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복합 유전자를 표적하는 ｓｉＲＮＡ 다중 접합체 및 이의 제조방법

  • 기술번호 : KST2015113952
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 복합 유전자를 표적하는 작은 간섭 RNA(small interfering RNA) 다중 접합체 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 두 종류 이상의 이중가닥 센스/안티센스(sense/antisense) siRNA 단량체를 직접 또는 가교제나 고분자를 매개로 한 공유결합을 통해 연결시켜 두 종류 이상의 siRNA 단량체를 포함하는, 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체 제조방법에 따라, 두 종류 이상의 siRNA를 화학적 방법으로 결합시켜 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체를 효과적이고 간단하게 생산할 수 있으며, 상기의 방법으로 제조된 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체는 기존의 siRNA에 비해 음이온 전하밀도가 증가되어 양이온성 유전자 전달체와 효과적으로 결합하여 유전자 전달효율을 향상시키고, 다양한 서열의 siRNA를 세포에 전달하여 각 서열의 특이적/복합적 기능을 동시에 수행할 수 있다.
Int. CL A61K 31/7105 (2006.01) C07H 21/02 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) A61K 47/48 (2006.01)
CPC C12N 15/1135(2013.01) C12N 15/1135(2013.01) C12N 15/1135(2013.01) C12N 15/1135(2013.01) C12N 15/1135(2013.01) C12N 15/1135(2013.01) C12N 15/1135(2013.01)
출원번호/일자 1020100003901 (2010.01.15)
출원인 한국과학기술원
등록번호/일자 10-1678876-0000 (2016.11.17)
공개번호/일자 10-2011-0083919 (2011.07.21) 문서열기
공고번호/일자 (20161123) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2014.02.12)
심사청구항수 22

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 박태관 대한민국 대전광역시 유성구
2 이수현 대한민국 대전광역시 유성구
3 목혜정 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이원희 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2010.01.15 수리 (Accepted) 1-1-2010-0028163-16
2 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2013.02.01 수리 (Accepted) 4-1-2013-5019983-17
3 [심사청구]심사청구(우선심사신청)서
[Request for Examination] Request for Examination (Request for Preferential Examination)		 2014.02.12 수리 (Accepted) 1-1-2014-0136701-74
4 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2014.10.08 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
5 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2014.11.11 수리 (Accepted) 9-1-2014-0086149-16
6 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5158129-58
7 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157993-01
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157968-69
9 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2015.10.14 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2015-0705723-40
10 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2015.12.14 수리 (Accepted) 1-1-2015-1224637-05
11 [지정기간연장]기간연장(단축, 경과구제)신청서
[Designated Period Extension] Application of Period Extension(Reduction, Progress relief)		 2016.01.14 수리 (Accepted) 1-1-2016-0041428-88
12 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2016.02.15 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2016-0146828-11
