요약 | 본 발명은 높은 단맛을 가지는 신규한 브라제인 4차 변이체 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 야생형 브라제인의 감미 단백질 보다 높은 단맛을 나타내는 브라제인 4차 변이체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 당도 증진용 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 브라제인 4차 변이체는 종래의 브라제인과 비교하였을 때 동등한 열 안정성을 가지면서 종래의 브라제인에 비해 최소 15 ~ 50배 이상의 단맛을 가지고 있다. 따라서, 본 발명의 브라제인 4차 변이체는 적은 양으로도 더 많은 양의 설탕(수크로오스)과 같은 다른 감미료와 혼용 사용이 가능하며 더 나아가 이를 대체할 수 있으며, 식품 제조시 첨가물로서 다양하게 이용될 수 있다. |
---|---|
Int. CL | C07K 14/415 (2006.01) A23G 3/44 (2006.01) C12N 15/29 (2006.01) C12N 15/70 (2006.01) |
CPC | C07K 14/43(2013.01) C07K 14/43(2013.01) C07K 14/43(2013.01) C07K 14/43(2013.01) C07K 14/43(2013.01) C07K 14/43(2013.01) |
출원번호/일자 | 1020100016660 (2010.02.24) |
출원인 | 중앙대학교 산학협력단 |
등록번호/일자 | 10-1083040-0000 (2011.11.07) |
공개번호/일자 | 10-2011-0097042 (2011.08.31) 문서열기 |
공고번호/일자 | (20111116) 문서열기 |
국제출원번호/일자 | |
국제공개번호/일자 | |
우선권정보 | |
법적상태 | 등록 |
심사진행상태 | 수리 |
심판사항 | |
구분 | 신규 |
원출원번호/일자 | |
관련 출원번호 | |
심사청구여부/일자 | Y (2010.02.24) |
심사청구항수 | 10 |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 중앙대학교 산학협력단 | 대한민국 | 서울특별시 동작구 |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 공광훈 | 대한민국 | 인천광역시 계양구 |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 특허법인다나 | 대한민국 | 서울특별시 강남구 역삼로 *길 **, 신관 *층~*층, **층(역삼동, 광성빌딩) |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 주식회사 바이오스위트 | 서울특별시 성북구 |
번호 | 서류명 | 접수/발송일자 | 처리상태 | 접수/발송번호 |
---|---|---|---|---|
1 | [특허출원]특허출원서 [Patent Application] Patent Application |
2010.02.24 | 수리 (Accepted) | 1-1-2010-0121039-67 |
2 | 선행기술조사의뢰서 Request for Prior Art Search |
2011.01.19 | 수리 (Accepted) | 9-1-9999-9999999-89 |
3 | 선행기술조사보고서 Report of Prior Art Search |
2011.02.14 | 수리 (Accepted) | 9-1-2011-0007759-68 |
4 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2011.07.20 | 수리 (Accepted) | 4-1-2011-5148879-89 |
5 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2011.07.20 | 수리 (Accepted) | 4-1-2011-5148883-62 |
6 | 등록결정서 Decision to grant |
2011.10.14 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2011-0591473-96 |
7 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2014.01.03 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-0000494-54 |
8 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2014.10.20 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5123944-33 |
9 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2018.07.04 | 수리 (Accepted) | 4-1-2018-5125629-51 |
10 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2019.07.29 | 수리 (Accepted) | 4-1-2019-5151122-15 |
