요약 | 본 발명은 신규 구조의 원핵세포 내에서 유전자 발현을 감소시키는 맞춤형 합성 sRNA, 그 제법 및 그 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 MicC, SgrS 및 MicF 중 어느 하나의 sRNA 유래의 Hfq 결합 부위(Hfq binding site) 및 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역을 포함하는 합성 sRNA, 그 제법 및 그 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따른 합성 sRNA는 표적 유전자의 mRNA와의 결합력을 조절함으로써 억제 정도를 조절할 수 있는 장점이 있으며, 유전자 발현을 조절하는 합성 sRNA를 통해 기존의 유전자 결실을 통한 과정 없이 효과적으로 제작, 목적 유전자 발현을 감소시킬 수 있어 재조합 미생물 제조에 유용하며, 다양한 균주에서 빠르게 적용할 수 있어 균주별 대사 능력 측정 및 최적 균주 선정에 매우 적합하다. 아울러, 합성 sRNA를 통한 미생물 대사 흐름 조작에 의해 수득된 본 발명에 따른 tyrosine 혹은 cadaverine을 고효율로 생산하는 재조합 미생물은 의약품 및 산업용제 미생물로 유용하다. 즉, 본 발명에 따른 sRNA를 이용하여 대사산물의 고효율 생산을 위한 발현 억제 타겟 유전자 선별을 용이하게 할 수 있다. 이에 다양한 대사 산물의 효율적 생산을 위한 재조합 균주의 제작 및 효율적 생산방법 확립에 사용할 수 있는바 매우 유용하다. |
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Int. CL | C12N 1/21 (2006.01) C12N 15/63 (2006.01) C12N 15/113 (2010.01) |
CPC | |
출원번호/일자 | 1020130003438 (2013.01.11) |
출원인 | 한국과학기술원 |
등록번호/일자 | 10-1575587-0000 (2015.12.02) |
공개번호/일자 | 10-2013-0082474 (2013.07.19) 문서열기 |
공고번호/일자 | (20151209) 문서열기 |
국제출원번호/일자 | |
국제공개번호/일자 | |
우선권정보 |
대한민국 | 1020120003609 | 2012.01.11
|
법적상태 | 등록 |
심사진행상태 | 수리 |
심판사항 | |
구분 | 신규 |
원출원번호/일자 | |
관련 출원번호 | |
심사청구여부/일자 | Y (2013.01.11) |
심사청구항수 | 36 |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
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1 | 한국과학기술원 | 대한민국 | 대전광역시 유성구 |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 이상엽 | 대한민국 | 대전광역시 유성구 |
2 | 나도균 | 대한민국 | 경상남도 창원시 마산합포구 |
3 | 유승민 | 대한민국 | 대전광역시 유성구 |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 이처영 | 대한민국 | 서울특별시 강남구 언주로 ***, **층 (역삼동, 윤익빌딩)(*T국제특허법률사무소) |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 한국과학기술원 | 대한민국 | 대전광역시 유성구 |
번호 | 서류명 | 접수/발송일자 | 처리상태 | 접수/발송번호 |
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1 | [특허출원]특허출원서 [Patent Application] Patent Application |
2013.01.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2013-0030558-43 |
2 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2013.02.01 | 수리 (Accepted) | 4-1-2013-5019983-17 |
3 | 의견제출통지서 Notification of reason for refusal |
2014.05.30 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2014-0375956-39 |
4 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 [Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation) |
2014.07.30 | 수리 (Accepted) | 1-1-2014-0724579-70 |
5 | [명세서등 보정]보정서 [Amendment to Description, etc.] Amendment |
2014.07.30 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2014-0724580-16 |
