| 1 |
1
탈세포화할 척수조직의 경막(dura mater)을 제거하는 박리 단계;상기 척수조직을 소정의 크기로 자르는 세절 단계;세포 제거 용액을 이용하여 상기 척수조직에 포함된 세포를 파괴하는 세포 제거 단계;상기 척수조직을 2배 이상 응축된 인산완충식염수(2X phosphate buffered saline, 2XPBS)로 처리하는 2XPBS 처리 단계;상기 척수조직의 지질 성분을 제거하는 지질 처리 단계;DNA 제거 용액을 이용하여 상기 척수조직에서 DNA를 제거하는 DNA 제거 단계;소독 용액을 이용하여 상기 척수조직을 살균 소독하는 소독 단계; 및상기 척수조직에서 수분을 제거하는 동결 건조 단계를 포함하는, 탈세포화 방법
|
| 2 |
2
제1항에 있어서,상기 2배 이상 응축된 인산완충식염수(2XPBS)는 274mM 이상의 NaCl, 5
|
| 3 |
3
제1항에 있어서,상기 지질 처리 단계는 아이소프로판올(isopropanol, IPA)을 이용하여 상기 지질 성분을 제거하고, 2시간 30분 이상 수행되는, 탈세포화 방법
|
| 4 |
4
제1항에 있어서,상기 DNA 제거 용액은 50U/ml 이상의 DNA 분해효소(DNase)와 15mM 이상의 염화마그네슘(MgCl2)을 포함하는, 탈세포화 방법
|
| 5 |
5
제4항에 있어서,상기 DNA 제거 단계는 30℃ 이상 40℃ 이하의 온도에서 3일 이상 수행되는, 탈세포화 방법
|
| 6 |
6
제1항에 있어서,상기 세절 단계 이후에, 인산완충식염수(PBS)를 포함하는 제1 세척 용액을 이용하여 상기 척수조직에 포함된 불순물을 제거하는 1차 세척 단계;상기 2XPBS 처리 단계 이후에, 증류수를 포함하는 제2 세척 용액을 이용하여 상기 척수조직을 세척하는 2차 세척 단계;상기 지질 처리 단계 이후에, 인산완충식염수(PBS)를 포함하는 제3 세척 용액을 이용하여 1시간 이상 상기 척수조직을 세척하는 3차 세척 단계;상기 DNA 처리 단계 이후에, 상기 2배 이상 응축된 인산완충식염수(2XPBS)를 포함하는 제4 세척 용액을 이용하여 상기 척수조직을 세척하는 제4 세척 단계; 및상기 소독 단계 이후에, 상기 척수조직을 증류수를 이용하여 세척한 뒤 인산완충식염수(PBS)를 이용하여 1회당 15분 이상씩 총 2회 이상 세척한 뒤 증류수를 이용하여 16시간 이상 세척하는 5차 세척 단계를 더 포함하는, 탈세포화 방법
|
| 7 |
7
제1항에 있어서,상기 척수조직은 돼지의 척수조직인, 탈세포화 방법
|
| 8 |
8
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항의 방법에 의하여 제조된 탈세포화 물질의 세포외 기질을 액화하여 제조되는, 바이오잉크
|
| 9 |
9
제8항에 있어서,상기 세포외 기질의 액화는 상기 탈세포화 물질 대비 10% 이상의 무게를 갖는 펩신(pepsin) 및 0
|
| 10 |
10
제8항 또는 제9항의 바이오잉크를 이용한 인공 중추신경조직 제조 방법으로서,신경세포를 상기 바이오잉크에 봉입하는 단계;상기 바이오잉크를 이용하여 설계된 모양에 따라 상기 인공 중추신경조직을 3차원 프린팅 하는 단계;상기 인공 중추신경조직을 열가교(thermal crosslinking)시키는 단계; 및배양액을 이용하여 상기 인공 중추신경조직을 배양하는 단계를 포함하는, 인공 중추신경조직 제조 방법
|
| 11 |
11
제10항에 있어서,상기 신경세포는 3*107 이상의 농도로 인간유도만능줄기세포에서 분화된 것이고,상기 바이오잉크는 중성상태이며, 1% 이상의 농도인, 인공 중추신경조직 제조 방법
|
| 12 |
12
제10항에 있어서,상기 열가교시키는 단계는 인큐베이터를 이용하여 30℃ 이상 40℃ 이하의 온도에서 1시간 이상 수행되는, 인공 중추신경조직 제조 방법
|
| 13 |
13
신경조직 모듈과 근육조직 모듈을 배치하는 단계;상기 배치된 신경조직 모듈과 근육조직 모듈을 바이오잉크로 처리하는 단계;상기 바이오잉크 처리된 신경-근육 접합을 열가교시키는 단계; 및상기 신경-근육 접합을 배양하는 단계를 포함하는, 신경-근육 접합 조직 제조 방법
|
| 14 |
14
제13항에 있어서,상기 바이오잉크는탈세포화할 척수조직의 경막(dura mater)을 제거하는 박리 단계;상기 척수조직을 소정의 크기로 자르는 세절 단계;세포 제거 용액을 이용하여 상기 척수조직에 포함된 세포를 파괴하는 세포 제거 단계;상기 척수조직을 2배 이상 응축된 인산완충식염수(2X phosphate buffered saline, 2XPBS)로 처리하는 2XPBS 처리 단계;상기 척수조직의 지질 성분을 제거하는 지질 처리 단계;DNA 제거 용액을 이용하여 상기 척수조직에서 DNA를 제거하는 DNA 제거 단계;소독 용액을 이용하여 상기 척수조직을 살균 소독하는 소독 단계; 및상기 척수조직에서 수분을 제거하는 동결 건조 단계를 포함하는 방법에 의하여 제조된 것인, 신경-근육 접합 조직 제조 방법
|
| 15 |
15
제13항에 있어서,상기 신경-근육 접합을 배양하는 단계는 뉴로베이잘 배지(Neurobasal medium)에 N2 서플리먼트(N2 supplement), B27 서플리먼트(B27 supplement), 1x 비필수 아미노산(non-essential amino acids), 1x 글루타맥스(glutamax), 1% 페니실린/스트렙토마이신(Penicillin/Streptomycin), 10 ng mL-1 교세포 신경성장인자(Glial cell-Derived Neurotrophic Factor, GDNF), 10 ng mL-1 섬모신경친화성인자(Ciliary neurotrophic factor, CNTF), 10 ng ML-1 뇌유래신경영양인자 (Brain-derived neurotrophic factor, BDNF, 0
|