11 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2019.08.01 | 수리 (Accepted) | 4-1-2019-5153932-16 |
번호 | 청구항 |
---|---|
1 |
1 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21 및 서열번호 22로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 가지는 브라제인 4차 변이체 |
2 |
2 대장균 pelB 신호서열 및 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21 및 서열번호 22로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 암호화하는 브라제인 4차 변이체 발현용 폴리뉴클레오티드 |
3 |
3 제 2 항에 있어서, 상기 대장균 pelB 신호서열은 서열번호 28의 염기서열을 가지는 폴리뉴클레오티드 |
4 |
4 제 2 항에 있어서, 상기 폴리뉴클레오티드는 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15 및 서열번호 16으로 이루어진 군에서 선택된 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 폴리뉴클레오티드 |
5 |
5 프로모터 및 이와 작동가능하게 연결된 제2항의 폴리뉴클레오티드를 포함하는 것을 특징으로 하는 브라제인 4차 변이체 발현용 재조합 발현벡터 |
6 |
6 제 5 항에 있어서, 상기 프로모터는 대장균 pelB 프로모터인 재조합 발현벡터 |
7 |
7 제5항에 있어서, 상기 재조합 발현벡터는 pET26B(+)-브라제인(H30R_E35D_E40A_E52K), pET26B(+)-브라제인(H30R_E35D_ E40A_E52R), pET26B(+)-브라제인(H30R_E35D_E40A_E52A), pET26B(+)-브라제인(H30R_E35D_E40A_E52H) 및 pET26B(+)-브라제인(H30R_E35D_E40A_E52D)로 이루어진 군에서 선택된 재조합 발현벡터 |
8 |
8 제5항의 재조합 발현벡터로 형질전환된 대장균 |
9 |
9 제8항의 대장균을 배양하는 단계;상기 배양된 대장균의 세포막간극의 단백질을 분리하는 단계; 및상기 분리된 세포막간극 단백질을 열 처리하는 단계를 포함하는 브라제인 4차 변이체의 제조방법 |
10 |
10 제1항의 브라제인 4차 변이제를 유효성분으로 포함하는 당도 증진용 식품 조성물 |
지정국 정보가 없습니다 |
---|
순번 | 패밀리번호 | 국가코드 | 국가명 | 종류 |
---|---|---|---|---|
1 | KR101239669 | KR | 대한민국 | FAMILY |
2 | KR1020110097043 | KR | 대한민국 | FAMILY |
3 | WO2011105841 | WO | 세계지적재산권기구(WIPO) | FAMILY |
4 | WO2011105841 | WO | 세계지적재산권기구(WIPO) | FAMILY |
5 | WO2011105841 | WO | 세계지적재산권기구(WIPO) | FAMILY |
순번 | 패밀리번호 | 국가코드 | 국가명 | 종류 |
---|---|---|---|---|
DOCDB 패밀리 정보가 없습니다 |
순번 | 연구부처 | 주관기관 | 연구사업 | 연구과제 |
---|---|---|---|---|
1 | 교육과학기술부 | 중앙대학교 산학협력단 | 2009년 일반연구자지원사업 | 저칼로리 고효율 감미단백질 브라제인의 개발 및 단맛 수용체와의 상호작용 기구 연구 |
특허 등록번호 | 10-1083040-0000 |
---|
표시번호 | 사항 |
---|---|
1 |
출원 연월일 : 20100224 출원 번호 : 1020100016660 공고 연월일 : 20111116 공고 번호 : 특허결정(심결)연월일 : 20111014 청구범위의 항수 : 10 유별 : C07K 14/415 발명의 명칭 : 높은 단맛을 가지는 신규한 브라제인 다중 변이체 및 이의 제조방법 존속기간(예정)만료일 : |
순위번호 | 사항 |
---|---|
1 |
(권리자) 중앙대학교 산학협력단 서울 동작구... |
2 |
(권리자) 주식회사 바이오스위트 서울특별시 성북구... |
2 |
(의무자) 중앙대학교 산학협력단 서울 동작구... |
3 |
(권리자) 신용보증기금(소관 부산스타트업지점) 대구 동구... |
3 |
(의무자) 주식회사바이오스위트 서울 성북구... |
제 1 - 3 년분 | 금 액 | 217,500 원 | 2011년 11월 08일 | 납입 |
제 4 년분 | 금 액 | 182,000 원 | 2014년 09월 30일 | 납입 |
제 5 년분 | 금 액 | 182,000 원 | 2015년 10월 28일 | 납입 |
제 6 년분 | 금 액 | 275,600 원 | 2016년 12월 27일 | 납입 |
제 7 년분 | 금 액 | 537,600 원 | 2018년 02월 13일 | 납입 |
제 8 년분 | 금 액 | 240,000 원 | 2018년 11월 05일 | 납입 |
제 9 년분 | 금 액 | 254,400 원 | 2020년 01월 07일 | 납입 |
