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렌티바이러스를 이용한 차세대 시퀀싱 기반 재조합 단백질 발현을 위한 세포 내 고발현 영역 탐색 방법 및 고발현 영역 정보(Method and domain information for exploring hotspot of expression of recombinant protein in cell line using lentivirus based next-generation sequencing)

  • 기술번호 : KST2018004626
  • 담당센터 : 대전기술혁신센터
  • 전화번호 : 042-610-2279
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명자들은 재조합 유전자 고발현을 위한 CHO 세포 핫스팟 영역 탐색 방법을 고안하기 위해, CMV 프로모터와 GFP 서열을 포함하는 렌티바이러스를 처리하여 GFP를 발현하는 CHO 세포주를 구축하고, 이 중에서 GFP를 고발현 하는 CHO 세포주를 자동 세포 침착 장치를 갖춘 유세포 분석기를 통해 4구간으로 분리하였으며, 타겟 PCR을 통하여 렌티바이러스의 삽입 위치를 선택적으로 증폭하고 차세대 시퀀싱을 통하여 해당 유전자 삽입 위치의 서열 분석을 통해 핫스팟 영역을 찾아내었다.
Int. CL C12Q 1/68 (2018.01.01) G06F 19/22 (2017.01.01) G01N 15/14 (2006.01.01) C12N 15/85 (2006.01.01)
CPC C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01) C12Q 1/6869(2013.01)
출원번호/일자 1020160135520 (2016.10.19)
출원인 재단법인 지능형 바이오 시스템 설계 및 합성 연구단, 한국과학기술원
등록번호/일자
공개번호/일자 10-2018-0043421 (2018.04.30) 문서열기
공고번호/일자
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 공개
심사진행상태 수리
심판사항
구분 신규
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 N
심사청구항수 6

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 재단법인 지능형 바이오 시스템 설계 및 합성 연구단 대한민국 대전광역시 유성구
2 한국과학기술원 대한민국 대전광역시 유성구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 조병관 대한민국 대전광역시 유성구
2 신종오 대한민국 대전광역시 유성구
3 이남일 대한민국 대전광역시 유성구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 이원희 대한민국 서울특별시 강남구 테헤란로 ***, 성지하이츠빌딩*차 ***호 (역삼동)

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 [특허출원]특허출원서
[Patent Application] Patent Application		 2016.10.19 수리 (Accepted) 1-1-2016-1012561-07
2 [출원인변경]권리관계변경신고서
[Change of Applicant] Report on Change of Proprietary Status		 2017.02.09 수리 (Accepted) 1-1-2017-0135200-47
3 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2019.04.24 수리 (Accepted) 4-1-2019-5081392-49
4 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.05.15 수리 (Accepted) 4-1-2020-5108396-12
5 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2020.06.12 수리 (Accepted) 4-1-2020-5131486-63
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번호 청구항
1 1
1) 형광 단백질을 암호화하는 유전자를 게놈 상에 포함하고 있는 렌티바이러스를 숙주 세포에 감염시켜 형질전환체를 제조하는 단계;2) 상기 단계 1)의 형광 단백질을 고발현하는 단일 클론을 선별하는 단계;3) 상기 단계 2)의 단일 클론으로부터 DNA를 추출하는 단계;4) 상기 단계 3)의 DNA를 하기의 프라이머 세트를 이용하여 순차적으로 증폭시켜 정제 산물을 제조하는 단계; 및 a
2 2
제 1항에 있어서, 상기 단계 5)의 염기서열 분석은 하기의 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는, 목적 단백질이 고발현되는 핫스팟(hot spot)지역 탐색 방법:i) 차세대 시퀀싱을 통해 리드(Reads)를 생성하고 상기 청구항 제 1항의 단계 1)의 벡터 및 숙주 세포의 유전체 서열을 동시에 가지는 리드(Reads)를 선별하는 단계; 및ii) 상기 단계 i)에서 선별된 리드(Reads)를 상기 청구항 제 1항의 단계 1)의 숙주 세포 유전체 스캐폴드에 맵핑(mapping)하여 분석하는 단계
3 3
제 1항에 있어서, 상기 형광 단백질은 그린 형광 단백질(green fluorescent protein; GFP), 레드 형광 단백질(red fluorescent protein; RFP), 블루 형광 단백질(blue fluorescent protein; BFP), 옐로우 형광 단백질(yellow fluorescent protein; YFP), 시안 형광 단백질(CFP; cyan fluorescent protein) 및 강화된 녹색 형광 단백질(enhanced green fluorescent protein; EGFP)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나인 것을 특징으로 하는, 목적 단백질이 고발현되는 핫스팟(hot spot)지역 탐색 방법
4 4
제 1항에 있어서, 상기 단계 1)의 숙주 세포는 CHO(chinese hamster ovary), BHK(baby hamster kidney) 또는 NSO 골수종 세포인 것을 특징으로 하는, 목적 단백질이 고발현되는 핫스팟(hot spot)지역 탐색 방법
5 5
제 1항에 있어서 상기 단계 2)의 선별은, 유세포분석(flow cytometry)을 이용하는 것을 특징으로 하는, 목적 단백질이 고발현되는 핫스팟(hot spot)지역 탐색 방법
6 6
제 2항에 있어서 상기 단계 i)의 차세대 시퀀싱은 Illumina 플랫폼을 이용하는 것을 특징으로 하는, 목적 단백질이 고발현되는 핫스팟(hot spot)지역 탐색 방법
지정국 정보가 없습니다
패밀리정보가 없습니다
순번, 연구부처, 주관기관, 연구사업, 연구과제의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 국가R&D 연구정보 정보 표입니다.
순번 연구부처 주관기관 연구사업 연구과제
1 미래창조과학부 한국과학기술원 원천기술개발사업 CHO 세포 당대사 엔지니어링을 통한 글리칸 변이체 제작 원천기술 개발(2015)
2 미래창조과학부 한국과학기술원 원천기술개발사업 지능형 바이오 시스템에 의한 고품질 항체 의약품 생산성 극대화(1차년도)