요약 | 본 발명은 대장균 유래 ptsL 프로모터를 함유하는 재조합벡터 및 이를 이용한 외래 단백질의 생산방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 대장균 유래 ptsL 프로모터 및 외래 단백질을 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합벡터가 도입된 형질전환체를 이용하여 외래 단백질을 세포 성장 정지기에 선택적으로 발현시키는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면 성장 정지기에 자동 발현되는 ptsL 프로모터를 이용하여 외래 단백질이나 펩타이드를 성장 정지기에 효율적으로 발현시킬 수 있고, 특정 유도체 없이 성장기에 따라 자동으로 발현되므로 경제적이며, 고농도 배양에서의 낮은 발현 효율 문제를 해결하는데 유용하다. ptsL 프로모터, 성장 정지기 발현, 발현 억제 단백질, 유해 단백질, 항미생물 펩타이드 |
---|---|
Int. CL | C12N 15/66 (2006.01) C12N 15/09 (2006.01) C12N 15/10 (2006.01) |
CPC | C07K 14/245(2013.01) C07K 14/245(2013.01) C07K 14/245(2013.01) C07K 14/245(2013.01) C07K 14/245(2013.01) |
출원번호/일자 | 1020070082686 (2007.08.17) |
출원인 | 한국과학기술원 |
등록번호/일자 | 10-0963302-0000 (2010.06.04) |
공개번호/일자 | 10-2009-0018315 (2009.02.20) 문서열기 |
공고번호/일자 | (20100611) 문서열기 |
국제출원번호/일자 | |
국제공개번호/일자 | |
우선권정보 | |
법적상태 | 소멸 |
심사진행상태 | 수리 |
심판사항 | |
구분 | |
원출원번호/일자 | |
관련 출원번호 | |
심사청구여부/일자 | Y (2007.08.17) |
심사청구항수 | 24 |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 한국과학기술원 | 대한민국 | 대전광역시 유성구 |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 이상엽 | 대한민국 | 대전시 유성구 |
2 | 박태정 | 대한민국 | 대전시 서구 |
3 | 정순 | 중국 | 대전시 유성구 |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 이처영 | 대한민국 | 서울특별시 강남구 언주로 ***, **층 (역삼동, 윤익빌딩)(*T국제특허법률사무소) |
번호 | 이름 | 국적 | 주소 |
---|---|---|---|
1 | 한국과학기술원 | 대한민국 | 대전광역시 유성구 |
번호 | 서류명 | 접수/발송일자 | 처리상태 | 접수/발송번호 |
---|---|---|---|---|
1 | [특허출원]특허출원서 [Patent Application] Patent Application |
2007.08.17 | 수리 (Accepted) | 1-1-2007-0594645-93 |
2 | 선행기술조사의뢰서 Request for Prior Art Search |
2008.05.13 | 수리 (Accepted) | 9-1-9999-9999999-89 |
3 | 선행기술조사보고서 Report of Prior Art Search |
2008.06.13 | 수리 (Accepted) | 9-1-2008-0038262-12 |
4 | 의견제출통지서 Notification of reason for refusal |
2009.06.30 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2009-0275463-57 |
5 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 [Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation) |
2009.08.28 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0529703-10 |
6 | 의견제출통지서 Notification of reason for refusal |
2009.12.30 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2009-0535785-75 |
7 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 [Opinion according to the Notification of Reasons for Refusal] Written Opinion(Written Reply, Written Substantiation) |
2010.03.02 | 수리 (Accepted) | 1-1-2010-0133186-96 |
8 | [명세서등 보정]보정서 [Amendment to Description, etc.] Amendment |
2010.03.02 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2010-0133207-67 |