제 10 년분 | 금 액 | 395,000 원 | 2020년 11월 04일 | 납입 |
번호 | 서류명 | 접수/발송일자 | 처리상태 | 접수/발송번호 |
---|---|---|---|---|
1 | [특허출원]특허출원서 | 2010.02.24 | 수리 (Accepted) | 1-1-2010-0121039-67 |
2 | 선행기술조사의뢰서 | 2011.01.19 | 수리 (Accepted) | 9-1-9999-9999999-89 |
3 | 선행기술조사보고서 | 2011.02.14 | 수리 (Accepted) | 9-1-2011-0007759-68 |
4 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2011.07.20 | 수리 (Accepted) | 4-1-2011-5148879-89 |
5 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2011.07.20 | 수리 (Accepted) | 4-1-2011-5148883-62 |
6 | 등록결정서 | 2011.10.14 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2011-0591473-96 |
7 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2014.01.03 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-0000494-54 |
8 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2014.10.20 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5123944-33 |
9 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2018.07.04 | 수리 (Accepted) | 4-1-2018-5125629-51 |
10 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2019.07.29 | 수리 (Accepted) | 4-1-2019-5151122-15 |
11 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2019.08.01 | 수리 (Accepted) | 4-1-2019-5153932-16 |
기술번호 | KST2014063013 |
---|---|
자료제공기관 | 미래기술마당 |
기술공급기관 | 중앙대학교 |
기술명 | 신개념 단백질 기반 저칼로리 감미료 |
기술개요 |
본 발명은 높은 단맛을 가지는 신규한 브라제인 4차 변이체 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 야생형 브라제인의 감미 단백질 보다 높은 단맛을 나타내는 브라제인 4차 변이체, 이의 제조방법 및 이를 포함하는 당도 증진용 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 브라제인 4차 변이체는 종래의 브라제인과 비교하였을 때 동등한 열 안정성을 가지면서 종래의 브라제인에 비해 최소 15 ~ 50배 이상의 단맛을 가지고 있다. 따라서, 본 발명의 브라제인 4차 변이체는 적은 양으로도 더 많은 양의 설탕(수크로오스)과 같은 다른 감미료와 혼용 사용이 가능하며 더 나아가 이를 대체할 수 있으며, 식품 제조시 첨가물로서 다양하게 이용될 수 있다. |
개발상태 | 유사환경 테스트 |
기술의 우수성 |
1) 브라제인의 단맛 활성을 증가시키고자 부위특이적 변이법을 이용하여 아미노산 잔기를 변이시켜 총 17개의 1차 변이체를 작성하였다. 그 결과 단맛이 증가한 변이체의 아미노산 잔기를 선정하여 여러 가지의 다중 변이체(한 예, K5R/H31R/E36D/H41A)를 작성하여 설탕 대비 최고 285 만 배의 단맛을 나타내는 브라제인 변이체를 작성하여 보유 중에 있다. 2) 브라제인의 수율을 증가시키며 식품으로서 상용화할 수 있도록 인증 균주인 효모 GRAS(generally recognized as safe) 인증 균주인 Kluyveromyces lactis를 이용하여 재조합 브라제인의 대량발현을 유도하였다. 이전의 대장균 발현계의 경우에 발현량이 약 3-4mg/L 인 반면 K. lactis를 이용한 효모 발현계에서는 약 80mg/L 의 높은 발현량을 나타냈다. 또한 효모에서는 체외 배출되는 단백질이 매우 적어 정제가 용이하다는 점에 착안하여 재조합 브라제인을 체외 배출하도록 발현계를 설계하였으며 이 결과 브라제인의 정제과정이 CM-sepharose column만으로도 정제가 가능하도록 대폭 간소화하여 정제 수율을 높였다. 3) 위 두 연구를 진행한 결과 본 연구진은 높은 단맛 활성을 나타내는 브라제인과 높은 수율의 발현계를 확립하여 생산할 수 있다는 점에서 기존의 감미단백질 개발 연구에 비해 많은 우월성을 갖는다. 또한 본 사업의 대상 기술인 감미단백질 브라제인은 50 mg/L의 용해도를 가지며 열 안정성과 pH 안정성이 높아 다양한 식품 첨가물로 이용되기에 충분한 가능성을 가지고 있다. |
