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유비퀴틴을 이용한 아밀로이드-베타 펩티드의 제조방법

  • 기술번호 : KST2015173962
  • 담당센터 : 광주기술혁신센터
  • 전화번호 : 062-360-4654
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요약, Int. CL, CPC, 출원번호/일자, 출원인, 등록번호/일자, 공개번호/일자, 공고번호/일자, 국제출원번호/일자, 국제공개번호/일자, 우선권정보, 법적상태, 심사진행상태, 심판사항, 구분, 원출원번호/일자, 관련 출원번호, 기술이전 희망, 심사청구여부/일자, 심사청구항수의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 서지정보 표입니다.
요약 본 발명은 유비퀴틴(ubiquitin)을 융합 파트너 단백질로 이용한 아밀로이드-베타(amyloid-β) 펩티드의 신규한 제조방법에 관한 것으로, 구체적으로 1) 아밀로이드-베타 펩티드 유전자를 유비퀴틴 유전자의 3'-말단에 연결시킨 융합유전자를 포함하는 발현벡터를 제조하는 단계; 2) 상기 발현벡터를 숙주세포에 도입하여 형질전환체를 제조하는 단계; 3) 상기 형질전환체로부터 유비퀴틴-아밀로이드-베타 펩티드 융합단백질을 발현시켜 정제하는 단계; 4) 상기 융합단백질에 유비퀴틴 절단효소를 처리하여 융합단백질로부터 아밀로이드-베타 펩티드를 분리하는 단계; 및 5) 상기에서 분리된 아밀로이드 베타 펩티드를 효소 반응액으로부터 정제하는 단계를 포함하는, 아밀로이드-베타 펩티드의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 제조방법은 유비퀴틴을 융합 파트너 단백질로 이용하여 아밀로이드-베타 펩티드의 화학적 합성시 불용성 및 응집성으로 인한 저수율, 고비용 및 구조적 안정성 저하 등의 문제점을 해결한 것으로 아밀로이드-베타 펩티드를 효율적으로 대량 생산하는데 유용하게 사용될 수 있다.
Int. CL C12P 21/02 (2006.01) C12N 15/00 (2006.01)
CPC
출원번호/일자 1020050050824 (2005.06.14)
출원인 광주과학기술원
등록번호/일자 10-0621354-0000 (2006.08.31)
공개번호/일자
공고번호/일자 (20060908) 문서열기
국제출원번호/일자
국제공개번호/일자
우선권정보
법적상태 소멸
심사진행상태 수리
심판사항
구분
원출원번호/일자
관련 출원번호
심사청구여부/일자 Y (2005.06.14)
심사청구항수 7

출원인

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번호 이름 국적 주소
1 광주과학기술원 대한민국 광주광역시 북구

발명자

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번호 이름 국적 주소
1 유영준 대한민국 광주 광산구
2 이은경 대한민국 광주 북구

대리인

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번호 이름 국적 주소
1 오규환 대한민국 서울특별시 강남구 강남대로 ***, ****호 (역삼동, 유니온센터)(리제특허법률사무소)
2 장성구 대한민국 서울특별시 서초구 마방로 ** (양재동, 동원F&B빌딩)(제일특허법인(유))

최종권리자

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번호 이름 국적 주소
1 광주과학기술원 대한민국 광주광역시 북구
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번호 서류명 접수/발송일자 처리상태 접수/발송번호
1 특허출원서
Patent Application		 2005.06.14 수리 (Accepted) 1-1-2005-0312902-17
2 공지예외적용주장대상(신규성,출원시의특례)증명서류제출서
Submission of Document Verifying Exclusion from Being Publically Known (Novelty, Special Provisions for Application)		 2005.06.15 수리 (Accepted) 1-1-2005-5073727-77
3 선행기술조사의뢰서
Request for Prior Art Search		 2006.03.15 수리 (Accepted) 9-1-9999-9999999-89
4 선행기술조사보고서
Report of Prior Art Search		 2006.04.14 수리 (Accepted) 9-1-2006-0026966-30
5 등록결정서
Decision to grant		 2006.08.23 발송처리완료 (Completion of Transmission) 9-5-2006-0485422-07
6 [대리인선임]대리인(대표자)에 관한 신고서
[Appointment of Agent] Report on Agent (Representative)		 2007.08.08 수리 (Accepted) 1-1-2007-0575302-58
7 출원인정보변경(경정)신고서
Notification of change of applicant's information		 2011.09.15 수리 (Accepted) 4-1-2011-5187089-85
번호, 청구항의 정보를 제공하는 이전대상기술 뷰 페이지 상세정보 > 청구항 표입니다.
번호 청구항
1 1
1) 아밀로이드-베타 펩티드 유전자를 유비퀴틴 유전자의 3'-말단에 연결시킨 융합유전자를 포함하는 발현벡터를 제조하는 단계;2) 상기 발현벡터를 숙주세포에 도입하여 형질전환체를 제조하는 단계;3) 상기 형질전환체로부터 유비퀴틴-아밀로이드-베타 펩티드 융합단백질을 발현시켜 정제하는 단계;4) 상기 융합단백질에 유비퀴틴 절단효소를 처리하여 융합단백질로부터 아밀로이드-베타 펩티드를 분리하는 단계; 및5) 상기에서 분리된 아밀로이드 베타 펩티드를 효소 반응액으로부터 정제하는 단계를 포함하는, 아밀로이드-베타 펩티드의 제조방법
2 2
제 1 항에 있어서, 단계 1)의 아밀로이드-베타 펩티드가 서열번호: 11로 기재되는 아미노산 서열에서 N-말단으로부터 28개 내지 43개의 아미노산으로 구성된 것임을 특징으로 하는 제조방법
3 3
제 1항에 있어서,단계 1)의 발현벡터가 원핵세포에서 목적 단백질을 발현시킬 수 있는 벡터인 것을 특징으로 하는 제조방법
4 4
제 1항에 있어서, 단계 2)의 숙주세포가 원핵세포인 것을 특징으로 하는 제조방법
5 5
제 1항에 있어서, 단계 3)에서 융합단백질이 유비퀴틴의 카복시 말단에는 아밀로이드-베타 펩티드가, 아미노 말단에는 6개의 히스티딘-태그가 결합된 형태인 것을 특징으로 하는 제조방법
6 6
제 1항에 있어서, 단계 3)에서 융합단백질의 정제가1) 형질전환체 배양액을 수확하고 파쇄한 후 원심분리하여 침전물 분획을 회수하는 단계;2) 상기 침전물 분획에 4 내지 8 M 우레아가 포함되어 있는 완충용액을 가하여 불용성 단백질을 용해시킨 후 원심분리하여 상등액을 회수하는 단계; 3) 상기 상등액을 우레아 함유 완충용액을 이용한 Ni-NTA 친화성 크로마토그래피(affinity chromatography)에 걸어 융합단백질을 Ni-NTA 수지에 흡착시키는 단계; 4) 융합단백질이 Ni-NTA 수지에 흡착된 상태에서 우레아를 제거하는 단계; 및5) Ni-NTA 수지로부터 이미다졸 함유 완충용액을 이용하여 흡착된 융합단백질을 용출하는 단계에 의해 이루어지는 것을 특징으로 하는 제조방법
7 7
제 1항에 있어서, 단계 5)에서는 단계 4)에서 유비퀴틴 절단효소로 절단된 융합단백질의 효소 반응액을 역상 크로마토그래피에 걸어 아밀로이드-베타 펩티드만을 정제하는 것을 특징으로 하는 제조방법
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1 US2006281901 US 미국 DOCDBFAMILY
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