6 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2014.12.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5157968-69 |
7 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2014.12.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5157993-01 |
8 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2014.12.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5158129-58 |
9 | 의견제출통지서 Notification of reason for refusal |
2014.12.26 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2014-0888827-46 |
10 | [명세서등 보정]보정서 [Amendment to Description, etc.] Amendment |
2015.02.26 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2015-0193509-18 |
11 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 [Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation) |
2015.02.26 | 수리 (Accepted) | 1-1-2015-0193508-73 |
12 | 의견제출통지서 Notification of reason for refusal |
2015.07.28 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2015-0504688-25 |
13 | [명세서등 보정]보정서 [Amendment to Description, etc.] Amendment |
2015.09.24 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2015-0934973-16 |
14 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 [Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation) |
2015.09.24 | 수리 (Accepted) | 1-1-2015-0934972-60 |
15 | 등록결정서 Decision to grant |
2015.11.17 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2015-0795531-13 |
16 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2019.04.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2019-5081392-49 |
17 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2020.05.15 | 수리 (Accepted) | 4-1-2020-5108396-12 |
18 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2020.06.12 | 수리 (Accepted) | 4-1-2020-5131486-63 |
번호 | 청구항 |
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1 |
1 원핵생물에서 유전자 발현을 억제하는 sRNA에 있어서, 다음을 포함하는 것을 특징으로 하는 합성 sRNA:(i) MicC, SgrS 및 MicF 중 어느 하나의 sRNA 유래의 Hfq 결합 부위(Hfq binding site) 및 (ii) 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역여기서, 상기 (i)의 Hfq 결합 부위가 MicC 유래인 경우, 상기 (ii)의 표적유전자는 OmpC가 아니고, 상기 (i)의 Hfq 결합 부위가 SgrS 유래인 경우, 상기 (ii)의 표적유전자는 PtsG가 아니며, 상기 (i)의 Hfq 결합 부위가 MicF 유래인 경우, 상기 (ii)의 표적유전자는 OmpF가 아님,여기서, 상기 Hfq 결합 부위는 서열번호 140의 1~30번째 염기서열을 가지는 MicC 유래의 Hfq 결합 부위, 서열번호 139의 염기서열에서 154~190번째 염기서열을 가지는 SgrS유래의 Hfq 결합 부위, 서열번호 141의 1~33번째 염기서열을 가지는 MicF 유래의 Hfq 결합 부위 중 어느 하나임 |
2 |
2 제1항에 있어서, 상기 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역은 표적 유전자 mRNA의 리보좀 결합 부위 (Ribosome binding site)와 전체적으로 또는 부분적으로 상보적 결합을 형성하는 것을 특징으로 하는 sRNA |
3 |
3 제1항에 있어서, 상기 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역 중 하나 이상의 뉴클레오티드를 결실시키거나 치환하여 표적 유전자의 mRNA와 결합하지 않는 부위를 형성시킨 것을 특징으로 하는 sRNA |