응용분야 | 1) 식품 첨가제(감미료) |
시장규모 및 동향 |
가. 국내외 시장규모 자료를 바탕으로 목표시장의 수요전망 자료를 - 감미료 시장 - 대체 인공감미료 시장 - 대체감미료 해외 시장규모로 정리하면 아래와 같다. 1) 설탕감미료 세계시장은 2013년 80,600,000백만원 규모에서 2017년 97,200,000백만원 규모로 성장할 것으로 예상된다. 2) 설탕감미료 국내시장은 2013년 582,370백만원 규모에서 2017년 608,429백만원 규모로 성장할 것으로 예상된다. 3) 인공감미료 세계시장은 2013년 95,768,900백만원 규모에서 2017년 100,098,900백만원 규모로 성장할 것으로 예상된다. 4) 인공감미료 국내시장은 2013년 23,100,000백만원 규모에서 2017년 24,200,000백만원 규모로 성장할 것으로 예상된다. 5) 세계 고감미료 시장규모는 2013년 7,310백만달러에서 2017년 12,000백만달러 규모로 성장할 것으로 예상된다. |
희망거래유형 | |
사업화적용실적 | |
도입시고려사항 |
과제고유번호 | 1345147098 |
---|---|
세부과제번호 | 2009-0072756 |
연구과제명 | 저칼로리 고효율 감미 단백질 브라제인의 개발 및 단맛 수용체와의 상호작용 기구 연구 |
성과구분 | 등록 |
부처명 | 교육과학기술부 |
연구관리전문기관명 | 한국연구재단 |
연구주관기관명 | 중앙대학교 산학협력단 |
성과제출연도 | 2011 |
연구기간 | 200905~201204 |
기여율 | 1 |
연구개발단계명 | 기초연구 |
6T분류명 | BT(생명공학기술) |
과제고유번호 | 1345136087 |
---|---|
세부과제번호 | 핵06A3008 |
연구과제명 | 미래형 반응매체를 이용한 청정화학 및 응용 |
성과구분 | 출원 |
부처명 | 교육과학기술부 |
연구관리전문기관명 | 한국연구재단 |
연구주관기관명 | 중앙대학교 |
성과제출연도 | 2010 |
연구기간 | 200603~201302 |
기여율 | 1 |
연구개발단계명 | 기초연구 |
6T분류명 | ET(환경기술) |
[1020100120831] | 아황산 이온 선택성을 갖는 레소루핀 레불리네이트를 포함하는 센서 및 이를 이용한 아황산 이온 검출방법 | 새창보기 |
---|---|---|
[1020100112093] | 메타-클로로퍼벤조산 선택성을 갖는 티오쿠마린계 화합물을 포함하는 센서 및 이를 이용한 메타-클로로퍼벤조산 검출방법 | 새창보기 |
[1020100104627] | 베타 아가라아제의 대량생산방법 | 새창보기 |
[1020100073112] | 특정 친핵체를 검출하는 방법 및 특정 친핵체 검출용 표면탄성파 센서 | 새창보기 |
[1020100062631] | 과붕산염 선택성을 갖는 플루오레세인계 화합물을 포함하는 센서 및 이를 이용한 과붕산염 검출방법 | 새창보기 |
[1020100016661] | 브라제인 발현용 재조합 발현벡터 및 이를 이용한 브라제인의 대량 생산방법 | 새창보기 |
[1020100016660] | 신개념 단백질 기반 저칼로리 감미료 | 새창보기 |
[1020080095930] | 형광 ATP 수용분자와 소광제를 이용한 off-on ATP 센서 | 새창보기 |
[1020080056769] | ZnO 박막 제조용 전구체 및 이를 이용한화학기상증착법에 의한 ZnO 박막의 제조 방법 | 새창보기 |
[1020080019008] | 높은 단맛을 가지는 신규한 브라제인 변이체 및 다중변이체의 제조방법 | 새창보기 |
[1020070117013] | 높은 단맛을 가지는 신규한 브라제인 변이체 및 이의 용도 | 새창보기 |
[KST2014038563][중앙대학교] | 벼 유래의 새로운 글루타티온-에스-트랜스퍼레이즈를 위한 유전자 클로닝 및 상기 재조합 단백질을 대량 생산하는 방법 | 새창보기 |
---|---|---|
[KST2018004712][중앙대학교] | 고추 전사인자 CaDILZ1을 이용한 식물체의 건조 스트레스 저항성 증진방법(Method for improving the resistance to the drought stress using pepper transcription factor CaDILZ1 in plants) | 새창보기 |
[KST2018011570][중앙대학교] | 고추 녹광 품종 유래 전사인자 CaDRHB1을 이용한 식물체의 건조 스트레스 저항성 증진방법 | 새창보기 |
[KST2015182388][중앙대학교] | 식물체의 건조 저항성 관련 단백질 DIN1 및 이의 용도 | 새창보기 |
[KST2015182585][중앙대학교] | 막 통과 부위가 제거된 인간 단맛 수용체 T1R2의 발현 및 정제 방법 | 새창보기 |
[KST2015182878][중앙대학교] | RCAR3를 이용한 건조 스트레스 또는 박테리아 감염 내성 증진방법 | 새창보기 |
[KST2018000910][중앙대학교] | 베타-아가라제의 대량 생산방법(Mass production method of beta agarase) | 새창보기 |
