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유전자 결실을 위한 선형 ＤＮＡ 단편, 이를 이용하여생물막 형성이 억제된 대장균 변이주 및 이의 제조 방법

  • 기술번호 : KST2015117233
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 항생제 민감도와 생산물 분비 효율 및 형질전환 효율이 증가된 대장균 변이주에 관한 것으로, 상기 변이주는 생물막(biofilm)의 형성이 억제되어, 생물막에 의한 항생제와 분비물 및 외래 유전자에 대한 확산의 저해가 최소화된 것을 특징으로 한다. 본 발명에 의하여, 대장균의 유전자 조작 실험 도중의 변이주 선별 과정에 있어서, 보다 적은 양의 항생제로 원하는 변이주를 선별할 수 있고, 선별하고자 하는 변이주가 아닌 균주가 생물막을 형성하여 항생제에 내성을 보여서 선별의 효율을 떨어뜨리는 것을 방지할 수 있다. 또한, 분비물의 확산 효율이 증가됨으로써 배지 내로 분비되는 생산물의 수득률을 증가시킬 수 있다. 그리고 형질전환 효율이 증가됨으로써 유용 물질의 대량생산을 보다 용이하게 할 수 있다.
Int. CL C12N 15/11 (2010.01) C12N 15/63 (2010.01) C12N 1/21 (2010.01)
CPC
출원번호/일자 1020040070017 (2004.09.02)
출원인 한국과학기술원
등록번호/일자 10-0585450-0000 (2006.05.24)
공개번호/일자 10-2006-0021161 (2006.03.07) 문서열기
공고번호/일자 (20060607) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2004.09.02)
심사청구항수 10

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 김선창 대한민국 대전광역시 유성구
2 이충훈 대한민국 서울특별시 송파구
3 임보람 대한민국 경상북도 상주시
4 성봉현 대한민국 경상남도 마산시 회원구
5 유병조 대한민국 대전광역시 유성구
6 이원식 대한민국 충청북도 충주시
7 이준형 대한민국 대구광역시 서구
8 이상희 대한민국 경상북도 경산시