4 |
4 제1항에 있어서, 상기 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역에 하나 이상의 뉴클레오티드를 삽입하여 표적 유전자의 mRNA와 결합하지 않는 부위를 형성시킨 것을 특징으로 하는 sRNA |
5 |
5 제1항에 있어서, 상기 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역은, 상기 표적 유전자 mRNA와의 결합에너지가 -10kcal/mol 내지 -40kcal/mol이 되도록 구성하는 것을 특징으로 하는 sRNA |
6 |
6 제5항에 있어서, 상기 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역은, 상기 표적 유전자 mRNA와의 결합에너지가 -20kcal/mol 내지 -40kcal/mol이 되도록 구성하는 것을 특징으로 하는 sRNA |
7 |
7 제1항에 있어서, MicC 유래의 Hfq 결합 부위를 포함하고 있는 것을 특징으로 하는 sRNA |
8 |
8 제1항에 있어서, 상기 원핵생물은 대장균, 리조비움(Rhizobium), 비피도박테리움 (Bifidobacterium), 로도코커스 (Rhodococcus), 칸디다 (Candida), 에르위니아(Erwinia), 엔테로박터 (Enterobacter), 파스테렐라(Pasteurella), 멘하이미아 (Mannheimia), 액티노바실러스 (Actinobacillus), 아그레가티박터 (Aggregatibacter), 잔토모나스(Xanthomonas), 비브리오(Vibrio), 슈도모나스(Pseudomonas), 아조토박터(Azotobacter), 애시네토박터(Acinetobacter), 랄스토니아(Ralstonia), 아그로박테리움(Agrobacterium), 리조비움(Rhizobium), 로도박터(Rhodobacter), 자이모모나스(Zymomonas), 바실러스(Bacillus), 스테필로코커스(Staphylococcus), 락토코커스(Lactococcus), 스트렙토코커스(Streptococcus), 락토바실러스(Lactobacillus), 클로스트리디움(Clostridium), 코리네박테리움(Corynebacterium), 스트렙토마이세스(Streptomyces), 비피도박테리움(Bifidobacterium) 및 사이클로박테리움(Cyclobacterium)로 구성되는 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 sRNA |
9 |
9 제1항에 있어서, 상기 표적 mRNA는 DsRed2, LuxR, AraC, KanR (kanamycin resistance gene), tyrR(tyrosine regulator), ppc (phosphoenolpyruvate carboxylase), csrA (carbon storage regulator), pgi (glucose-6-phosphate isomerase), glt (citrate synthase), accA (acetyl-CoA carboxyltransferase, alpha-subunit), accB (biotinylated biotin-carboxyl carrier protein), accC (acetyl-CoA carboxylase), accD (acetyl-CoA carboxyltransferase, beta-subunit), aceE (subunit of E1p component of pyruvate dehydrogenase complex), aceF (pyruvate dehydrogenase), ackA (propionate kinase / acetate kinase activity), adiY (AdiY is a positive DNA-binding transcriptional regulator that controls the arginine) decarboxylase (adi) system), argB (acetylglutamate kinase), argC (N-acetylglutamylphosphate reductase), argG (argininosuccinate synthase), argH (argininosuccinate lyase), asnC (transcriptional regulator that activates the expression of asnA, a gene involved in the synthesis of asparagine), aspA (aspartate ammonia-lyase), crp (CRP transcriptional dual regulator), csiD (predicted protein |
10 |
10 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 sRNA를 코딩(encoding)하는 분리된 핵산 |
11 |
11 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 sRNA를 코딩(encoding)하는 분리된 핵산을 포함하는 발현벡터 |
12 |