9 | 등록결정서 Decision to grant |
2010.05.31 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2010-0234344-41 |
10 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2013.02.01 | 수리 (Accepted) | 4-1-2013-5019983-17 |
11 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2014.12.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5157968-69 |
12 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2014.12.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5158129-58 |
13 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2014.12.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5157993-01 |
14 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2019.04.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2019-5081392-49 |
15 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2020.05.15 | 수리 (Accepted) | 4-1-2020-5108396-12 |
16 | 출원인정보변경(경정)신고서 Notification of change of applicant's information |
2020.06.12 | 수리 (Accepted) | 4-1-2020-5131486-63 |
번호 | 청구항 |
---|---|
1 |
1 대장균(Escherichia coli) 유래 ptsL 프로모터 및 외래 단백질을 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
2 |
2 제1항에 있어서, 상기 ptsL 프로모터는 서열번호 1의 염기서열을 가지는 ptsL 프로모터 활성체(activator)를 코딩하는 DNA를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
3 |
3 대장균(Escherichia coli) 유래 ptsL 프로모터, ptsL 유전자의 발현 조절 단백질을 코딩하는 유전자, 상기 발현 조절 단백질을 코딩하는 유전자의 발현용 프로모터 및 외래 단백질을 코딩하는 유전자를 함유하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
4 |
4 제3항에 있어서, 상기 ptsL 프로모터는 서열번호 1의 염기서열을 가지는 ptsL 프로모터 활성체(activator)를 코딩하는 DNA를 포함하는 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
5 |
5 제3항에 있어서, 상기 ptsL 유전자의 발현 조절 단백질을 코딩하는 유전자는 ptsL 유전자의 발현 억제 단백질을 코딩하는 유전자(mlc)인 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
6 |
6 제5항에 있어서, 상기 mlc 유전자는 서열번호 2의 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
7 |
7 제3항에 있어서, 상기 발현 조절 단백질을 코딩하는 유전자의 발현용 프로모터는 BAD 프로모터인 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
8 |
8 제7항에 있어서, 상기 BAD 프로모터는 서열번호 3의 염기서열을 가지는 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
9 |
9 제1항 또는 제3항에 있어서, 상기 외래 단백질은 펩타이드, 폴리펩타이드, 결합 단백질, 결합도메인, 부착 단백질, 구조 단백질, 조절 단백질, 독소 단백질, 효소, 효소저해제, 호르몬, 호르몬 유사체, 항체, 신호 전달 단백질, 단쇄 항체, 항원, 사이토카인, 조절 인자 및 그 일부로 구성된 그룹으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
10 |
10 제9항에 있어서, 상기 펩타이드는 항미생물 펩타이드인 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
11 |
11 제10항에 있어서, 상기 항미생물 펩타이드는 뷰포린 Ⅱ(BuforinⅡ) 또는 인돌리시딘(indolicidin)인 것을 특징으로 하는 재조합벡터를 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
12 |
12 제1항 또는 제2항의 재조합벡터로 형질전환된 재조합 미생물을 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
13 |
