 미생물을 배양하여 목적 단백질을 세포 밖(배양액)으로 분비시키는 단계; 및(b) 상기 배양액으로부터 목적 단백질을 회수하는 단계
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제16항에 있어서, 상기 (a) 단계에서 목적 단백질의 세포 밖 분비시 미생물의 용해(lysis)를 실질적으로 수반하지 않는 것을 특징으로 하는 방법
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제16항에 있어서, (b) 단계는 단백질 분해효소로 처리하여, ArtJ, OsmY 및 FkpA로 구성된 군에서 선택되는 분비용 단백질을 제거시켜 목적 단백질을 회수하는 것을 특징으로 하는 방법
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제18항에 있어서, 상기 단백질 분해효소는 엔테로키나아제인 것을 특징으로 하는 방법
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