12 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 sRNA가 도입된 재조합 미생물 |
13 |
13 제11항의 발현벡터로 형질전환된 재조합 미생물 |
14 |
14 MicC, SgrS 및 MicF 중 어느 하나의 sRNA 유래의 Hfq 결합 부위(Hfq binding site)를 코딩하는 핵산에 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역을 코딩하는 핵산을 연결하는 단계를 포함하는 sRNA의 제조방법:여기서, 상기 Hfq 결합 부위가 MicC 유래인 경우, 상기 표적유전자는 OmpC가 아니고, 상기 Hfq 결합 부위가 SgrS 유래인 경우, 상기 표적유전자는 PtsG가 아니며, 상기 Hfq 결합 부위가 MicF 유래인 경우, 상기 표적유전자는 OmpF가 아님,여기서, 상기 Hfq 결합 부위는 서열번호 140의 1~30번째 염기서열을 가지는 MicC 유래의 Hfq 결합 부위, 서열번호 139의 염기서열에서 154~190번째 염기서열을 가지는 SgrS유래의 Hfq 결합 부위, 서열번호 141의 1~33번째 염기서열을 가지는 MicF 유래의 Hfq 결합 부위 중 어느 하나임 |
15 |
15 제14항에 있어서, MicC, SgrS 및 MicF 중 어느 하나의 sRNA의 mRNA 결합 서열을 제거하고 상기 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역을 코딩하는 핵산을 도입하는 것을 특징으로 하는 방법 |
16 |
16 제14항에 있어서, 상기 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역은 표적 유전자 mRNA의 리보좀 결합 부위 (Ribosome binding site)와 전체적으로 또는 부분적으로 상보적 결합을 형성하는 것을 특징으로 하는 방법 |
17 |
17 제14항에 있어서, 상기 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역을 코딩하는 핵산 상의 하나 이상의 뉴클레오티드를 결실시키거나 치환하여 표적 유전자의 mRNA와 결합하지 않는 부위를 형성시키는 것을 특징으로 하는 방법 |
18 |
18 제14항에 있어서, 상기 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역을 코딩하는 핵산에 하나 이상의 뉴클레오티드를 삽입하여 표적 유전자의 mRNA와 결합하지 않는 부위를 형성시킨 것을 특징으로 하는 방법 |
19 |
19 제14항에 있어서, 상기 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역은, 상기 표적 유전자 mRNA와의 결합에너지가 -10kcal/mol 내지 -40kcal/mol이 되도록 구성하는 것을 특징으로 하는 방법 |
20 |
20 제19항에 있어서, 상기 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역은, 상기 표적 유전자 mRNA와의 결합에너지가 -20kcal/mol 내지 -40kcal/mol이 되도록 구성하는 것을 특징으로 하는 방법 |
21 |
21 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 sRNA를 원핵생물 내로 도입하거나 원핵생물 내에서 발현시키는 단계; 및 표적 유전자의 mRNA 발현을 억제하는 단계를 포함하는 표적 유전자의 발현 억제 방법 |
22 |
22 제21항에 있어서, 상기 sRNA의 발현은 유도물질(inducer) 결합에 따라 작동하는 프로모터에 의하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 방법 |
23 |
23 제21항에 있어서, 상기 sRNA의 발현은 온도 민감성 전사 조절 단백질(temperature-senstive transcription factor)에 의하여 억제되는 것을 특징으로 하는 것을 특징으로 하는 방법 |
24 |
24 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 sRNA를 포함하는 원핵생물에서 표적 유전자 발현 억제용 조성물 |
25 |
25 다음 단계를 포함하는 유용물질 생산을 위한 결실대상 유전자의 스크리닝 방법:(a) 유용물질을 생산하고자 하는 대상 균주에 존재하고, 유용물질 생합성 경로에 참여하는 유전자들 중 어느 하나 이상의 유전자를 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 sRNA의 표적 유전자로 하여 발현을 억제시키는 단계; 및(b) 상기 발현 억제에 따라 유용물질 생산수율이 향상되는 경우, 발현을 억제시킨 유전자를 유용물질 생산을 위한 결실대상 유전자로 선정하는 단계 |
26 |
26 다음 단계를 포함하는 유용물질 생산균주의 개량방법:(a) 유용물질을 생산하고자 하는 대상 균주에 존재하고, 유용물질 생합성 경로에 참여하는 유전자들 중 어느 하나 이상의 유전자를 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 sRNA의 표적 유전자로 하여 발현을 억제시키는 단계; (b) 상기 발현 억제에 따라 유용물질 생산수율이 향상되는 경우, 발현을 억제시킨 유전자를 유용물질 생산을 위한 결실대상 유전자로 스크리닝하는 단계; 및(c) 상기 스크리닝된 유전자 또는 스크리닝된 유전자의 조합을 결실시킨 재조합 균주를 제조하는 단계 |
