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ＳＤＬ－ＰＣＲ을 이용한 유전자 분석방법

  • 기술번호 : KST2015119434
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 SDL-PCR(Separation of displaced ligation probe-based PCR)을 이용한 유전자 분석방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로, 목적 유전자와 상보적인 염기서열을 포함하는 각각의 탐침들을 리가제(ligase)를 이용한 연결반응 및 연장(extention)반응을 통해 주형 탐침을 제조하고, 정제(separation) 과정을 수행한 다음, 공통의 프라이머를 이용하여 목적유전자의 주형 탐침을 증폭시키는 것을 특징으로 하는 SDL-PCR을 이용한 유전자 분석방법에 관한 것이다.본 발명에 따른 SDL-PCR 방법은 연결 반응이 되지 않은 미반응 탐침 또는 genomic DNA를 태그를 이용하여 제거함으로써, 비특이적 증폭 반응을 최소화할 수 있을 뿐만 아니라 exonuclease를 이용하는 정제방법보다 빠른 시간 내에 정제가 가능하며 단일 튜브 내의 동일 용액에서 연결, 정제 및 중합효소연쇄반응이 가능하여 정확하고 신속하게 복수의 유전자를 동시에 증폭시킬 수 있다.
Int. CL C12Q 1/68 (2006.01) C12N 15/11 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01)
CPC C12Q 1/6858(2013.01) C12Q 1/6858(2013.01) C12Q 1/6858(2013.01)
출원번호/일자 1020110019225 (2011.03.04)
출원인 한국과학기술원
등록번호/일자 10-1322880-0000 (2013.10.22)
공개번호/일자 10-2012-0101255 (2012.09.13) 문서열기
공고번호/일자 (20131029) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 등록
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2011.03.04)
심사청구항수 17

