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하기 [구조식 1] 또는 하기 [구조식 2]를 포함하는 3차원 망상구조의 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤
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제 1항에 있어서, 상기 [구조식 1] 및 [구조식 2]의 상기 센스 siRNA 단량체 및 안티센스 siRNA 단량체는 13 내지 60의 핵산 염기수를 가지는 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤
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제 1항에 있어서, 상기 [구조식 1] 및 [구조식 2]의 상기 제1 관능기 및 제2 관능기는 동일하거나 서로 다른 관능기로, 설프하이드릴기(-SH), 카르복실기(-COOH), 아민기(-NH2), 히드록시기(-OH), 포르밀기(-CHO), 카르보닐기(-CO-), 에테르기(-O-), 에스테르기(-COO-), 니트로기(-NO2), 아자이드기(-N2), 설폰산기(-SO3H)로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나의 관능기인 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤
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제 1항에 있어서, 상기 [구조식 1] 및 [구조식 2]의 상기 가교제는 100 내지 10000 달톤(Dalton)의 분자량을 가지고, 디티오-비스-말레이미도에탄(Dithio-bis-maleimidoethane, DTME), 1,8-비스-말레이미도디에틸렌글리콜{1,8-Bis-maleimidodiethyleneglycol, BM(PEG)2}, 트리스-2-말레이미도에틸-아민{Tris-(2-maleimidoethyl)-amine, TMEA), 트리-석신이미딜 아미노트리아세테이트 (Tri-succinimidyl aminotriacetate, TSAT) 및 3-암-폴리에틸렌 글리콜 {Poly(ethylene glycol), 3-arm-PEG}, 말레이미드(maleimide), 엔하이드록시석신이미드(NHS, N-hydroxysuccinimide), 비닐설폰(vinylsulfone), 이오도아세틸 니트로페닐아자이드(iodoacetyl, nitrophenyl azide), 아이소시아네이트(isocyanate), 피리딜다이설파이드(pyridyldisulfide), 하이드라자이드(hydrazide) 및 하이드록시페닐 아자이드(hydroxyphenyl azide)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤
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삭제
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제 1항에 있어서, 상기 siRNA 하이드로젤은 상기 [구조식 1] 및 [구조식 2]의 말단에 구비되는 세포 선택적 리간드를 더 포함하고, 상기 세포 선택적 리간드는 세포특이적 항체, 세포 선택적 펩타이드, 유전자 앱타머(aptamer), 세포성장인자, 엽산(folic acid), 갈락토스(galactose), 만노스(mannose), RGD(Arginine-Glycine-Aspartic acid) 및 트렌스페린(transferrin)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤
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제 3항에 있어서, 상기 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤은 상기 [구조식 1] 및 [구조식 2]의 상기 제1 관능기 및 제2 관능기를 활성화시키는 관능기 활성제를 더 포함하고, 상기 관능기 활성제는 1-에틸-3, 3-디메틸아미노프로필 카보디이미드(1-ethyl-3,3-dimethylaminopropyl carbodiimide), 이미다졸(imidazole), N-하이드로실숙신이미드(N-hydroxysuccinimide), 디클로로헥실카보디이미드(dichlorohexylcarbodiimide), N-β-말레이미도프로피오닉엑시드(N-β-Maleimidopropionic acid), N-β-말레이미도프로필로실 숙신이미드에스터(N-β-maleimidopropyl succimimide ester) 및 N-숙신이미딜피리딜다이싸이오 프로피오네이트(N-Succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤
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8
말단에 제1 관능기가 도입된 센스 siRNA 단량체를 하기 [구조식 3]과 같이 제1 연결하여 센스 siRNA 다중 접합체를 제조하는 제1 단계;말단에 제2 관능기가 도입된 안티센스 siRNA 단량체를 하기 [구조식 4]와 같이 제2 연결하여 안티센스 siRNA 다중 접합체를 제조하는 제2 단계; 및상기 센스 siRNA 다중 접합체 및 상기 안티센스 siRNA 다중 접합체를 결합시켜 3차원 망상구조의 siRNA 하이드로젤을 제조하는 제3 단계를 포함하는 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤 제조방법
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제 8항에 있어서, 상기 제3 단계에서 상기 다중 접합체들의 결합은, 상기 센스 siRNA 다중 접합체 및 안티센스 siRNA 다중 접합체가 단일가닥인 경우에는 상보적 수소 결합이고, 상기 센스 siRNA 다중 접합체 및 안티센스 siRNA 다중 접합체가 이중가닥인 경우에는 직접 공유결합, 상기 가교제를 매개로 하는 공유결합 또는 상기 고분자를 매개로 하는 공유결합인 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤 제조방법
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제 9항에 있어서, 상기 가교제를 매개로 하는 공유결합 또는 상기 고분자를 매개로 하는 공유결합은, 비분해성인 아마이드 결합, 우레탄 결합; 산분해성인 에스터 결합, 하이드라존 결합, 아세탈 결합; 환원제 분해성인 이황화 결합; 생분해성 결합; 및 효소 분해성 결합으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 공유결합인 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤 제조방법
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제 1항 내지 제 4항, 제 6항, 제7항 중 어느 한 항에 따른 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤; 및상기 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤과 이온결합하는 양이온성 유전자 전달체를 포함하고, 상기 양이온성 유전자 전달체는 양이온성 펩타이드, 양이온성 지질 및 양이온성 고분자로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상이고, 상기 양이온성 고분자는 폴리에틸렌이민, 폴리아민, 폴리비닐아민, 폴리(알킬아민 하이드로클로라이드), 폴리아미도아민 덴드리머, 디에틸아미노에틸-덱스트란, 폴리비닐피롤리돈, 카이토산 및 폴리(2-디메틸아미노)에틸 메타크릴레이트로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 이온 복합체
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제 11항에 있어서, 상기 양이온성 펩타이드는 KALA(cationic fusogenic peptide), 폴리라이신(polylysine) 및 프로타민(protamine) 로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 이온복합체
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제 11항에 있어서, 상기 양이온성 지질은 N-[1-(2,3-디올레오일옥시)프로필]-N,N,N-트리메틸암모니움 클로라이드, 1,2-디올레오일옥시-3-(트리메틸암모니오)프로판, 1,2-디올레오일-3-(4'-트리메틸-암모니오)부탄오일-sn-글리세롤, 1,2-디아실-3-디메틸암모늄-프로판, 1,2-디아실-3-트리메틸암모늄-프로판, 1,2-디아실-sn-글리세롤-3-에틸포스포콜린, 3β-[N-(N',N'-디메틸아미노에탄)-카르바모일]콜레스테롤, 디메틸디옥타데실암모늄 브로마이드 및 그 공중합체로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 이온복합체
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제 8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 방법으로 제조되는 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤을 준비하는 제 1단계; 및 상기 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤을 희석시킨 후, 양이온성 유전자 전달체를 첨가하는 제 2단계를 포함하는 이온복합체 제조방법
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제 15항에 있어서, 상기 양이온성 유전자 전달체의 첨가량은, 상기 양이온성 유전자 전달체의 양전하와 상기 유전자 표적용 siRNA 하이드로젤의 음전하의 전하 비가 1:1 내지 200:1 범위에서 결정되는 이온복합체 제조방법
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