27 |
27 타이로신(Tyrosine) 생합성 경로를 가지는 숙주세포에 MicC, SgrS 및 MicF 중 어느 하나의 sRNA 유래의 Hfq 결합 부위(Hfq binding site) 및 tyrR 또는 csrA 유전자의 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 합성 sRNA가 도입되거나 발현됨으로써 tyrR 및 csrA 유전자의 발현을 억제하여 tyrR 및 csrA 유전자의 기능이 상실된 것을 특징으로 하는 타이로신 생산능력이 향상된 재조합 미생물;여기서, 상기 Hfq 결합 부위는 서열번호 140의 1~30번째 염기서열을 가지는 MicC 유래의 Hfq 결합 부위, 서열번호 139의 염기서열에서 154~190번째 염기서열을 가지는 SgrS유래의 Hfq 결합 부위, 서열번호 141의 1~33번째 염기서열을 가지는 MicF 유래의 Hfq 결합 부위 중 어느 하나임 |
28 |
28 삭제 |
29 |
29 제27항에 있어서, ppsA (phenolpthiocerol synthesis type-I polyketide synthase A), tktA (transketolase), aroG/aroF (3-deoxy-7-phosphoheptulonate synthase), aroK (shikimate kinase I) 및 tyrC (prephenate dehydrogenase)로 구성되는 군에서 선택된 하나 이상의 유전자가 도입 또는 증폭되어 있는 것을 특징으로 하는 재조합 미생물 |
30 |
30 삭제 |
31 |
31 제27항에 있어서, 상기 숙주세포는 대장균, 리조비움(Rhizobium), 비피도박테리움 (Bifidobacterium), 로도코커스 (Rhodococcus), 칸디다 (Candida), 에르위니아(Erwinia), 엔테로박터 (Enterobacter), 파스테렐라(Pasteurella), 멘하이미아 (Mannheimia), 액티노바실러스 (Actinobacillus), 아그레가티박터 (Aggregatibacter), 잔토모나스(Xanthomonas), 비브리오(Vibrio), 슈도모나스(Pseudomonas), 아조토박터(Azotobacter), 애시네토박터(Acinetobacter), 랄스토니아(Ralstonia), 아그로박테리움(Agrobacterium), 리조비움(Rhizobium), 로도박터(Rhodobacter), 자이모모나스(Zymomonas), 바실러스(Bacillus), 스테필로코커스(Staphylococcus), 락토코커스(Lactococcus), 스트렙토코커스(Streptococcus), 락토바실러스(Lactobacillus), 클로스트리디움(Clostridium), 코리네박테리움(Corynebacterium), 스트렙토마이세스(Streptomyces), 비피도박테리움(Bifidobacterium) 및 사이클로박테리움(Cyclobacterium)로 구성되는 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 재조합 미생물 |
32 |
32 제31항에 있어서, E |
33 |
33 제27항의 재조합 미생물에 tpl 유전자를 도입하거나 증폭시킨 것을 특징으로 하는 페놀 생산능을 가지는 재조합 미생물 |
34 |
34 제33항에 있어서, E |
35 |
35 타이로신(Tyrosine) 생합성 경로를 가지는 숙주세포에 MicC, SgrS 및 MicF 중 어느 하나의 sRNA 유래의 Hfq 결합 부위(Hfq binding site) 및 tyrR 또는 csrA 유전자의 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 합성 sRNA를 도입시키거나 발현시킴으로써 tyrR 및 csrA 유전자의 발현을 억제하여 tyrR 및 csrA 유전자의 기능이 상실시키는 것을 포함하는 타이로신 생산능력이 향상된 재조합 미생물의 제조방법;여기서, 상기 Hfq 결합 부위는 서열번호 140의 1~30번째 염기서열을 가지는 MicC 유래의 Hfq 결합 부위, 서열번호 139의 염기서열에서 154~190번째 염기서열을 가지는 SgrS유래의 Hfq 결합 부위, 서열번호 141의 1~33번째 염기서열을 가지는 MicF 유래의 Hfq 결합 부위 중 어느 하나임 |
36 |
36 삭제 |
37 |
37 카다베린(Cadaverine) 생합성 경로를 가지는 숙주세포에 MicC, SgrS 및 MicF 중 어느 하나의 sRNA 유래의 Hfq 결합 부위(Hfq binding site) 및 murE, metB, thrL 및 ackA로 구성되는 군에서 선택된 어느 하나 이상의 유전자의 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 합성 sRNA가 도입되거나 발현됨으로써 murE, metB, thrL 및 ackA로 구성되는 군에서 선택된 어느 하나 이상의 유전자의 발현을 억제하여 murE, metB, thrL 및 ackA로 구성되는 군에서 선택된 어느 하나 이상의 유전자의 기능이 상실된 것을 특징으로 하는 카다베린 생산능력이 향상된 재조합 미생물;여기서, 상기 Hfq 결합 부위는 서열번호 140의 1~30번째 염기서열을 가지는 MicC 유래의 Hfq 결합 부위, 서열번호 139의 염기서열에서 154~190번째 염기서열을 가지는 SgrS유래의 Hfq 결합 부위, 서열번호 141의 1~33번째 염기서열을 가지는 MicF 유래의 Hfq 결합 부위 중 어느 하나임 |
