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i) 시험관 내(In vitro)에서 멘케스 병(Menkes disease) 환자로부터 분리된 섬유아세포(fibroblast)를 유도-만능 줄기 세포(induced pluripotent stem cells; iPSCs)로 유도하는 단계; 및ii) 상기 단계 i)에서 유도된 iPSC를 수득하는 단계를 포함하는, 시험관 내에서 멘케스 병 iPSC 모델의 제조 방법
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제 1항에 있어서, 상기 단계 i)의 유도는 다분화능 마커(pluripotent marker)의 이소성 발현(ectopic expression)을 사용하는 것을 특징으로 하는 시험관 내에서 멘케스 병 iPSC 모델의 제조 방법
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제 1항의 방법으로 제조된, 멘케스 병 iPSCs 모델
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제 3항에 있어서, 상기 iPSC는 하기 i) 내지 v) 중 어느 하나 이상을 특징으로 하는, 멘케스 병 iPSCs 모델;i) 정상 세포의 iPSC 형태;ii) OCT4, SOX2, C-MYC 및 KLF4로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 다분화능 마커 유전자의 발현;iii) OCT4, NANOG, SSEA4 및 TRA1-81로 구성된 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 줄기세포성 마커(stemness maeker) 단백질의 발현iv) ATP7A 유전자의 c4005+G003e#A 미스센스 변이; 및v) 세포질에 분산되는 ATP7A 단백질의 분포
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i) 제 3항의 iPSC로부터 배상체(embryoid body, EB), 신경구(neurospheres) 또는 신경돌기(neurites)로 분화를 유도하는 단계; 및ii) 상기 단계 i)에서 유도된 배상체의 분화능, 신경구 또는 조골세포의 특징을 분석하는 단계를 포함하는, iPSC를 멘케스 병의 모델로 사용하는 방법
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제 5항에 있어서, 상기 배상체는 하기 i) 내지 v) 중 어느 하나 이상을 특징으로 하는, iPSC를 멘케스 병의 모델로 사용하는 방법;i) 카데린 전환의 이상;ii) SNAIL, SLUG 및 TIWST1을 포함하는 상피-중배엽 전이(epithelial-mesenchymal transition; EMT) 조절 유전자 발현;iii) T 및 EOMES를 포함하는 중배엽(mesoderm) 마커 유전자 발현;iv) SOX17 및 GATA4를 포함하는 내배엽(endoderm) 마커 유전자 발현; 및v) PAX6 및 SOX1을 포함하는 신경외배엽(neuroectoderm) 마커 유전자 미발현
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제 5항에 있어서, 상기 신경구는 하기 i) 내지 iii) 중 어느 하나 이상을 특징으로 하는, iPSC를 멘케스 병의 모델로 사용하는 방법;i) 카데린 전환의 이상;ii) PAX6, SOX1 및 OTX2를 포함하는 초기 신경계 유전자 발현; 및iii) 비정상적인 로제트 내강(rosette lumen)의 형성
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제 5항에 있어서, 상기 신경돌기는 하기 i) 및 ii) 중 어느 하나 이상을 특징으로 하는, iPSC를 멘케스 병의 모델로 사용하는 방법;i) 카데린 전환의 이상 ; 및ii) MAP2 및 TUJ-1을 포함하는 신경돌기 마커 유전자 미발현
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제 6 내지 8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 카데린 전환의 이상은 E 카데린(E Cadherin, E CAD)로부터 N 카데린(N Cadherin, N CAD)로의 카데린 전환이 나타나지 않는 것을 특징으로 하는, iPSC를 멘케스 병의 모델로 사용하는 방법;
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제 5항에 있어서, 상기 유도는 자발적(spontaneous)인 유도 또는 유도 물질의 첨가로 인한 직접적(directed)인 유도 둘 중 어느 하나인 것을 특징으로 하는, iPSC를 멘케스 병의 모델로 사용하는 방법;
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i) 제 3항의 iPSC 모델에 피검 화합물 또는 피검 조성물을 처리하는 단계;ii) 상기 iPSC의 분화능 또는 분화된 세포의 특성을 분석하는 단계; 및iii) 상기 단계 ii)의 분석한 결과를 무처리 대조군과 비교하는 단계를 포함하는, 멘케스 병의 치료제 후보물질의 스크리닝 방법
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i) 제 3항의 iPSC 모델을 배상체, 신경구 또는 신경돌기로 분화를 유도하는 단계;ii) 상기 단계 i)의 유도된 배상체, 신경구 또는 신경돌기에 피검 화합물 또는 조성물을 처리하는 단계:iii) 상기 단계 ii)의 처리된 배상체, 신경구 또는 신경돌기의 특성을 분석하는 단계; 및iv) 상기 단계 iii)의 분석한 결과를 무처리 대조군과 비교하는 단계를 포함하는, 멘케스 병의 치료제 후보물질의 스크리닝 방법
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