13 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2016.02.15 수리 (Accepted) 1-1-2016-0146797-94
14 최후의견제출통지서
Notification of reason for final refusal		 2016.06.27 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0462638-13
15 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2016.07.13 수리 (Accepted) 1-1-2016-0677429-17
16 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2016.07.13 보정승인 (Acceptance of amendment) 1-1-2016-0677441-66
17 등록결정서
Decision to grant		 2016.09.26 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2016-0687659-37
18 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2019-5081392-49
19 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.05.15 수리 (Accepted) 4-1-2020-5108396-12
20 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.06.12 수리 (Accepted) 4-1-2020-5131486-63
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
두 종류 이상의 이중가닥 센스/안티센스(sense/antisense) 작은 간섭 RNA(small interfering RNA; siRNA) 단량체를 직접 공유결합을 통해 연결시킨 하기 [구조식 1] 또는 [구조식 2]를 가지는, 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체:[구조식 1]-(X1)n1 - (X2)n2 - (X3)n3 - … - (Xi)ni- (여기서, X1, X2, X3, …, Xi는 서로 다른 서열의 이중가닥 siRNA 단량체; i는 2 이상의 정수; 및ni는 이중가닥 siRNA 단량체의 개수로서, 1 이상의 정수),[구조식 2]x -(X1)n1 - (X2)n2 - (X3)n3 - … - (Xi)ni - x'(여기서, X1, X2, X3, …, Xi는 서로 다른 서열의 이중가닥 siRNA 단량체; x와 x'는 단일가닥 센스/안티센스 siRNA 단량체;i는 2 이상의 정수; 및ni는 이중가닥 siRNA 단량체의 개수로서, 1 이상의 정수)
2 2
두 종류 이상의 이중가닥 센스/안티센스(sense/antisense) 작은 간섭 RNA(small interfering RNA; siRNA) 단량체를 가교제 또는 고분자를 매개로 한 공유결합을 통해 연결시킨 하기 [구조식 1] 또는 [구조식 2]를 가지는, 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체:[구조식 1]-(X1-A)n1 - (X2-A)n2 - (X3-A)n3 - (X3-A)n3 - … - (Xi-A)ni- (여기서, X1, X2, X3, …, Xi는 서로 다른 서열의 이중가닥 siRNA 단량체; A는 가교제 또는 고분자;i는 2 이상의 정수; 및ni는 이중가닥 siRNA 단량체의 개수로서, 1 이상의 정수),[구조식 2]x - A-(X1-A)n1 - (X2-A)n2 - (X3-A)n3 - (X3-A)n3 - … - (Xi-A)ni - x'(여기서, X1, X2, X3, …, Xi는 서로 다른 서열의 이중가닥 siRNA 단량체; x와 x'는 단일가닥 센스/안티센스 siRNA 단량체;A는 가교제 또는 고분자;i는 2 이상의 정수; 및ni는 이중가닥 siRNA 단량체의 개수로서, 1 이상의 정수)
3 3
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 이중가닥 센스/안티센스 siRNA 단량체는 15 내지 29의 핵산 염기수를 가지는 것을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체
4 4
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 siRNA 다중 접합체는 서비빈(survivin) 및 Bcl-2를 표적하는 것을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체
5 5
두 종류 이상의 이중가닥 센스/안티센스 siRNA 단량체를 직접 공유결합시키는 단계를 포함하여 제조된 하기 [구조식 1] 또는 [구조식 2]를 가지는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법:[구조식 1]-(X1)n1 - (X2)n2 - (X3)n3 - … - (Xi)ni- (여기서, X1, X2, X3, …, Xi는 서로 다른 서열의 이중가닥 siRNA 단량체; i는 2 이상의 정수; 및ni는 이중가닥 siRNA 단량체의 개수로서, 1 이상의 정수),[구조식 2]x -(X1)n1 - (X2)n2 - (X3)n3 - … - (Xi)ni - x'(여기서, X1, X2, X3, …, Xi는 서로 다른 서열의 이중가닥 siRNA 단량체; x와 x'는 단일가닥 센스/안티센스 siRNA 단량체;i는 2 이상의 정수; 및ni는 이중가닥 siRNA 단량체의 개수로서, 1 이상의 정수)