38 |
38 삭제 |
39 |
39 삭제 |
40 |
40 제37항에 있어서, 상기 숙주세포는 대장균, 리조비움(Rhizobium), 비피도박테리움 (Bifidobacterium), 로도코커스 (Rhodococcus), 칸디다 (Candida), 에르위니아(Erwinia), 엔테로박터 (Enterobacter), 파스테렐라(Pasteurella), 멘하이미아 (Mannheimia), 액티노바실러스 (Actinobacillus), 아그레가티박터 (Aggregatibacter), 잔토모나스(Xanthomonas), 비브리오(Vibrio), 슈도모나스(Pseudomonas), 아조토박터(Azotobacter), 애시네토박터(Acinetobacter), 랄스토니아(Ralstonia), 아그로박테리움(Agrobacterium), 리조비움(Rhizobium), 로도박터(Rhodobacter), 자이모모나스(Zymomonas), 바실러스(Bacillus), 스테필로코커스(Staphylococcus), 락토코커스(Lactococcus), 스트렙토코커스(Streptococcus), 락토바실러스(Lactobacillus), 클로스트리디움(Clostridium), 코리네박테리움(Corynebacterium), 스트렙토마이세스(Streptomyces), 비피도박테리움(Bifidobacterium) 및 사이클로박테리움(Cyclobacterium)로 구성되는 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 재조합 미생물 |
41 |
41 카다베린(Cadaverine) 생합성 경로를 가지는 숙주세포에 MicC, SgrS 및 MicF 중 어느 하나의 sRNA 유래의 Hfq 결합 부위(Hfq binding site) 및 murE, metB, thrL 및 ackA로 구성되는 군에서 선택된 어느 하나 이상의 유전자의 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 합성 sRNA를 도입시키거나 발현시킴으로써 murE, metB, thrL 및 ackA로 구성되는 군에서 선택된 어느 하나 이상의 유전자의 발현을 억제하여 murE, metB, thrL 및 ackA로 구성되는 군에서 선택된 어느 하나 이상의 유전자의 기능이 상실시키는 단계를 포함하는 카다베린 생산능력이 향상된 재조합 미생물의 제조방법;여기서, 상기 Hfq 결합 부위는 서열번호 140의 1~30번째 염기서열을 가지는 MicC 유래의 Hfq 결합 부위, 서열번호 139의 염기서열에서 154~190번째 염기서열을 가지는 SgrS유래의 Hfq 결합 부위, 서열번호 141의 1~33번째 염기서열을 가지는 MicF 유래의 Hfq 결합 부위 중 어느 하나임 |
42 |
42 삭제 |
43 |
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지정국 정보가 없습니다 |
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순번 | 패밀리번호 | 국가코드 | 국가명 | 종류 |
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1 | CN104254606 | CN | 중국 | FAMILY |
2 | EP02803727 | EP | 유럽특허청(EPO) | FAMILY |
3 | EP02803727 | EP | 유럽특허청(EPO) | FAMILY |
4 | US09388417 | US | 미국 | FAMILY |
5 | US20140377752 | US | 미국 | FAMILY |
6 | WO2013105807 | WO | 세계지적재산권기구(WIPO) | FAMILY |
7 | WO2013105807 | WO | 세계지적재산권기구(WIPO) | FAMILY |
순번 | 패밀리번호 | 국가코드 | 국가명 | 종류 |
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1 | CN104254606 | CN | 중국 | DOCDBFAMILY |
2 | CN104254606 | CN | 중국 | DOCDBFAMILY |
3 | DK2803727 | DK | 덴마크 | DOCDBFAMILY |
4 | EP2803727 | EP | 유럽특허청(EPO) | DOCDBFAMILY |
5 | EP2803727 | EP | 유럽특허청(EPO) | DOCDBFAMILY |
6 | EP2803727 | EP | 유럽특허청(EPO) | DOCDBFAMILY |
7 | ES2709105 | ES | 스페인 | DOCDBFAMILY |
8 | US2014377752 | US | 미국 | DOCDBFAMILY |
9 | US9388417 | US | 미국 | DOCDBFAMILY |
10 | WO2013105807 | WO | 세계지적재산권기구(WIPO) | DOCDBFAMILY |
