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분지쇄 아미노산의 고생성능을 갖는 변이 미생물 및 이를 이용한 분지쇄 아미노산의 제조방법

  • 기술번호 : KST2014065654
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 분지쇄 아미노산 생성능이 개선된 변이 미생물 및 이를 이용한 분지쇄 아미노산의 제조방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는, L-이소루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자, L-루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자 및 D-판토텐산 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 약화 또는 결실시키고, L-발린 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 그 발현이 증가되도록 변이시켜 수득된 L-발린 생성능이 개선된 변이 미생물 및 이를 이용한 L-발린의 제조방법에 관한 것이다. 부위특위적 돌연변이 방법과 대사흐름 조작에 의해 수득된 본 발명에 따른 변이 미생물은 분지쇄 아미노산, 특히, L-발린을 고효율로 생성할 수 있어, L-발린의 산업적 생성 미생물로 유용하다. 부위특위적 돌연변이화, 분지쇄 아미노산, L-발린, 대장균
Int. CL C12P 13/08 (2006.01) C12N 1/16 (2006.01) C12N 1/14 (2006.01)
CPC
출원번호/일자 1020070005268 (2007.01.17)
출원인 한국과학기술원
등록번호/일자 10-0832740-0000 (2008.05.21)
공개번호/일자
공고번호/일자 (20080527) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2007.01.17)
심사청구항수 28

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 이상엽 대한민국 대전광역시 유성구
2 박진환 대한민국 경기도 수원시 영통구
3 이광호 대한민국 대전광역시 유성구
4 김태용 대한민국 경기도 용인시