6 6
두 종류 이상의 이중가닥 센스/안티센스 siRNA 단량체를 가교제 또는 고분자를 매개로 공유결합시키는 단계를 포함하여 제조된 하기 [구조식 1] 또는 [구조식 2]를 가지는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법:[구조식 1]-(X1-A)n1 - (X2-A)n2 - (X3-A)n3 - (X3-A)n3 - … - (Xi-A)ni-(여기서, X1, X2, X3, …, Xi는 서로 다른 서열의 이중가닥 siRNA 단량체; A는 가교제 또는 고분자;i는 2 이상의 정수; 및ni는 이중가닥 siRNA 단량체의 개수로서, 1 이상의 정수),[구조식 2]x-A-(X1-A)n1 - (X2-A)n2 - (X3-A)n3 - (X3-A)n3 - … - (Xi-A)ni - x'(여기서, X1, X2, X3, …, Xi는 서로 다른 서열의 이중가닥 siRNA 단량체; x와 x'는 단일가닥 센스/안티센스 siRNA 단량체;A는 가교제 또는 고분자;i는 2 이상의 정수; 및ni는 이중가닥 siRNA 단량체의 개수로서, 1 이상의 정수)
7 7
제 6항에 있어서, 상기 제조 방법은1) 말단이 서로 같거나 다른 관능기로 치환된 두 종류 이상의 단일가닥 센스/안티센스 siRNA 단량체(x1-b + a-x1', x2-b + a-x2', …, xi-b + a-xi')를 상보적 수소결합을 통해 a-X1-b, a-X2-b, …, 및 a-Xi-b로 만드는 단계; 및2) 상기 a-X1-b, a-X2-b, …, 및 a-Xi-b를 가교제 또는 고분자를 매개로 공유결합시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법:(여기서, X1, X2, X3, …, Xi는 서로 다른 서열의 이중가닥 siRNA 단량체; x1, x2, xi와 x1', x2', xi'는 단일가닥 센스/안티센스 siRNA 단량체; 및 a와 b는 말단에 도입된, 같거나 다른 관능기)
8 8
제 6항에 있어서, 상기 제조 방법은1) 말단이 서로 같거나 다른 관능기로 치환된 두 종류 이상의 단일가닥 센스/안티센스 siRNA 단량체(x1-b + a-x2와 x1'-b + a-x2') 각각을 가교제 또는 고분자를 매개로 공유결합시켜 2중량체인 x1-b-a-x2와 x1'-b-a-x2'로 만드는 단계; 및2) 상기 2중량체인 x1-b-a-x2와 x1'-b-a-x2'를 상보적 수소결합시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법:(여기서, x1및 x2는 서로 다른 서열의 단일가닥 센스 siRNA 단량체; x1'및 x2'는 서로 다른 서열의 단일가닥 안티센스 siRNA 단량체; 및 a와 b는 말단에 도입된, 같거나 다른 관능기)
9 9
제 5항 또는 제 6항에 있어서, 상기 공유결합은 비분해성인 아마이드 결합, 우레탄 결합; 산분해성인 에스터 결합, 하이드라존 결합, 아세탈 결합; 환원제 분해성인 이황화결합; 생분해성 결합; 및 효소 분해성 결합;으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법
10 10
제 7항 또는 제 8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 관능기는 설프하이드릴기(-SH), 카르복실기(-COOH) 및 아민기(-NH2)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법
11 11
제 5항 또는 제 6항에 있어서, 상기 단일가닥 센스/안티센스 siRNA 단량체는 3' 또는 5' 말단이 모두 관능기로 치환되어, 제조된 것임을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법
12 12
제 6항에 있어서, 상기 공유결합의 매개로 사용되는 고분자는 폴리에틸렌글리콜(polyethyleneglycol, PEG), 플루로닉(Pluronic), 폴리비닐피롤리돈(polyvinylpyrolidone) 및 폴리옥사졸린(polyoxazolin)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 비이온성 친수성 고분자; 또는 폴리-L-락트산(poly-L-lactic acid), 폴리-글리콜산 (poly-glycolic acid), 폴리-D-락트산-co-글리콜산(poly-D-lactic-co-glycolic acid), 폴리-L-락트산-co-글리콜산(poly-L-lactic-co-glycolic acid), 폴리-D,L-락트산-co-글리콜산(poly-D,L-lactic-co-glycolic acid), 폴리-카프로락톤(polycaprolactone), 폴리-발레로락톤(polyvalerolactone), 폴리-하이드록시 부티레이트(polyhydroxybutyrate) 및 폴리-하이드록시 발러레이트(polyhydroxyvalerate)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 생분해성 폴리에스테르계 고분자;인 것을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법