[KST2017014714][중앙대학교] | 고추 녹광 품종 유래 E3 ligase CaDTR1을 이용한 식물체의 건조 스트레스 저항성 증진방법(Method for improving the resistance to the drought stress using pepper E3 ligase, CaDTR1, in plants) | 새창보기 |
[KST2014038667][중앙대학교] | 애기장대 익스팬진 5 단백질 및 익스팬진 5 단백질의형질전환 식물체의 이용 | 새창보기 |
[KST2015151305][중앙대학교] | 이중특이항체를 생산하는 식물의 제조 방법 | 새창보기 |
[KST2015182463][중앙대학교] | 막 통과 부위가 제거된 인간 단맛 수용체 T1R3의 발현 및 정제 방법 | 새창보기 |
[KST2016007087][중앙대학교] | CaLEA1을 이용한 식물체의 건조 또는 염 스트레스 저항성 증진방법(Method for improving the resistance to the drought or salt stress using CaLEA1 in plants) | 새창보기 |
[KST2014026868][중앙대학교] | 브라제인 발현용 재조합 발현벡터 및 이를 이용한 브라제인의 대량 생산방법 | 새창보기 |
[KST2014038566][중앙대학교] | 높은 단맛을 가지는 신규한 브라제인 변이체 및 이의 용도 | 새창보기 |
[KST2014038666][중앙대학교] | 시토크롬 피450 85 에이 2 및 이의 이용 | 새창보기 |
[KST2015182535][중앙대학교] | RCAR2를 이용한 건조 스트레스 저항성 증진방법 | 새창보기 |
[KST2016001178][중앙대학교] | 단맛이 증가된 신규 브라제인 다중 변이체 및 이의 제조방법 | 새창보기 |
[KST2016001179][중앙대학교] | 이황화결합이 도입되어 안정성이 향상된 신규의 브라제인 변이체 | 새창보기 |
[KST2016007778][중앙대학교] | CaLOX1을 이용한 식물체의 건조 또는 염 스트레스 저항성 증진방법(Method for improving the resistance to the drought or salt stress using CaLOX1 in plants) | 새창보기 |
[KST2018004710][중앙대학교] | 고추 E3 ligase CaDSR1을 이용한 식물체의 건조 스트레스 저항성 증진방법(Method for improving the resistance to the drought stress using pepper E3 ligase CaDSR1 in plants) | 새창보기 |
[KST2017014713][중앙대학교] | CaOSR1을 이용한 식물체의 비생물적 스트레스 저항성 증진방법(Method for improving the resistance to the abiotic stresses using CaOSR1 in plants) | 새창보기 |
[KST2015182796][중앙대학교] | 식물체의 건조 저항성 관련 단백질 MLO2 및 이의 용도 | 새창보기 |
[KST2016007777][중앙대학교] | 앱시스산 수용체 CaRCAR1을 이용한 식물체의 건조 스트레스 저항성 증진방법(Method for improving the resistance to the drought stress using ABA receptor, CaRCAR1, in plants) | 새창보기 |
[KST2014038564][중앙대학교] | 대장균 pelB 신호서열 및 브라제인 유전자를 포함하는폴리뉴클레오티드 및 이를 이용한 브라제인의 제조방법 | 새창보기 |
[KST2016007187][중앙대학교] | rDNA NTS 기반 유전자 다중 삽입 카세트 세트 및 이를 이용한 GRAS 등급의 재조합 효모 균주(Multiple gene integrative cassette sets based on rDNA NTS and GRAS grade recombinant yeasts) | 새창보기 |
[KST2017008300][중앙대학교] | 고추 유래의 건조 저항성 관련 단백질 MAF1 및 이의 용도(CaMAF1 protein imlicated in drought tolerance and the use thereof) | 새창보기 |
[KST2018013987][중앙대학교] | 식물 유래의 재조합 단백질을 반복 생산하는 방법 | 새창보기 |
[KST2017014712][중앙대학교] | 고추 녹광 품종 유래 E3 ligase CaAIRF1을 이용한 식물체의 건조 스트레스 저항성 증진방법(Method for improving the resistance to the drought stress using CaAIRF1 in plants) | 새창보기 |
[KST2014038642][중앙대학교] | 화경조직을 이용한 배추의 형질전환체 제조방법 및이로부터 생산되는 무름병 저항성이 증진된 형질전환체 | 새창보기 |
[KST2017008299][중앙대학교] | CaDRT1을 이용한 식물체의 건조 스트레스 저항성 증진방법(Method for improving the resistance to the drought stress using CaDRT1 in plants) | 새창보기 |
심판사항 정보가 없습니다 |
---|