13 제12항에 있어서, 형질전환에 사용된 미생물은 외래 단백질의 세포 내 과발현에 유리하도록, 발현된 외래 단백질에 분해하는데 관련된 세포 내 또는 세포 외의 단백질 분해효소를 생산하지 못하도록 변형된 것임을 특징으로 하는 재조합 미생물을 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
14 |
14 제3항 내지 제8항 중 어느 한 항의 재조합벡터로 형질전환된 재조합 미생물을 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
15 |
15 제14항에 있어서, 형질전환에 사용된 미생물은 외래 단백질의 세포 내 과발현에 유리하도록, 발현된 외래 단백질에 분해하는데 관련된 세포 내 또는 세포 외의 단백질 분해효소를 생산하지 못하도록 변형된 것임을 특징으로 하는 형질전환된 재조합 미생물을 포함하는 외래 단백질의 발현용 조성물 |
16 |
16 제12항의 재조합 미생물을 배양하여 외래 단백질을 성장 정지기에 발현시키는 단계; 및 상기 발현된 외래 단백질을 회수하는 단계를 포함하는 외래 단백질의 제조방법 |
17 |
17 제16항에 있어서, 상기 외래 단백질은 펩타이드, 폴리펩타이드, 결합 단백질, 결합도메인, 부착 단백질, 구조 단백질, 조절 단백질, 독소 단백질, 효소, 효소저해제, 호르몬, 호르몬 유사체, 항체, 신호 전달 단백질, 단쇄 항체, 항원, 사이토카인, 조절 인자 및 그 일부로 구성된 그룹으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방법 |
18 |
18 제17항에 있어서, 상기 펩타이드는 항미생물 펩타이드인 것을 특징으로 하는 방법 |
19 |
19 제14항의 재조합 미생물을 배양하여 외래 단백질을 성장 정지기에 발현시키는 단계; 및 상기 발현된 외래 단백질을 회수하는 단계를 포함하는 외래 단백질의 제조방법 |
20 |
20 제19항에 있어서, 상기 외래 단백질은 펩타이드, 폴리펩타이드, 결합 단백질, 결합도메인, 부착 단백질, 구조 단백질, 조절 단백질, 독소 단백질, 효소, 효소저해제, 호르몬, 호르몬 유사체, 항체, 신호 전달 단백질, 단쇄 항체, 항원, 사이토카인, 조절 인자 및 그 일부로 구성된 그룹으로부터 선택되는 어느 하나인 것을 특징으로 하는 방법 |
21 |
21 제20항에 있어서, 상기 펩타이드는 항미생물 펩타이드인 것을 특징으로 하는 방법 |
22 |
22 다음 단계를 포함하는 외래 단백질의 개량방법: (a) 외래 단백질을 코딩하는 유전자의 변이체 라이브러리를 구축하는 단계; (b) 상기 외래 단백질의 변이체가 ptsL 프로모터를 코딩하는 유전자에 의해 발현되도록, 대장균 유래 ptsL 프로모터 및 외래 단백질을 코딩하는 유전자 변이체 라이브러리를 함유하는 유전자 재조합체 라이브러리를 제작하는 단계; (c) 상기 유전자 재조합체 라이브러리 또는 상기 유전자 재조합체 라이브러리를 포함하는 벡터로 그람음성균, 그람양성균, 방선균, 효모 및 곰팡이로 구성된 그룹으로부터 선택되는 미생물 숙주세포를 형질전환하는 단계; (d) 상기 형질전환된 숙주세포를 배양하여 상기 유전자 변이체 라이브러리를 세포 성장 정지기에 발현하는 단계; 및 (e) 개량된 형질을 갖는 외래 단백질이 발현된 세포를 스크리닝하는 단계 |
23 |
23 다음 단계를 포함하는 외래 단백질의 개량방법: (a) 외래 단백질을 코딩하는 유전자의 변이체 라이브러리를 구축하는 단계; (b) 상기 외래 단백질의 변이체가 ptsL 프로모터를 코딩하는 유전자에 의해 발현되도록, 대장균 유래 ptsL 프로모터, ptsL 유전자의 발현 조절 단백질을 코딩하는 유전자, 상기 발현 조절 단백질을 코딩하는 유전자의 발현용 프로모터 및 외래 단백질을 코딩하는 유전자 변이체 라이브러리를 함유하는 유전자 재조합체 라이브러리를 제작하는 단계; (c) 상기 유전자 재조합체 라이브러리 또는 상기 유전자 재조합체 라이브러리를 포함하는 벡터로 그람음성균, 그람양성균, 방선균, 효모 및 곰팡이로 구성된 그룹으로부터 선택되는 미생물 숙주세포를 형질전환하는 단계; (d) 상기 형질전환된 숙주세포를 배양하여 상기 유전자 변이체 라이브러리를 세포 성장 정지기에 발현하는 단계; 및 (e) 개량된 형질을 갖는 외래 단백질이 발현된 세포를 스크리닝하는 단계 |
24 |
24 제22항 또는 제23항에 있어서, 상기 스크리닝 단계는 외래 단백질의 활성, 외래 단백질에 라벨링된 물질을 인식하는 단백질, 외래 단백질에 결합하는 라벨링된 리간드 또는 외래 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 이용하는 것을 특징으로 하는 외래 단백질의 개량방법 |
지정국 정보가 없습니다 |
---|
패밀리정보가 없습니다 |
---|
국가 R&D 정보가 없습니다. |
---|
특허 등록번호 | 10-0963302-0000 |
---|
표시번호 | 사항 |
---|---|
1 |
출원 연월일 : 20070817 출원 번호 : 1020070082686 공고 연월일 : 20100611 공고 번호 : 특허결정(심결)연월일 : 20100531 청구범위의 항수 : 24 유별 : C12N 15/66 발명의 명칭 : 대장균 유래 ptsL 프로모터를 함유하는 재조합벡터 및이를 이용한 외래 단백질의 제조방법 존속기간(예정)만료일 : 20160605 |
순위번호 | 사항 |