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 박현규 대한민국 대전광역시 유성구
2 신성철 대한민국 대전광역시 유성구
3 김가희 대한민국 대전광역시 유성구
4 강병철 대한민국 서울특별시 관악구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이처영 대한민국 서울특별시 강남구 언주로 ***, **층 (역삼동, 윤익빌딩)(*T국제특허법률사무소)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 한국과학기술원 대전광역시 유성구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2011.03.04 수리 (Accepted) 1-1-2011-0156037-19
2 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2012.04.26 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
3 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2012.05.23 수리 (Accepted) 9-1-2012-0039777-19
4 의견제출통지서
Notification of reason for refusal		 2013.01.14 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2013-0024729-15
5 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2013.02.01 수리 (Accepted) 4-1-2013-5019983-17
6 [명세서등 보정]보정서
[Amendment to Description, etc.] Amendment		 2013.03.14 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) 1-1-2013-0222524-05
7 [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서
[Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation)		 2013.03.14 수리 (Accepted) 1-1-2013-0222521-68
8 등록결정서
Decision to grant		 2013.07.24 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2013-0507497-57
9 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157968-69
10 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5157993-01
11 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2014.12.24 수리 (Accepted) 4-1-2014-5158129-58
12 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2019-5081392-49
13 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.05.15 수리 (Accepted) 4-1-2020-5108396-12
14 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.06.12 수리 (Accepted) 4-1-2020-5131486-63
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번호 청구항
1 1
다음 단계를 포함하는 공통의 프라이머를 이용하여 목적 유전자의 주형 탐침을 증폭시키는 SDL-PCR 방법:(a) 5' 말단에 공통의 전방향 프라이머 염기서열을 포함하고 목적 유전자의 일부영역과 상보적인 염기서열을 포함하는 탐침 1; 5' 말단에 상기 탐침 1에 포함된 목적 유전자의 일부영역의 다음 목적 유전자 영역과 상보적인 염기서열을 포함하고 탐침 3과 혼성화할 수 있는 추가 염기서열을 포함하는 탐침 2; 및 공통의 역방향 프라이머 염기서열을 포함하고 상기 탐침 2의 추가 염기서열과 상보적인 염기서열 및 5' 말단에 정제를 위한 태그를 추가로 포함하는 탐침 3을 준비하는 단계;(b) 목적 유전자를 포함하는 혼합물과 목적 유전자에 대한 탐침 1 및 탐침 2를 포함하는 혼합물을 혼합하고, 상기 혼합물에 리가제(Ligase)를 첨가하여 상기 탐침 1 및 탐침 2를 연결하는 단계; (c) 상기 (b) 혼합물에 탐침 3, DNA 중합효소 및 dNTP를 첨가하여 탐침 3과 탐침 2를 혼성화시키고, 탐침 3에 탐침 2 및 탐침 1에 상보적인 염기서열을 연장시켜 목적 유전자의 주형 탐침을 제조한 후, 정제하는 단계; 및 (d) 상기 (c)의 정제된 주형 탐침을 공통의 전방향 프라이머 및 공통의 역방향 프라이머로 중합효소연쇄반응(PCR)을 수행하여 증폭시키는 단계
2 2
제1항에 있어서, 상기 리가제는 90N 리가제, E
3 3
제1항에 있어서, 상기 DNA 중합효소는 Taq DNA 중합효소 및 Pfu DNA 중합효소로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 SDL-PCR 방법
4 4
삭제
5 5
제1항에 있어서, 상기 탐침 3에 포함되는 태그는 비오틴, 아비딘, 스트렙트아비딘, 항원, 항체, 호스트 화합물, 게스트 화합물, 금속 킬레이트 화합물 및 핵산으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 SDL-PCR 방법
6 6
제1항에 있어서, 상기 공통의 역방향 프라이머는 증폭 산물의 유무를 확인하기 위해 형광물질을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 SDL-PCR 방법
7 7
제6항에 있어서, 상기 증폭 산물의 유무는 캡처 탐침이 고정된 DNA 칩을 이용하여 판독하는 것을 특징으로 하는 SDL-PCR 방법
8 8
다음 단계를 포함하는 공통의 프라이머를 이용하여 복수의 목적 유전자의 주형 탐침 그룹을 증폭시키는 SDL-PCR 방법:(a) 5' 말단에 공통의 전방향 프라이머 염기서열을 포함하고 복수의 목적 유전자의 일부영역과 상보적인 염기서열을 각각 포함하는 복수의 탐침 1을 포함하는 탐침 그룹 1; 5' 말단에 상기 탐침 1에 포함된 복수의 목적 유전자의 일부영역의 다음 목적 유전자 영역과 상보적인 염기서열을 각각 포함하고 탐침 3과 혼성화할 수 있는 추가 염기서열을 포함하는 복수의 탐침 2를 포함하는 탐침 그룹 2; 및 공통의 역방향 프라이머 염기서열을 포함하고 상기 탐침 2의 추가 염기서열과 상보적인 염기서열 및 5' 말단에 정제를 위한 태그를 추가로 포함하는 탐침 3을 준비하는 단계;(b) 복수의 목적 유전자를 포함하는 혼합물과 탐침 그룹 1 및 탐침 그룹 2를 포함하는 혼합물을 혼합하고, 상기 혼합물에 리가제(Ligase)를 첨가하여 복수의 목적 유전자에 따른 각각의 탐침 1 및 탐침 2를 각각 연결하는 단계; (c) 상기 (b) 혼합물에 탐침 3, DNA 중합효소 및 dNTP를 첨가하여 탐침 3과 각각의 탐침 2를 혼성화시키고, 탐침 3에 탐침 2 및 탐침 1에 상보적인 염기서열을 각각 연장시켜 복수의 목적 유전자의 주형 탐침들을 포함하는 주형 탐침 그룹을 제조한 후, 정제하는 단계; 및 (d) 상기 (c)의 정제된 주형 탐침 그룹을 공통의 전방향 프라이머 및 공통의 역방향 프라이머로 중합효소연쇄반응(PCR)을 수행하여 증폭시키는 단계
9 9
제8항에 있어서, 상기 리가제는 90N 리가제, E
10 10
제8항에 있어서, 상기 DNA 중합효소는 Taq DNA 중합효소 및 Pfu DNA 중합효소로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 SDL-PCR 방법
11 11
삭제
12 12
제8항에 있어서, 상기 탐침 3에 포함되는 태그는 비오틴, 아비딘, 스트렙트아비딘, 항원, 항체, 호스트 화합물, 게스트 화합물, 금속 킬레이트 화합물 및 핵산으로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는 SDL-PCR 방법
13 13
제8항에 있어서, 상기 공통의 역방향 프라이머는 증폭 산물의 유무를 확인하기 위해 형광물질을 추가로 포함하는 것을 특징으로 SDL-PCR 방법
14 14
제13항에 있어서, 상기 증폭 산물의 유무는 캡처 탐침들이 고정된 DNA 칩을 이용하여 판독하는 것을 특징으로 하는 SDL-PCR 방법
15 15
다음 단계를 포함하는 유전자의 다중 검출방법:(a) 제8항의 SDL-PCR 방법으로 복수의 목적 유전자에 대한 각각의 주형 탐침들을 제조하고 증폭시키는 단계;(b) 상기 증폭 산물들을 단일가닥으로 변성시키는 단계; 및 (c) 상기 변성된 증폭 산물들의 형광을 측정하여 목적 유전자의 존재여부를 검출하는 단계
16 16
제15항에 있어서, 상기 목적 유전자의 검출은 캡처 탐침들이 고정된 DNA 칩을 이용하는 것을 특징으로 하는 유전자의 다중 검출방법
17 17
다음 단계를 포함하는 유전자 다중 검출방법:(a) 제8항의 SDL-PCR 방법으로 복수의 목적 유전자에 대한 각각의 주형 탐침들을 증폭시키되, 상기 탐침 2는 목적 유전자에 따라 길이가 서로 다른 것을 사용하여 증폭시키는 단계; 및 (b) 질량분석기를 이용하여 상기 증폭 산물들의 복수의 목적 유전자에 대한 주형 탐침들을 분석하고, 주형 탐침에 대한 피크 존재여부로 목적 유전자의 존재여부를 검출하는 단계
18 18
다음 단계를 포함하는 유전자 변이의 다중 검출방법:(a) 제8항의 SDL-PCR 방법으로 복수의 목적 유전자에 대한 주형 탐침들을 제조하고 증폭시키는 단계;(b) 상기 증폭 산물들을 단일가닥으로 변성시키는 단계; 및 (c) 상기 변성된 증폭 산물들의 형광을 측정하여 목적 유전자의 변이 여부를 검출하는 단계
19 19
제18항에 있어서, 상기 목적 유전자의 변이 검출은 캡처 탐침들이 고정된 DNA 칩을 이용하는 것을 특징으로 하는 유전자 변이의 다중 검출방법
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2 US20140171334 US 미국 FAMILY
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4 WO2012121486 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY
5 WO2012121486 WO 세계지적재산권기구(WIPO) FAMILY

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5 WO2012121486 WO 세계지적재산권기구(WIPO) DOCDBFAMILY
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