11 | WO2013105807 | WO | 세계지적재산권기구(WIPO) | DOCDBFAMILY |
순번 | 연구부처 | 주관기관 | 연구사업 | 연구과제 |
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1 | 교육과학기술부 | 한국과학기술원 | 글로벌프론티어사업(지능형 바이오 시스템 설계 및 합성 연구) | 합성생물학 기반 페놀 및 바이오 폴리머 생산 지능형 균주 개발 |
특허 등록번호 | 10-1575587-0000 |
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표시번호 | 사항 |
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1 |
출원 연월일 : 20130111 출원 번호 : 1020130003438 공고 연월일 : 20151209 공고 번호 : 특허결정(심결)연월일 : 20151117 청구범위의 항수 : 36 유별 : C12N 15/113 발명의 명칭 : 신규한 합성 조절 sRNA 및 그 제법 존속기간(예정)만료일 : |
순위번호 | 사항 |
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1 |
(권리자) 한국과학기술원 대전광역시 유성구... |
제 1 - 3 년분 | 금 액 | 724,500 원 | 2015년 12월 03일 | 납입 |
제 4 년분 | 금 액 | 416,000 원 | 2018년 12월 03일 | 납입 |
제 5 년분 | 금 액 | 416,000 원 | 2019년 11월 26일 | 납입 |
번호 | 서류명 | 접수/발송일자 | 처리상태 | 접수/발송번호 |
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1 | [특허출원]특허출원서 | 2013.01.11 | 수리 (Accepted) | 1-1-2013-0030558-43 |
2 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2013.02.01 | 수리 (Accepted) | 4-1-2013-5019983-17 |
3 | 의견제출통지서 | 2014.05.30 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2014-0375956-39 |
4 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 | 2014.07.30 | 수리 (Accepted) | 1-1-2014-0724579-70 |
5 | [명세서등 보정]보정서 | 2014.07.30 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2014-0724580-16 |
6 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2014.12.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5157968-69 |
7 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2014.12.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5157993-01 |
8 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2014.12.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5158129-58 |
9 | 의견제출통지서 | 2014.12.26 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2014-0888827-46 |
10 | [명세서등 보정]보정서 | 2015.02.26 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2015-0193509-18 |
11 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 | 2015.02.26 | 수리 (Accepted) | 1-1-2015-0193508-73 |
12 | 의견제출통지서 | 2015.07.28 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2015-0504688-25 |
13 | [명세서등 보정]보정서 | 2015.09.24 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2015-0934973-16 |
14 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 | 2015.09.24 | 수리 (Accepted) | 1-1-2015-0934972-60 |
15 | 등록결정서 | 2015.11.17 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2015-0795531-13 |
16 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2019.04.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2019-5081392-49 |