---|---|
1 |
(권리자) 한국과학기술원 대전광역시 유성구... |
제 1 - 3 년분 | 금 액 | 490,500 원 | 2010년 06월 07일 | 납입 |
제 4 년분 | 금 액 | 568,000 원 | 2013년 05월 30일 | 납입 |
제 5 년분 | 금 액 | 568,000 원 | 2014년 05월 21일 | 납입 |
제 6 년분 | 금 액 | 397,600 원 | 2015년 05월 26일 | 납입 |
번호 | 서류명 | 접수/발송일자 | 처리상태 | 접수/발송번호 |
---|---|---|---|---|
1 | [특허출원]특허출원서 | 2007.08.17 | 수리 (Accepted) | 1-1-2007-0594645-93 |
2 | 선행기술조사의뢰서 | 2008.05.13 | 수리 (Accepted) | 9-1-9999-9999999-89 |
3 | 선행기술조사보고서 | 2008.06.13 | 수리 (Accepted) | 9-1-2008-0038262-12 |
4 | 의견제출통지서 | 2009.06.30 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2009-0275463-57 |
5 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 | 2009.08.28 | 수리 (Accepted) | 1-1-2009-0529703-10 |
6 | 의견제출통지서 | 2009.12.30 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2009-0535785-75 |
7 | [거절이유 등 통지에 따른 의견]의견(답변, 소명)서 | 2010.03.02 | 수리 (Accepted) | 1-1-2010-0133186-96 |
8 | [명세서등 보정]보정서 | 2010.03.02 | 보정승인간주 (Regarded as an acceptance of amendment) | 1-1-2010-0133207-67 |
9 | 등록결정서 | 2010.05.31 | 발송처리완료 (Completion of Transmission) | 9-5-2010-0234344-41 |
10 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2013.02.01 | 수리 (Accepted) | 4-1-2013-5019983-17 |
11 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2014.12.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5157968-69 |
12 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2014.12.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5158129-58 |
13 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2014.12.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2014-5157993-01 |
14 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2019.04.24 | 수리 (Accepted) | 4-1-2019-5081392-49 |
15 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2020.05.15 | 수리 (Accepted) | 4-1-2020-5108396-12 |
16 | 출원인정보변경(경정)신고서 | 2020.06.12 | 수리 (Accepted) | 4-1-2020-5131486-63 |
기술정보가 없습니다 |
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과제고유번호 | 1355048365 |
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세부과제번호 | kaist66 |
연구과제명 | 신약후보발굴및시스템생명공학기술개발 |
성과구분 | 출원 |
부처명 | 교육과학기술부 |
연구관리전문기관명 | 과학기술부 |
연구주관기관명 | 한국과학기술원 |
성과제출연도 | 2007 |
연구기간 | 200701~200712 |
기여율 | 0.5 |
연구개발단계명 | 기초연구 |
6T분류명 | BT(생명공학기술) |
과제고유번호 | 1355048719 |
---|---|
세부과제번호 | 2005-00364 |
연구과제명 | 대사회로분석을통한가상세포시스템개발및산업,의학적응용기술개발 |
성과구분 | 출원 |
부처명 | 교육과학기술부 |
연구관리전문기관명 | 한국과학재단 |
연구주관기관명 | 한국과학기술원 |
성과제출연도 | 2007 |
연구기간 | 200306~201203 |
기여율 | 0.5 |
연구개발단계명 | 응용연구 |
6T분류명 | BT(생명공학기술) |
과제고유번호 | 1415108965 |
---|---|
세부과제번호 | KI001717 |
연구과제명 | 휴대단말용 잔류농약 검출 생화학 센서 시스템 개발 |
성과구분 | 등록 |
부처명 | 지식경제부 |
연구관리전문기관명 | 한국산업기술평가관리원 |