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이처영 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, **층 (역삼동, 윤익빌딩)(*T국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 특허출원서
Patent Application
2007.01.17 수리 (Accepted) 1-1-2007-0049382-41
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search
2007.10.05 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search
2007.11.09 수리 (Accepted) 9-1-2007-0069051-66
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal
2007.12.17 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2007-0680955-28
5 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)
2008.01.15 수리 (Accepted) 1-1-2008-0032530-50
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment
2008.01.15 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2008-0032553-00
7 등록결정서
Decision to grant
2008.05.16 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2008-0263053-81
8 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2013.02.01 수리 (Accepted) 4-1-2013-5019983-17
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5158129-58
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157993-01
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157968-69
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2019.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2019-5081392-49
13 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2020.05.15 수리 (Accepted) 4-1-2020-5108396-12
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information
2020.06.12 수리 (Accepted) 4-1-2020-5131486-63
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
L-발린 생성능을 가지는 미생물에서, L-이소루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자, L-루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자 및 D-판토텐산 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 약화 또는 결실시키고, L-발린 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 그 발현이 증가되도록 변이시키는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법
2 2
제1항에 있어서, 상기 L-발린 생성능을 가지는 미생물은 L-발린 생성능을 가지는 박테리아, L-발린 생성능을 가지는 효모 및 L-발린 생성능을 가지는 곰팡이로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 변이 미생물의 제조방법
3 3
제2항에 있어서, 상기 박테리아는 코리네박테리움(Corynebacterium) 속, 브레비박테리움(Brevibacterium) 속 및 대장균으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법
4 4
제1항에 있어서, L-이소루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자는 ilvA(threonine dehydratase를 암호화하는 유전자)인 것을 특징으로 하는 방법
5 5
제1항에 있어서, L-루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자는 leuA(2-isopropylmalate synthase를 암호화하는 유전자)인 것을 특징으로 하는 방법
6 6
제1항에 있어서, D-판토텐산 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자는 panB(3-methyl-2-oxobutanoate hydroxymethyltransferase를 암호화하는 유전자)인 것을 특징으로 하는 방법
7 7
제1항에 있어서, 상기 L-발린 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자를 그 발현이 증가되도록 변이시키는 것은 다음으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법: (a) lacI(lac operon repressor를 암호화하는 유전자) 유전자의 결실;(b) ilvH(acetohydroxy acid synthase isozyme III) 유전자의 피드백 저해(feedback inhibition) 제거; (c) ilvGMEDA(acetohydroxy acid synthase isozyme I) 및 ilvBN(Acetohydroxy acid synthase isozyme II) 오페론의 attenuator를 포함하는 native promoter를 strong promoter로 치환; 및 (d) strong promoter를 포함하는 발현벡터의 도입
8 8
제7항에 있어서, 상기 strong promoter는 trc promoter, tac promoter, T7 promoter, lac promoter 및 trp promoter로 구성된 군에서 선택된 것을 특징으로 하는 방법
9 9
제7항에 있어서, 상기 strong promoter를 포함하는 발현벡터는 ilvB, ilvN, ilvC, ilvE 및 ilvD 유전자를 함유하는 벡터인 것을 특징으로 하는 방법
10 10
제9항에 있어서, 상기 발현벡터는 pKBRilvBNCED 벡터인 것을 특징으로 하는 방법
11 11
제1항에 있어서, aceE, aceF, lpdA, pfkA, pfkB, tpiA, sdhA, sdhB, sdhC, sdhD, fumA, fumB, fumC, eptB, gpmA, gpmB, ptsG, mdh, ppc, pgi, glgC, sucA, sucB, ribA, folE 및 ackA로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상의 유전자를 추가로 약화 또는 결실시키는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법
12 12
제1항에 있어서, aceF 및 pfkA 유전자를 추가로 약화 또는 결실시키는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법
13 13
제1항에 있어서, aceF, pfkA 및 mdh 유전자를 추가로 약화 또는 결실시키는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법
14 14
제1항에 있어서, 분지쇄 아미노산 엑스포터(exporter) 유전자를 추가로 증폭 또는 도입시키는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법
15 15
제14항에 있어서, 상기 분지쇄 아미노산 엑스포터(exporter) 유전자는 서열번호 43 및 서열번호 44의 아미노산 서열을 암호화하는 염기서열로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나 이상이거나, 서열번호 45의 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 방법
16 16
제1항에 있어서, global regulator인 lrp 유전자를 추가로 증폭 또는 도입시키는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물의 제조방법
17 17
제16항에 있어서, 상기 lrp 유전자는 서열번호 46의 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 방법
18 18
제1항 내지 제17항 중 어느 한 항의 방법으로 제작되고, L-발린 생성능을 가지는 미생물에서, L-이소루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자, L-루신 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자 및 D-판토텐산 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자가 약화 또는 결실되어 있고, L-발린 생합성에 관여하는 효소를 코딩하는 유전자의 발현이 증가되도록 변이되어 있는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물
19 19
(a) ilvA, leuA 및 panB가 약화 또는 결실; (b) lacI 유전자가 결실; (c) ilvH 유전자의 피드백 저해가 제거;(d) ilvGMEDA 및 ilvBN 오페론의 attenuator를 포함하는 native promoter가 strong promoter로 치환; (e) ilvB, ilvN, ilvC, ilvE 및 ilvD 유전자와 strong promoter를 포함하는 발현 벡터가 도입; 및(f) 서열번호 45의 분지쇄 아미노산 엑스포터(exporter) 유전자가 증폭 또는 도입되어 있는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물
20 20
제19항에 있어서, 서열번호 46의 lrp 유전자가 추가로 증폭 또는 도입되어 있는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물
21 21
(a) ilvA, leuA 및 panB가 약화 또는 결실; (b) lacI 유전자가 결실; (c) ilvH 유전자의 피드백 저해가 제거;(d) ilvGMEDA 및 ilvBN 오페론의 attenuator를 포함하는 native promoter가 strong promoter로 치환; (e) ilvB, ilvN, ilvC, ilvE 및 ilvD 유전자와 strong promoter를 포함하는 발현 벡터가 도입; 및(f) aceF 및 pfkA 유전자가 약화 또는 결실되어 있는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물
22 22
제21항에 있어서, 서열번호 45의 분지쇄 아미노산 엑스포터(exporter) 유전자가 추가로 증폭 또는 도입되어 있는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물
23 23
제21항에 있어서, 서열번호 46의 lrp 유전자가 추가로 증폭 또는 도입되어 있는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물
24 24
(a) ilvA, leuA 및 panB가 약화 또는 결실; (b) lacI 유전자가 결실; (c) ilvH 유전자의 피드백 저해가 제거;(d) ilvGMEDA 및 ilvBN 오페론의 attenuator를 포함하는 native promoter가 strong promoter로 치환; (e) ilvB, ilvN, ilvC, ilvE 및 ilvD 유전자와 strong promoter를 포함하는 발현 벡터가 도입; 및(f) aceF, pfkA 및 mdh 유전자가 약화 또는 결실되어 있는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물
25 25
제24항에 있어서, 서열번호 45의 분지쇄 아미노산 엑스포터(exporter) 유전자가 추가로 증폭 또는 도입되어 있는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물
26 26
제24항에 있어서, 서열번호 46의 lrp 유전자가 추가로 증폭 또는 도입되어 있는 것을 특징으로 하는 L-발린 고생성능을 가지는 변이 미생물
27 27
제18항의 L-발린 생성 고생성능을 가지는 변이 미생물를 배양한 다음, 상기 미생물의 배양액으로부터 L-발린을 회수하는 것을 특징으로 하는 L-발린의 제조방법
28 28
제19항 내지 제26항 중 어느 한 항의 L-발린 생성 고생성능을 가지는 변이 미생물를 배양한 다음, 상기 미생물의 배양액으로부터 L-발린을 회수하는 것을 특징으로 하는 L-발린의 제조방법
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8 US8148137 US 미국 DOCDBFAMILY
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