13 13
제 6항에 있어서, 상기 가교제는 분자량이 100 ~ 10000이 되는 것으로 디티오-비스-말레이미도에탄(Dithio-bis-maleimidoethane, DTME), 1,8-비스-말레이미도디에틸렌글리콜{1,8-Bis-maleimidodiethyleneglycol, BM(PEG)2}, 말레이미드(maleimide), 엔하이드록시석신이미드(NHS, N-hydroxysuccinimide), 비닐설폰(vinylsulfone), 이오도아세틸 니트로페닐아자이드(iodoacetyl, nitrophenyl azide), 아이소시아네이트(isocyanate), 피리딜다이설파이드(pyridyldisulfide), 하이드라자이드(hydrazide) 및 하이드록시페닐 아자이드(hydroxyphenyl azide)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법
14 14
제 5항 또는 제 6항에 있어서, 상기 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체 말단에 세포 선택적 리간드가 더 구비되어지는 것을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법
15 15
제 14항에 있어서, 상기 더 구비되어지는 리간드는 세포특이적 항체, 세포 선택적 펩타이드, 세포성장인자, 엽산(folic acid), 갈락토스(galactose), 만노스(mannose), 알지디(RGD) 및 트렌스페린(transferrin)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법
16 16
제 5항 또는 제 6항에 있어서, 상기 siRNA가 갖는 관능기를 활성화하는 단계를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법
17 17
제 16항에 있어서, 상기 siRNA가 갖는 관능기를 활성화시키는 물질은 1-에틸-3, 3-디메틸아미노프로필 카보디이미드(1-ethyl-3,3-dimethylaminopropyl carbodiimide), 이미다졸(imidazole), N-하이드록시숙신이미드(N-hydroxysuccinimide), 디클로로헥실카보디이미드(dichlorohexylcarbodiimide), N-β-말레이미도프로피오닉엑시드(N-β-Maleimidopropionic acid), N-β-말레이미도프로필 숙신이미드에스터(N-β-maleimidopropyl succimimide ester) 및 N-숙신이미딜 3-(2-피리딜다이싸이오) 프로피오네이트{N-Succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate}로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체의 제조방법
18 18
제 1항 또는 제 2항의 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체; 및 양이온성 펩타이드, 양이온성 지질 및 양이온성 고분자로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 양이온성 유전자 전달체; 간의 이온 상호작용(ionic interaction)에 의해 형성되는 이온 복합체
19 19
제 18항에 있어서, 상기 양이온성 펩타이드는 양이온 융합성 펩타이드(cationic fusogenic peptide, KALA), 폴리라이신(polylysine) 및 프로타민(protamine)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 이온 복합체
20 20
제 18항에 있어서, 상기 양이온성 지질은 다이올레일 포스페티딜에탄올아민(dioleoyl phosphatidylethanolamine) 또는 콜레스테롤 다이올레일 포스페티딜콜린(cholesterol dioleoyl phosphatidyl choline)인 것을 특징으로 하는 이온 복합체
21 21
제 18항에 있어서, 상기 양이온성 고분자는 폴리에틸렌이민(polyethylenimine), 폴리아민(polyamines) 및 폴리비닐아민(polyvinylamine)으로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는 이온 복합체
22 22
삭제
23 23
제 1항 또는 제 2항의 복합 유전자를 표적하는 siRNA 다중 접합체에 있어서 상기 복합 유전자는 서비빈(survivin) 및 Bcl-2 유전자인 siRNA 다중 접합체; 및 양이온성 펩타이드, 양이온성 지질 및 양이온성 고분자로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나의 양이온성 유전자 전달체간의 이온 상호작용(ionic interaction)에 의해 형성되는 이온 복합체를 유효성분으로 포함하는 자궁암 또는 유방암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
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1 교육과학기술부 바이오신약장기사업단 지능형 약물전달시스템 기술 개발 장기/세포 선택적 유전자/조영제 전달용담체개발