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 박장원 대한민국 서울특별시 강남구 강남대로 ***, *층~*층 (논현동, 비너스빌딩)(박장원특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 특허출원서
Patent Application		 2004.09.02 수리 (Accepted) 1-1-2004-0398721-19
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2005.12.12 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2006.01.13 수리 (Accepted) 9-1-2006-0003223-53
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2006.02.21 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2006-0096917-71
5 명세서등보정서
Amendment to Description, etc.		 2006.04.19 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2006-0273207-89
6 서지사항보정서
Amendment to Bibliographic items		 2006.04.19 수리 (Accepted) 1-1-2006-0273208-24
7 의견서
Written Opinion		 2006.04.19 수리 (Accepted) 1-1-2006-0273206-33
8 등록결정서
Decision to grant		 2006.05.16 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2006-0279388-10
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2013.02.01 수리 (Accepted) 4-1-2013-5019983-17
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157993-01
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157968-69
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5158129-58
13 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2019-5081392-49
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.05.15 수리 (Accepted) 4-1-2020-5108396-12
15 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.06.12 수리 (Accepted) 4-1-2020-5131486-63
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번호 청구항
1 1
삭제
2 2
삭제
3 3
양 말단에 람다-레드 재조합을 위한 약 500 bp의 상동부위 A 및 C를 포함하고, 그 내부에 선별 마커, I-SceI 제한효소 절단부위(SEQ ID NO: 32) 및 sacB 유전자(SEQ ID NO: 31)를 포함하고, 상기 상동부위 A 및 C 내부에 이들 중 하나와 연결하여 위치하는 동성 재조합을 위한 상동부위 B를 포함하는 미생물 유전자 결실을 위한 선형 DNA 단편으로서, 상기 상동부위 A 및 C는 각각 제거될 미생물 유전자 부위의 양 말단과 연결된 500 bp의 미생물 유전자 부위와 상동이고, 상기 상동부위 B는 상기 제거될 미생물 유전자 부위의 양 말단 중 어느 하나와 연결된 500 bp의 미생물 유전자 부위와 상동인 것인 선형 DNA 단편을 사용하는 람다-레드 재조합 및 동성 재조합에 의하여, 대장균 유전자 중 대장균 생물막 형성에 관여하는 csg 유전자군, fim 유전자군 및 wca 유전자군으로 이루어진 군 중에서 한 가지 이상이 제거되어 생물막 형성이 억제된 것을 특징으로 하는 대장균 변이주
4 4
제 3 항에 있어서, SEQ ID NO:10, 20 및 30의 염기 서열을 갖는 선형 DNA 단편으로 이루어진 군 중에서 선택된 한 가지 이상을 사용하는 람다-레드 재조합 및 동성 재조합에 의하여, csg 유전자군, fim 유전자군 및 wca 유전자군 중 한 가지 이상이 제거되어 생물막 형성이 억제된 것을 특징으로 하는 대장균 변이주
5 5
제 4 항에 있어서, SEQ ID NO:10, 20 및 30의 염기 서열을 갖는 선형 DNA 단편으로 이루어진 군 중에서 선택된 두 가지 이상을 사용하는 연속적인 람다-레드 재조합 및 동성 재조합에 의하여, csg 유전자군, fim 유전자군 및 wca 유전자군 중에서 두 가지 이상이 제거되어 생물막 형성이 억제된 것을 특징으로 하는 대장균 변이주
6 6
제 5 항에 있어서, SEQ ID NO:10, 20 및 30의 염기 서열을 갖는 선형 DNA 단편을 모두 사용하는 연속적인 람다-레드 재조합 및 동성 재조합에 의하여, csg 유전자군, fim 유전자군 및 wca 유전자군이 모두 제거되어 생물막 형성이 억제된 것을 특징으로 하는 대장균 변이주
7 7
제 6 항에 있어서, DEB31(수탁번호 KCTC 10374BP)인 대장균 변이주
8 8
양 말단에 람다-레드 재조합을 위한 약 500 bp의 상동부위 A 및 C를 포함하고, 그 내부에 선별 마커, I-SceI 제한효소 절단부위(SEQ ID NO: 32) 및 sacB 유전자(SEQ ID NO: 31)를 포함하고, 상기 상동부위 A 및 C 내부에 이들 중 하나와 연결하여 위치하는 동성 재조합을 위한 상동부위 B를 포함하는 미생물 유전자 결실을 위한 선형 DNA 단편으로서, 상기 상동부위 A 및 C는 각각 제거될 미생물 유전자 부위의 양 말단과 연결된 500 bp의 미생물 유전자 부위와 상동이고, 상기 상동부위 B는 상기 제거될 미생물 유전자 부위의 양 말단 중 어느 하나와 연결된 500 bp의 미생물 유전자 부위와 상동인 것인 선형 DNA 단편을 제조하고 (제 1 단계), 상기 선형 DNA 단편을 미생물에 도입시키고, 상기 상동부위 A 및 C와 이들의 미생물 유전자 상동부위 간의 람다-레드 재조합 및 이어지는 상기 상동부위 B와 이의 미생물 유전자 상동부위 간의 동성 재조합에 의하여 미생물의 제거하고자 하는 염새체 부위를 상기 선형 DNA 단편으로 대체시켜, 미생물을 상기 선형 DNA 단편으로 형질전환시킨 후, 선별 마커에 해당하는 항생제 함유 배지에서 배양하여 형질전환된 미생물을 선별하고 (제 2 단계), 상기 선별된 형질전환된 미생물에 I-SceI 제한효소 발현벡터를 도입하여, 상기 선별 마커와 sacB 유전자를 제거한 후, 자당이 포함된 배지에서 배양하여, 선별마커가 제거된 형질전환체를 선별하는 단계(제 3 단계)를 포함하는, 미생물 유전자 중 생물막 형성에 관여하는 csg 유전자군, fim 유전자군 및 wca 유전자군으로 이루어진 군 중에서 한 가지 이상을 제거하는 것을 특징으로 하는 미생물 변이주의 제조 방법
9 9
제 8 항에 있어서, 상기 제 2 단계 및 상기 제 3 단계를 반복 수행하여 연속적으로 다수의 유전자 부위를 제거시키는 것을 특징으로 하는 미생물 변이주의 제조 방법
10 10
삭제
11 11
제 8 항 또는 제 9 항에 있어서, 상기 상동부위 A, B, 및 C로서, SEQ ID NO: 7, 8 및 9를 사용하여 csg 유전자군을 제거하거나; SEQ ID NO: 17, 18 및 19를 사용하여 fim 유전자군을 제거하거나; 또는 SEQ ID NO: 27, 28 및 29를 사용하여 wca 유전자군을 제거하는 것을 특징으로 하는 것을 미생물 변이주의 제조 방법
12 12
제 11 항에 있어서, csg 유전자군, fim 유전자군 및 wca 유전자군으로 이루어진 군 중에서 두 가지 이상을 제거하는 것을 특징으로 하는 미생물 변이주의 제조 방법
13 13
제 12 항에 있어서, csg 유전자군, fim 유전자군 및 wca 유전자군을 모두 제거하는 것을 특징으로 하는 미생물 변이주의 제조 방법
14 13
제 12 항에 있어서, csg 유전자군, fim 유전자군 및 wca 유전자군을 모두 제거하는 것을 특징으로 하는 미생물 변이주의 제조 방법
지정국 정보가 없습니다
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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 EP01784489 EP 유럽특허청(EPO) FAMILY
2 JP20511315 JP 일본 FAMILY
3 US20070287180 US 미국 FAMILY
4 WO2006025702 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

DOCDB 패밀리 정보

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순번 패밀리번호 국가코드 국가명 종류
1 EP1784489 EP 유럽특허청(EPO) DOCDBFAMILY
2 EP1784489 EP 유럽특허청(EPO) DOCDBFAMILY
3 JP2008511315 JP 일본 DOCDBFAMILY
4 JP2008511315 JP 일본 DOCDBFAMILY
5 US2007287180 US 미국 DOCDBFAMILY
6 WO2006025702 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
국가 R&D 정보가 없습니다.