17 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2020.05.15 | 수리 (Accepted) | 4-1-2020-5108396-12 |
18 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2020.06.12 | 수리 (Accepted) | 4-1-2020-5131486-63 |
기술번호 | KST2014066804 |
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자료제공기관 | 미래기술마당 |
기술공급기관 | 한국과학기술원 |
기술명 | 미생물 세포공장 개발을 위한 합성 조절 RNA 원천기술 |
기술개요 |
본 발명은 신규 구조의 원핵세포 내에서 유전자 발현을 감소시키는 맞춤형 합성 sRNA, 그 제법 및 그 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 MicC, SgrS 및 MicF 중 어느 하나의 sRNA 유래의 Hfq 결합 부위(Hfq binding site) 및 표적 유전자 mRNA와 상보적 결합을 형성하는 영역을 포함하는 합성 sRNA, 그 제법 및 그 용도에 관한 것이다. 본 발명에 따른 합성 sRNA는 표적 유전자의 mRNA와의 결합력을 조절함으로써 억제 정도를 조절할 수 있는 장점이 있으며, 유전자 발현을 조절하는 합성 sRNA를 통해 기존의 유전자 결실을 통한 과정 없이 효과적으로 제작, 목적 유전자 발현을 감소시킬 수 있어 재조합 미생물 제조에 유용하며, 다양한 균주에서 빠르게 적용할 수 있어 균주별 대사 능력 측정 및 최적 균주 선정에 매우 적합하다. 아울러, 합성 sRNA를 통한 미생물 대사 흐름 조작에 의해 수득된 본 발명에 따른 tyrosine 혹은 cadaverine을 고효율로 생산하는 재조합 미생물은 의약품 및 산업용제 미생물로 유용하다. 즉, 본 발명에 따른 sRNA를 이용하여 대사산물의 고효율 생산을 위한 발현 억제 타겟 유전자 선별을 용이하게 할 수 있다. 이에 다양한 대사 산물의 효율적 생산을 위한 재조합 균주의 제작 및 효율적 생산방법 확립에 사용할 수 있는바 매우 유용하다. |
개발상태 | 기능 및 개념 검증 |
기술의 우수성 |
1) 합성 조절 RNA 는 대장균의 조절 RNA를 기본골격으로 하여 세포내 존재하는 유전자의 발현을 단백질 수준에서 제어할 수 있는 새로운 형태의 유전자 조절 방법으로, 이 조절 RNA 구조중에서 세포내 발현을 조절하고자 하는 목적 유전자와 조절 RNA 가 결합되는 부위의 유전정보만을 바꾸기만 하면 합성 조절 RNA를 제작할 수 있다.
2) 이러한 제작과정은 새로운 장비 및 특별한 기술 없이 기존의 유전자 재조합 기술만으로 가능하므로, 대장균내 모든 유전자의 발현을 조절하는 조절 RNA 라이브러리를 원하는 대로 짧은 시간 안에 만들 수 있다는 점에서 획기적이다. 3) 이를 통해 특정 유전자에 영향을 주고 이 유전자가 속해 있는 세포 내 네트워크 흐름을 복잡하게 변화시켜 우리가 원하는 방향으로 세포내 네트워크를 재설계함으로써 맞춤형 미생물 세포공장을 개발할 수 있다. 이렇게 설계된 합성 조절 RNA 들은 미생물 게놈을 건드리지 않은 채 유전자 전달체에 삽입하여 제작되므로 이를 미생물에 동시다발적으로 주입할 수 있어 대용량 실험이 가능하다. |
응용분야 | ○ 합성 유전자 회로 설계, 미생물 유전자 게놈 에디팅, 의약품 개발 및 생산 |
시장규모 및 동향 |
1) 석유화학 자원의 사용으로 인한 이산화탄소 등의 온실가스 축적은 인류생존의 위협요인으로 받아들여지고 있다. 금세기에 들어서면서 지구 온난화에 따른 기후변화와 전례가 없던 이상기후는 인류의 당면과제로 받아들여지고 있다. 2) 또한 세계 인구의 증가 및 석유화학 소비의 증가는 석유화학 자원의 고갈 우려를 낳고 있으며 그에 상응하여 2000년대 들어서 고유가가 유지되고 있다. 우리나라는 원유를 전량 수입하기 때문에 다른 나라에 비해 고유가로 인한 경제적인 압박을 심하게 받고 있다. 3) 따라서 대체에너지원의 개발은 지속가능한 성장을 위하여 필연적이며 석유화학제품도 또한 대체재를 개발할 필요성이 있다. 이 모든 문제를 해결하기 위한 돌파구로 바이오화학산업이 각광받고 있다. |
희망거래유형 | |
사업화적용실적 | |
도입시고려사항 |
과제고유번호 | 1711002764 |
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세부과제번호 | 2011-0031963 |
연구과제명 | 합성생물학 기반 페놀 및 방향족 바이오폴리머 생산 지능형 균주 개발 |
성과구분 | 출원 |
부처명 | 미래창조과학부 |
연구관리전문기관명 | |
연구주관기관명 | |
성과제출연도 | 2013 |
연구기간 | 201109~202008 |
기여율 | 1 |
연구개발단계명 | 응용연구 |
6T분류명 | BT(생명공학기술) |
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심판사항 정보가 없습니다 |
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