연구주관기관명 | 한국과학기술원 |
성과제출연도 | 2010 |
연구기간 | 200703~201102 |
기여율 | 1 |
연구개발단계명 | 개발연구 |
6T분류명 | IT(정보기술) |
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[KST2015112429][한국과학기술원] | 탄저균의 포자외막 단백질을 이용한 목적단백질의 미생물표면발현방법 | 새창보기 |
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[KST2015114935][한국과학기술원] | 세포내 전달을 위한 올리고뉴클레오티드와 친수성 고분자로 구성되는 유전자 전달용 접합체, 고분자 전해질 복합 미셀 및 그의 제조방법 | 새창보기 |
[KST2015118468][한국과학기술원] | OmpF와 인체 유래 상피세포성장인자의 동시 발현을통한 인체 유래 상피세포성장인자의 세포외 분비·생산 방법 | 새창보기 |
[KST2015112975][한국과학기술원] | 염색체 특정 부위 제거용 재조합 벡터 및 이를 이용한미생물 내 염색체 특정 부위의 제거방법 | 새창보기 |
[KST2015119434][한국과학기술원] | SDL-PCR을 이용한 유전자 분석방법 | 새창보기 |
[KST2018005996][한국과학기술원] | SoxRS 변이체를 함유하는 유전자 회로 및 이의 초고속 탐색방법(Genetic Circuit Containg SoxRS varient and Screening Method of thereof) | 새창보기 |
[KST2015112433][한국과학기술원] | 1,4―butanediol〔1,4―BDO〕생성능을가지는 변이체 및 이를 이용한 1,4―BDO의 제조방법 | 새창보기 |
[KST2015114487][한국과학기술원] | 파킨슨병 치료제 효과 검증 모델 동물로서의 SR 결핍 생쥐 | 새창보기 |
[KST2014065452][한국과학기술원] | 인-실리코 분석을 통한 균주 개량방법 | 새창보기 |
[KST2015113238][한국과학기술원] | 수크로오스 대사능을 가지는 재조합 미생물 | 새창보기 |
[KST2015117428][한국과학기술원] | 번역 동반 시스템을 이용한 항균 펩타이드의 대량 발현방법 | 새창보기 |
[KST2015112390][한국과학기술원] | OmpF와 목적단백질의 동시 발현을 통한 목적 단백질의세포외 분비·생산 방법 | 새창보기 |
[KST2023003439][한국과학기술원] | Cas13 단백질의 활성 조절을 통한 RNA 발현 조절 또는 편집 방법 | 새창보기 |
[KST2015229186][한국과학기술원] | 합성 조절 sRNA를 이용한 유전자 발현 미세조절 방법(Method for Fine-Tuning Gene Expression Using Synthetic Regulatory Small RNA) | 새창보기 |
[KST2015118205][한국과학기술원] | ArtJ,OsmY 또는 FkpA를 이용한 목적 단백질의세포 외 분비생산 방법 | 새창보기 |
[KST2015117743][한국과학기술원] | 소포체 스트레스에 반응하는 애기장대 AtbZIP28유전자 및 이의 용도 | 새창보기 |
[KST2015114386][한국과학기술원] | 트레할로스 생합성에 관여하는 유전자로 형질전환된 균주를 이용한 트레할로스의 제조방법 | 새창보기 |
[KST2015112725][한국과학기술원] | 부위특이적 변이에 의해 제조된 고수율의 L-쓰레오닌생산균주 및 이를 이용한 L-쓰레오닌의 제조방법 | 새창보기 |
[KST2015113225][한국과학기술원] | 베타-프룩토퓨라노시다제가 도입된 수크로오스 대사능을 가지는 재조합 미생물 | 새창보기 |
[KST2015113894][한국과학기술원] | 유전자 서열이 알려지지 않은 세포의 특정 영역 서열만을 클로닝하는 방법 | 새창보기 |
[KST2015117133][한국과학기술원] | 게놈 수준에서의 클루이베로마이세스 마르시아누스의 대사 네트워크 모델 및 이를 이용한 3HP 생산에 대한 대사특성분석 방법 | 새창보기 |
[KST2015114832][한국과학기술원] | 본태성 진전증 유발 α1/CaV3.1 이중 녹아웃 마우스 및 이의 제조 방법 | 새창보기 |
[KST2015118873][한국과학기술원] | 클로스트리듐 속 미생물 유전자를 불활성화시키는 방법 | 새창보기 |
[KST2015111380][한국과학기술원] | 서브틸리신J의열안정성돌연변이체및그의제조방법 | 새창보기 |
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[KST2015117677][한국과학기술원] | 특정 아미노산의 tRNA와의 동시 발현을 통한 특정 아미노산 함량이 높은 단백질의 제조방법 | 새창보기 |
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[KST2015112210][한국과학기술원] | 대장균의 외막 단백질을 이용한 목적 단백질의 미생물표면발현 방법 | 새창보기 |
[KST2019010294][한국과학기술원] | 다공성 복합 나노구조체를 이용한 바이오물질의 포집 및 진단 시스템 및 방법 | 새창보기 |
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