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(a) 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction)으로 증폭된 표적 유전자의 증폭산물에 대하여, 표적 유전자의 돌연변이 위치를 중심으로 5' 영역 및 3' 영역에 각각 상보적으로 결합하는 제 1 프로브 및 제 2 프로브를 사용하여 리가제 반응(Ligase reaction)을 수행하는 단계; (b) 상기 (a) 단계의 리가제 반응산물에 대해, 상기 반응산물에 포함된 제 1 프로브에 상보적으로 결합하는 절단효소 증폭 프라이머, 제 2 프로브의 절단효소 인식 염기서열을 인지하는 절단 효소, 및 중합효소의 혼합용액을 첨가하고 절단효소 증폭반응(Nicking Amplification)을 수행하는 단계; 및(c) 상기 (b) 단계의 증폭반응에 의한 DNA 절편의 생성유무를 확인하여, 표적 유전자의 존재를 확인하는 단계를 포함하는 표적 유전자의 돌연변이 검출방법에 있어서, 상기 제 1 프로브는 5' 말단에 상기 표적 유전자에 존재하는 돌연변이 위치와 상보적인 염기를 가지며, 3' 말단에 절단효소 증폭반응을 위한 프라이머 혼성화 염기서열을 포함하고,상기 제 2 프로브는 3' 말단에 표적 유전자에 존재하는 돌연변이 위치와 상보적인 염기를 가지며, 5' 말단에 절단효소 인식 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 표적 유전자의 돌연변이 검출방법
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제1항에 있어서, 상기 (a) 단계의 리가제 반응에 사용하는 효소는 90N 리가제, E
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제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 절단효소는 Nb
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제1항에 있어서, 상기 (b) 단계의 중합효소는 Klenow DNA 중합효소, Bsu DNA 중합효소, Vent DNA 중합효소 및 Bst DNA 중합효소로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 돌연변이 검출방법
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제1항에 있어서, 상기 (c) 단계의 DNA 절편의 생성유무는 MALDI-TOF MS((Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization - Time of Flight Mass Spectrometry))를 이용하여 확인하는 것을 특징으로 하는 돌연변이 검출방법
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제1항에 있어서, 상기 (c) 단계의 DNA 절편의 생성유무는 절단효소 증폭반응(Nicking Amplification)의 결과로 증폭된 DNA 절편과 상보적인 염기서열을 가지며, 형광물질(Fluorophore)와 소광제(Quencher)를 포함하는 분자 비콘(molecular beacon) 형태의 프로브를 이용하여 확인하는 것을 특징을 하는 돌연변이 검출방법
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(a) 중합효소연쇄반응(Polymerase Chain Reaction)으로 증폭된 표적 유전자의 증폭산물에 대하여, 표적 유전자의 5' 영역 및 3' 영역에 각각 상보적으로 결합하는 제 1 프로브 및 제 2 프로브를 사용하여 리가제 반응(Ligase reaction)을 수행하는 단계; (b) 상기 (a) 단계의 리가제 반응산물에 대해, 상기 반응산물에 포함된 제 1 프로브에 상보적으로 결합하는 절단효소 증폭 프라이머, 제 2 프로브의 절단효소 인식 염기서열을 인지하는 절단 효소 및 중합효소의 혼합용액을 첨가하고 절단효소 증폭반응(Nicking Amplification)을 수행하는 단계; 및(c) 상기 (b) 단계의 증폭반응에 의한 DNA 절편의 생성유무를 확인하여, 표적 유전자의 존재를 확인하는 단계는 방법을 포함하는 표적 유전자의 검출방법에 있어서,상기 제 1 프로브는 3' 말단에 절단효소 증폭반응을 위한 프라이머 혼성화 염기서열을 포함하고,상기 제 2 프로브는 5' 말단에 절단효소 인식 염기서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 표적 유전자의 검출방법
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제11항에 있어서, 상기 (a) 단계의 리가제 반응에 사용하는 효소는 90N 리가제, E
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제11항에 있어서, 상기 (b) 단계의 절단효소는 Nb
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제11항에 있어서, 상기 (b) 단계의 중합효소는 Klenow DNA 중합효소, Bsu DNA 중합효소, Vent DNA 중합효소 및 Bst DNA 중합효소로 구성된 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 표적 유전자의 검출방법
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제11항에 있어서, 상기 (c) 단계의 DNA 절편의 생성유무는 MALDI-TOF MS((Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization - Time of Flight Mass Spectrometry)를 이용하여 확인하는 것을 특징으로 하는 표적 유전자의 검출방법
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제11항에 있어서, 상기 (c) 단계의 DNA 절편의 생성유무는 절단효소 증폭반응(Nicking Amplification)의 결과로 증폭된 DNA 절편과 상보적인 염기서열을 가지며, 형광물질(Fluorophore)와 소광제(Quencher)를 포함하는 분자 비콘(molecular beacon) 형태의 프로브를 이용하여 확인하는 것을 특징으로 하는 표적 유전자의 검출방법
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